Universidade Federal de Pernambuco

Centro de Ciências Biológicas

Laboratório de Genética e Biotecnologia Vegetal

USO DO SISTEMA-TESTE Allium cepa PARA AVALIAÇÃO

DA ATIVIDADE CITOGENOTÓXICA DE COMPOSTOS
QUÍMICOS E AMBIENTAIS

Ministrante: Silvany de Sousa Araújo

Doutoranda em Ciências Biológicas
Recife- PE
 SISTEMA-TESTE A. CEPA

Metodologia
 Análise de células meristemáticas e/ ou geração F1

SEMENTES
Allium cepa
 SISTEMA-TESTE A. CEPA

Metodologia
1. GERMINAÇÃO
- Realizado em placas de Petri
- Placas + papel filtro + água ou químico a ser testado
- 100 sementes / placa (48 a 72 h)
- Mesma condições de luminosidade e temperatura
 SISTEMA-TESTE A. CEPA

Parâmetros avaliados
Toxicidade (morfologia, coloração e crescimento das raízes);
 Toxicidade (morfologia, coloração e crescimento das raízes);
 SISTEMA-TESTE A. CEPA

Parâmetros avaliados
Toxicidade (índice de germinação e índice mitótico);

IG= Número de sementes germinadas x 100

Total de sementes expostas à germinação

Ex. Uma placa contendo 100 sementes, 30 germinaram.

IG= 30 x 100  30
100
 Toxicidade (morfologia, coloração e crescimento das raízes);
 SISTEMA-TESTE A. CEPA

Parâmetros avaliados
Toxicidade (índice de germinação e índice mitótico);

VCMR = Medição das raízes, calcula-se as médias.

Ex. Tratamento 1
1. 2,5 cm VCMR= 2,5 + 3,0 + 2,0 + 2,5
2. 3,0 cm 4
3. 2,0 cm VCMR = 2,5 cm
4. 2,5 cm
 SISTEMA-TESTE A. CEPA

Metodologia
1. CONFECÇÃO DE LÂMINAS
- Coleta  10 às 14 horas
- Fixação  Carnoy (3 etanol : 1 ácido acético)
- Lavagem  3x em água destilada
- Hidrólise  HCL 1N
- Coloração  Reativo de Schiff
- Lâminas  região meristemática e F1
 SISTEMA-TESTE A. CEPA

Metodologia
1. ANÁLISE DAS LÂMINAS

- Contabilizar o n◦ total de células

- Contabilizar as células interfásicas e em divisão (P, M, A, T)
- Identificar e contabilizar as células interfásicas com alterações
- Identificar e contabilizar células mitóticas com alterações
 SISTEMA-TESTE A. CEPA
Metodologia
1. ANÁLISE DAS LÂMINAS
a) Células interfásicas
- irregularidades na morfologia
- células polinucleadas
- brotos nucleares
- micronúcleos
- micrócitos
- morte celular
- Núcleo lobulado
 SISTEMA-TESTE A. CEPA
Metodologia
1. ANÁLISE DAS LÂMINAS
a) Células mitóticas
PRÓFASE
- micronúcleos
- micrócitos
 SISTEMA-TESTE A. CEPA
Metodologia
1. ANÁLISE DAS LÂMINAS
a) Células mitóticas
METÁFASE
- aderências cromossômicas
- poliploidias
- c-metáfases
- quebras cromossômicas
- perdas cromossômicas
 SISTEMA-TESTE A. CEPA
Metodologia
1. ANÁLISE DAS LÂMINAS
a) Células mitóticas
ANÁFASE e TELÓFASE
- pontes cromossômicas
- atrasos cromossômicos
- anáfases multipolares
- quebras cromossômicas
- aderências cromossômicas
 SISTEMA-TESTE A. CEPA

Parâmetros avaliados
Citotoxicidade (Índice mitótico e morte celular)

Índice Mitótico (IM)= N◦ total de céls em divisão x 100

Total de céls observadas
Ex. Tratamento 1
1. CI= 150 IM= 30 x 100 IM= 20
2. CM= 30 150
 Toxicidade (morfologia, coloração e crescimento das raízes);
 SISTEMA-TESTE A. CEPA

Parâmetros avaliados
Genotoxicidade (alterações cromossômicas)
- Alterações passíveis de reparo

(IAC)= N◦ total de céls alteradas x 100

Total de céls observadas
Alterações:
- c-metáfases - perdas cromossômicas (metáfase)
- metáfases poliploides - atrasos (anáfase e telófase)
- metáfases com aderências - pontes cromossômicas
 TESTE DO MICRONÚCLEO

Efeito Aneugênico

Agente aneugênico
 SISTEMA-TESTE A. CEPA

Parâmetros avaliados
Mutagenicidade (transmitida aos descendentes)
- Alterações que não podem ser reparadas

(IMt)= N◦ total de céls alteradas x 100

Total de céls observadas
Alterações:
- micronúcleos
- quebras cromossômicas
 TESTE DO MICRONÚCLEO

Efeito Clastogênico

Agente
clastogênico
 SISTEMA-TESTE A. CEPA

Análise Estatística

- Normalização dos resultados

- Comparação entre os tratamentos e o CN

- Testes Estatísticos
- Kruskal- Wallis (p< 0,05)
- Mann- Whitney (p< 0,05)

- Programa Estatístico: Bioestat 5.2

 OBRIGADA!
Silvany de Sousa Araújo
Doutoranda em Ciências Biológicas
Email: ny_araujo@hotmail.com