Las enteroparasitosis

humanas y la
importancia de su
diagnóstico
El problema……
• En salud pública: por su alta prevalencia y por estar ligada a
enfermedades secundarias.
• Protozoarios más frecuentes: Entamoeba coli, Giardia
lamblia, Cryptosporidium hominis (Blastocystis).
• Helmintos más frecuentes: Ascaris lumbricoiodes, Trichuris
trichiura, Hymenolepis nana, Taenia spp., Diphyllobothriuim
pacificum
• OMS: 1/5 de la población mundial enteroparásitos
• En SA el 34 % de las personas están parasitadas.
• Uno de los problemas importantes, el diagnóstico.
 Tabla 1. Resultados del examen parasitológico de 15
Laboratorios de Análisis Clínicos Privados de Trujillo a las
alícuotas de una misma muestra de heces contiendo cinco
agentes parasitarios.

Agente Parasitario Positivos Negativos

Nύmero % Nύmero %

Quiste de Giardia lamblia 14 93 1 7

Huevo de Diphyllobotrium pacificum 1 7 14 93

Huevo de Ancylostomideo 0 0 15 100

Larva de Strongyloides stercoralis 0 0 15 100

Ooquiste de Cryptosporidium 0 0 15 100

Técnicas parasitológicas utilizadas en
los laboratorios de Trujillo

• Examen directo en fresco con SSF y lugol

• Técnicas de concentración
- Baerman en copa
- Teleman
- Willis
- Faust
Personal que realiza exámenes
parasitológicos en Trujillo

Profesional %

Biólogo 61.0

Técnico de Laboratorio 33.0

Tecnólogos 03.0

Médicos 01.0

Otros 02.0
En conclusión….
• Resultados de análisis no confiables.
• El personal que realiza los análisis, mayormente son
biólogos
• Las técnicas utilizadas para realizar los análisis no son
uniformes.
• Procedimientos no documentados
• Técnicas no validadas y sin controles de calidad
• Equipos no calibrados.
Validación….

Confirmación mediante el suministro de evidencia objetiva de

que se han cumplido los requisitos para una utilización o
aplicación específica prevista.
NTP-ISO 9000:2000
¿Porqué validar?
• Exigencia Nacional e Internacional.
• Evita repeticiones.
• Para ser competitivos.
Exactitud
Precisión
CALIDAD Sensibilidad
Especificidad
COMPETITIVIDAD

Robustez

Rapidez
PRODUCTIVIDAD Costo
Personal

VALOR
Asistencia al cliente
AÑADIDO
¿ Qué es validar un método ?

Realizar pruebas para comprobar aspectos del

comportamiento del método y establecer que sirve para
el fin previsto ( Todo esto debe ser documentado y
archivado.
¿ Para qué ?
Resultados confiables

¿ Cuándo ?

¿ Cómo ?
Un método de ensayo validado es….
Método de ensayo aceptado para el que se han llevado a cabo
estudios de validación (desempeño) con el fin de determinar
su precisión y fiabilidad para un propósito específico.
(Referencia: ICCVAM Guidelines for the nomination and
submission of new, revised and alternative test methods,
2003).

El laboratorio debe usar los métodos y

procedimientos más apropiados dentro de su
alcance para todos los ensayos (ISO 15189).
Bases para la selección de métodos…

• Propiedades analíticas: precisión, exactitud, especificidad,

sensibilidad, límite de cuantificación y/o detección.
• Facilidad de uso.
• Rapidez de análisis o respuesta.
• Costo.
• Método normalizado.
Objetivos de la validación

 MÉTODOS NORMALIZADOS: Demostrar dominio del

ensayo y uso correcto.

 MÉTODOS NO NORMALIZADOS: Demostrar que los

parámetros del método referencial no se afectan, dominio
del ensayo, uso correcto.

 MÉTODOS DESARROLLADOS POR EL

LABORATORIO: Demostrar cumplimiento de criterios de
aceptación, dominio del ensayo y uso correcto.
 Tipos de Validación

• Prospectiva: Proceso de validación para metodologías nuevas.

• Retrospectiva: Para métodos utilizados a diario no validados

anteriormente y de los cuales se dispone de suficiente
documentación para probar la bondad del método.

• Revalidación: Repetición total o parcial de una validación, por

la introducción de algún cambio que se espera afecte la bondad
de un método ya validado.
Consejos en métodos validados
 El analista debe familiarizarse completamente con el método
antes de usarlo por primera vez: (i) lograr la repetibilidad, (ii)
el límite de detección, (iii) conocer la teoría del método, (iv)
identificar los puntos sensibles y (v) estabilidad de los
reactivos, soluciones, etc.

 Evaluar cuántas muestras es conveniente procesar al mismo

tiempo. Es mejor analizar bien pocas muestras que tratar de
analizar muchas y tener que repetir casi todas.

