Centro Interdisciplinar de Investigação Bioquímica ( CIIB)

Y
 
 
 
 



 


  
  


Nome: Camila Maria Prado Alonso

Bolsista UMC
Orientadora: Profª Dra. Iseli Lourenço Nantes
Co-orientador: Juliana Mafra Machado Nunweiler
Colaborador: Prof. Dr. Nelson Durán
Área de conhecimento: Bioquímica
INTRODUÇÃO

Pigmento produzido pela bactéria

!


  


r ibe múltiplas ações biológicas:

å Potencial citotóxico
å Atividade pró-apoptótica
å Ação antibiótica
å Ação antichagásica
å Fraca atividade viral
å Propriedades antiulcerogênicas


Y  m strutura química da Violaceína

INTRODUÇÃO
å ±adical livre (Haliwell,1987)

åO igênio singlete
 INTRODUÇÃO
LIPOP ROXIDAÇÃO

 Y

    
  
 





     

 rstas seqüências de
reações geram
diferentes subprodutos
derivados de lipídeos.


Y  m Peroxidação lipídica: uma reação em cadeia. Fonte:

Halliwell & Gutteridge

 OBJ TIVOS

 !


      

  
     

 
     


MAT RIAIS MÉTODOS

å ïedidas de absorção : espectrofotômetro Shimadzu

MultiSpec-1501

å Ynálises de infravermelho: espectrofotômetro

infravermelho Perkin Elmer, Modelo Spectrum 100
utilizando a técnica de ATR com placa de SeZn .

å ïétodo colorimétrico: dosagem de TBARs pelo método

ácido tiobarbitúrico (TBA) e dosagem de peróxidos de
lipídeos (método FOX)

å ïedidas de consumo de o igênio °oxígrafo equipado

com um eletrodo do tipo Clark ( Hansatech Instruments)
R SULTADOS DISCUSSÃO
Y
 
   O

Ä erivados de lipídeos o idados ( )

1,0 1,0
Äerivados Lipídeos O idados ( )

LOOH
LOOH

2 TBARs

TBARs *
0,5 0,5
*
1
*
*
0,0 * 0,0
0

+B l

+B l
le

le
+B l

+B l
c i itc

c i itc

T
itc v io

nt -

itc v io

--
T

T
io

io
-
H

H
ro

ro
H

H
+c

+v

+c

+v
--

--

+c c+

+c c+
itc

l
c
ole

ole

nt
vio

vio
itc

citc
cit

co

co
t

t
+c

+c
ntr

ntr
l+

l+
co

co
vio

vio


YY feito da Violaceína 4 ȝM na dosagem de peróxido lipídico e substâncias reativas de ácido tiobarbitúrico(TBARS)
em lipossomos (0,5 mM de PC50%CL20%P
0%  feito da Violaceína 4 ȝM na dosagem substâncias reativas de ácido
tiobarbitúrico(TBARS) e hidroperóxidos em membranas mitocondriais.(*) p< o,o5; significantemente diferente do controle positivo.
R SULTADOS DISCUSSÃO
Y
 
   O

0.3
0 ,2 5

Ë

A
0 ,2 0

l i )
0 ,1 5

0 ,1 0





0 ,0 5

ËË
Absorbância

i (

0 ,0 0

375 00 25 50 75


C o m p rim e n to d e o n d a (n m )

0.2 

i



Ë


B 

s


0.01
0.00
00 Ë
Ë Ë
ËË
Ë ËË  Ë ËË
Comprimento de onda (nm)
T    (s)


 
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 "  *+
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 ,+-./+0./12,*./    & 


 

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 3

%
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R SULTADOS DISCUSSÃO
(



Y
 

9 
x i

B

) 


A * 
í

T s

*
li

* *
* *
ri

T
l

l
Ë Ë
i

i
l

l
T

T
Ä

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tr

--

tr

--






c

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.5-)
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*. !  6 7.5.-8  






  

R SULTADOS DISCUSSÃO
Y
 
 :


5 



"
!


3 ,0
5

2 ,5

B


P e r ó x i d o d e l i p í d e o
M
Concentração de peróxido

2 ,0

1 ,5

2
1 ,0

1 0 ,5

0 0 ,0
CN AM AM + viol CN + viol CN CP C P + v io l C N + v io l CN e CP e

1,0
(A) feito da violaceína na dosagem de peróxidos em
lipossomos PC50%CL20%DOP
0% na presença de
C azul de melileno.
Peróxido de lipídeo M

0,5
(B) feito da violaceína na dosagem de hidroperóxidos
em membranas mitocondriais na presença de hemina

base livre .
0,0 (C) feito da violaceína na dosagem de hidroperóxidos em
ol ol
C
N
A
n at
a se

C
P
+
vi
C
N
+
vi
lipossomos PC50%CL20%DOP
0% na presença de
anatase.
R SULTADOS DISCUSSÃO
Para estudar o mecanismo de atividade antio idante

N-H C=O
1,0
O-H
0,8

0,6
A
250
Ybsorbância

0,
19
128

0,2
500

19
0,0

-0,2

00 500 600 700 800

Comprimento de onda nm

Ë,Ë

Ë,Ë

B C=O
Ë,Ë
C=C
Ë,Ë
Y 

112 1690
Ë,Ë

1600
Ë,ËË

-Ë,Ë


ËË ËË
ËË


ri t

 


Y;Y
: spectros UV-vis de violaceína em D2
O em atmosfera normal antes de irradiar (linha verde ) e
depois de 15minutos de irradiação (linha vermelha ), e
violaceína irradiada em atmosfera inerte ( linha preta) A:
espectro normalizado

Y .< spectros de infravermelho de absorbância de violaceína em
atmosfera normal sem irradiar ( linha verde ), corante em atmosfera normal
após a irradiação ( linha rosa ) , e a linha azul representa a violaceína
irradiada em atmosfera inerte.
 CONCLUSÃO
å A violaceína é capaz de
sensibilizar oxigênio molecular
e gerar oxigênio singlete.
å Captadora de oxigênio singlete
e também de espécies
radicalares.
å As reações com espécies pro-
oxidantes resultam em perda
de ligações,e produtos
fragmentação e oxidação
å A ação do corante como
antioxidante contra espécies
eletronicamente excitadas não
é tão eficiente em relação aos
modelos de dano gerados por
mecanismo radicalar.
AGRAD CIM NTOS

Orientadora Prof.ª Ära. Iseli Lourenço Nantes, co-

orientadora Juliana ïafra e Prof. Är. Yntonio Carlos F.
Caires.

Yos pesquisadores, colaboradores e aos colegas do

CIIB (Centro Interdisciplinar em Investigação
Bioquímica)

FYPr
P , CNPq, FYrP-UïC.