 Asegurarse de que todas las cosas (reactivos, equipamiento,

etc.)para el método están disponibles antes de comenzar el
trabajo
 Los Parámetros

MÉTODOS CUALITATIVOS MÉTODOS CUANTITATIVOS

• Especificidad/Sensibilidad • Especificidad/Selectividad
• Selectividad (Interferencias) • Sensibilidad (Interferencias)
• Límite de Detección • Límite de Detección
• Límite de Cuantificación
• Linealidad
• Robustez
• Precisión
• Exactitud
• Incertidumbre
El Plan de Validación
• Definir: aplicación, propósito y alcance
• Definir: parámetros de desempeño y criterios de aceptación.
• Definir los experimentos de validación.
• Verificar las características pertinentes de los equipos.
• Cualificar materiales; por ejemplo patrones y reactivos.
• Realizar experimentos de prevalidación.
• Ajustar los parámetros del método y criterios de aceptación
• Realizar completamente los experimentos internos (y externos) de
validación.
• Desarrollar un procedimiento normalizado de operación para
ejecutar el método rutinariamente.
• Definir los criterios para la revalidación.
• Definir el tipo y la frecuencia de las pruebas apropiadas del
sistema y las comprobaciones del control de calidad para la rutina.
• Documentar los experimentos de validación y los resultados en un
informe de validación.
Validación del Paratest ® como método eficaz
para el diagnóstico parasitológico
TEODORO B. K.; ROBERTO T. N.; BRASIL D. M. E SOUZA L. B.; SOUZA M. C.
PAULETTO M. C. A. C.; MAMED J. A.; SBRAVATE-MARTINS C. A.

PROPÓSITO

Dado que la metodología es de fundamental importancia, el objetivo de

este trabajo fue evaluar el método Paratest ® antes de otros dos métodos muy
conocidos y llevado a cabo en nuestros círculos: los métodos de Ritchie y
Hoffman.

METODOLOGÍA

Un total de 165 muestras fueron analizadas, obtenida a partir de una población

compuesta principalmente de los niños de la Región en Capivari Estado de São
Paulo, Brasil. Estas muestras fueron sometidas a tres métodos: Hoffman, Ritchie y
Paratest ®.
RESULTADOS
Paratest ®: 91.1%
Método Hoffman: 88.3%
Método de Ritchie: 85.5%

CONCLUSIÓN

Otros estudios están siendo evaluados para validar el método, pero

nuestros resultados muestran una mayor eficiencia de Paratest ® en relación
con otros métodos clásicos en el diagnóstico parasitológico.
 Comparación en la detección de enteroparásitos por las técnicas
directas y de concentración. según INS y escalabs
INS Escalabs
Parásitos Examen Técnica de Tec. Sed. Examen Técnica de Tec. Sed.
directo Sheather Espontánea directo Sheather Espontánea
B. hominis x x x x x x
G. lamblia x x x x x x
E. coli x x x x x x
H. nana x x x x x x
T. trichiura x --- --- x --- ---
Diphyllobothrium sp. x x --- x x x
Taenia sp. x x x x x x
Ancylostomideos x --- x x --- ---
F. hepatica x x x x x x
A. lumbricoides x x x x x x
Negativo x x x x x x
TOTAL 11 09 09 11 09 09
 Evaluación del equipo fe-5 vs. técnica de Ritchie con
muestras fecales de manipuladores de alimentos en
cinco ciudades del país.
Ibeth Paola Garzón Gordillo1, Astrid carolina flórez Sánchez1, Orlando Ruda Hernández2
, Omar Andres Reyes torres2

1. Instituto Nacional de Salud. laboratorio de Parasitología

2. Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca

El objetivo del trabajo fue evaluar la efectividad del equipo Diasys FE-5, instrumento que sirve como
nueva técnica de concentración de parásitos intestinales, que facilita la preparación, centrifugación,
concentración y montaje de las muestras para su lectura. Está compuesto de un sistema de Mini
Parasep que optimiza la recuperación y concentración de quistes, huevos y larvas en comparación
con la técnica tradicional de Ritchie modificada (formol – éter). Se examinaron 764 muestras de
materia fecal, procedentes de manipuladores de alimentos de cinco ciudades del país. Las muestras
fueron simultáneamente procesadas y analizadas mediante la técnica de Ritchie y el equipo Diasys
FE-5. Las dos técnicas permitieron el hallazgo parasitológico de protozoos y helmintos, con una
concordancia de índice de kappa de 0.90, aspecto que permite confirmar que el equipo Diasys FE-5
es una herramienta útil y segura en el laboratorio para el diagnóstico de parasitismo intestinal,
obteniendo como beneficios la disminución de costos, reactivos, tiempo, y lo más importante,
bioseguridad para el profesional y mejoramiento del diagnóstico parasitológico.
 Validación en Ciudad de La Habana, Cuba, de ENZYMEBA,
inmunoensayo para la detección de Entamoeba histolytica
en heces
Dr. Luis Fonte Galindo,1 Dr. Fidel Nuñez Fernández,2 Lic. Ana Margarita Montalvo Álavarez,3 Dra. Lazara
RojasRivero,2 Dra. Martha Galloso Rodríguez,4 Dra. Dora Ginorio Gavito,5 Dra. María Elena Hernández
Hernández,6Dra. Ada Vázquez Pérez7 y Dr. Aurelio Ramírez Ramírez5

Parasitólogos de diferentes instituciones médicas de Ciudad de La Habana realizaron la validación

externa de ENZYMEBA, procedimiento diagnóstico de amebiosis intestinal desarrollado en el Instituto
de Medicina Tropical «Pedro Kourí». Para ello, fueron colectadas muestras seriadas de heces de 212
individuos sobre las que se realizó la observación microscópica (prueba de referencia) y el
inmunoensayo ENZYMEBA (prueba en validación). ENZYMEBA, comparada con el examen
microscópico de heces, mostró satisfactorios índices de sensibilidad y especificidad. No se
observaron reacciones cruzadas con muestras de heces en que estaban presentes otros parásitos.
Además, si se tiene en cuenta que para el diagnóstico de amebiosis intestinal con ENZYMEBA es
suficiente una sola muestra de heces por paciente, este procedimiento pudiera ser útil en estudios de
eficacia terapéutica y de prevalencia.
 Datos de validación para control de
calidad
•La validación de un método brinda una idea de las capacidades y
limitaciones de la performance de ese método que se pueden
experimentar durante el uso rutinario.
•Durante la validación el método se aplica a muestras de contenido
conocido.
•Una vez que el método tiene un uso rutinario, se aplica para
muestras de contenido desconocido.
•En la práctica, se recomienda continuar midiendo esas muestras de
composición conocida con cada batch de muestras como parte del
proceso de control de la calidad.
•El control de calidad puede realizarse dentro del laboratorio o de
manera externa (interlaboratorios).
5.6 Aseguramiento de calidad de los procedimientos
analíticos, según Norma ISO 15189
- Control de Calidad Interno.
- Estimación de Incertidumbre.
- Trazabilidad.
- Control de Calidad Externo.

Porqué hay que asegurar la utilidad clínica

de los resultados

Se debe controlar la estabilidad del sistema

analítico.
• Control de Calidad en la etapa pre-analítica: Proporcionar
una muestra apta y confiable.

• Control de Calidad en la etapa analítica: Permitir una

medición confiable.

• Control de Calidad en la etapa post-analítica: Aportar un

informe confiable.
Pre-analítica

• Condiciones pre-analíticas
• Obtención de las muestras
• Transporte de muestras
• Recepción de muestras
• Criterios de aceptación y rechazo
Analítica
PERSONAL
Competencia técnica.
Personal calificado en base a educación, entrenamiento,
experiencia y/o habilidad demostrada.

EQUIPO:
Microscopio con mantenimiento preventivo.
Calibración del ocular micrométrico y portaobjetos micrométrico,
si los hubiera.

REACTIVOS:
Composición, preparación, conservación y vida media de los
reactivos.
Identificados correctamente.
Etiqueta con feche de preparación y caducidad.
Tener una ficha de registro y control de los mismos.
PARASITOSIS INTESTINALES

• Control de los exámenes macroscópicos.

• Control de las preparaciones húmedas.
• Control de las técnicas de concentración.
• Control de la tinciones permanentes.
 Post-analítica

• Validación clínica de los resultados.

• Elaboración y edición del informe.

• Entrega de los resultados.

Control de calidad externo

El interés de los laboratorios por autorizarse, certificarse o

acreditarse y la preocupación de los profesionales por mejorar
sus resultados analíticos ha dado lugar a la puesta en
funcionamiento de Sistemas de Calidad para la evaluación de
la misma.
• Estimar la armonización de resultados entre distintos laboratorios.

• Estimar la exactitud de resultados de cada laboratorio participante.

• Establecer clasificaciones de procedimientos de medida en función de

su calidad.

• Mejorar el Sistema de Calidad implantado.

• Permite detección de fuentes de Variabilidad Analítica, su

control y mejora contínua.

• Favorecer la formación continuada y evaluar la aptitud técnica

del personal.

“Es la mejor medida del grado de calidad alcanzado por un

laboratorio”
 Control de Calidad Interno y Externo RIQAS-RANDOX: hormonas.

 Control de Calidad Externo Instituto Nacional de Salud: Química

Clínica y Hematología.

 Control de Calidad Externo NOVALAB: Parasitología Urianálisis y

Microbiología.

 Control de calidad Externo ACROMETRIX: Biología Molecular.

 Control de Calidad Interno ROCHE DIAGNOSTIC: Biología

Molecular y química Clínica.

 Evaluación externa de calidad (PEEC) Universidad Peruana

Cayetano Heredia: Microbiología, Parasitología, química clínica,
inmunología, hematología.