I JORNADA CIENTIFICA DE

CITOGENETICA CLINICA
“A propósito de los 60 años del descubrimiento
de los 46 cromosomas humanos”
 60 años del descubrimiento del
número de cromosomas humano...

[...] Hace tan solo 60 años no se conocía el número exacto de

cromosomas de la especie humana, dato que hoy manejamos con
completa naturalidad al abordar un estudio de diagnóstico genético. No
fue hasta la publicación del trabajo The Chromosome Number of Man en
la revista Hereditas, el 26 de enero de 1956, cuando quedó
establecido el número de 46 cromosomas. Hasta esa fecha las
propuestas habían sido variadas, desde 44 a 49; y durante más de 30
años se aceptó el número de 48. En este trascendente hallazgo
intervinieron los científicos Joe Hin Tjio y Albert Levan, autores del
citado artículo. El número de Tjio y Levan pronto se confirmó por otros
investigadores [...]
Tjio, autor principal del hallazgo, dirigía en los años 1948-1959 el
Laboratorio de Citogenética de Plantas en la recién creada
Estación Experimental de Aula Dei (EEAD) en Zaragoza,
perteneciente al Consejo Superior de Investigaciones Científicas
(CSIC), y compaginaba esta actividad con estancias cortas en el
laboratorio de Levan en el Instituto de Genética de la Universidad
de Lund, Suecia, donde trabajaba con tejidos humanos [...]
 JOE HIN TJIO durante su estadía en el verano pasado en Sloan-Kettering Institute, New York.
 Cultivos de tejidos de fibroblastos de pulmón embrionario humano.

“En nuestra opinión el pre-tratamiento hipotónico introducido por Hsu (1952), aunque permite una
mejora muy significativa, especialmente para difundir cromosomas, tienen una tendencia a hacer los
contornos cromosómicos algo borrosa y difusa. En consecuencia, tratamos de abreviar el tratamiento
hipotónico al mínimo, con la esperanza de inducir la dispersión de los Cromosomas sin efectos
desfavorables sobre la superficie del cromosoma. El tratamiento previo con solución hipotónica durante
sólo uno o dos minutos dieron buenos resultados. Además, se administró una dosis de colchicina al
Medio de cultivo 12-20 horas antes de la fijación, haciéndolo en una concentración de 50x10-9 Mol / l
para el fármaco. La colchicina efectuó una acumulación considerable de mitosis y un grado variable de
contracción cromosómica. Seguido la fijación en ácido acético a 60%, intercambiado dos veces para lavar
las sales del medio de cultivo y de la solución hipotónica que de otro modo habría causado la precipitación
con la orceína. Las preparaciones de ordinario se hicieron en orceína acética al 1%. Para el recuento de
los cromosomas el aplastamiento se hizo muy suave para mantener los cromosomas en los grupos
metafásicos. En muchos casos, las células individuales se aplastaron bajo el microscopio por una ligera
presión de una aguja. En tales casos, se observó directamente que ningún cromosoma escapó.”
EL NUMERO DE CROMOSOMA
Con la técnica utilizada, los recuentos exactos podían hacerse en un gran número de las células. Las Figs. 1 a y b representan muestras típicas de la
apariencia de los cromosomas en la metafase temprana (1a) y la metafase completa (1b), mostrando la facilidad con la que podría hacerse el recuento.

En la tabla 1 se registran los recuentos de los cuatro embriones estudiados.

Nos sorprendió encontrar que el número de 46 cromosomas predominó en
los cultivos de tejidos de los cuatro embriones, solamente unos pocos casos
se desviaron de este número. Los números más bajos eran frecuentes, por
supuesto, pero siempre en células que parecían dañadas.
MORFOLOGÍA DEL CROMOSOMA
Algunos datos sobre la morfología cromosómica de los 46 cromosomas
humanos se comunicará aquí. El análisis detallado del idiograma será
pospuesto, sin embargo, hasta que podamos estudiar a individuos de
sexo desconocido, siendo desconocido el sexo de los embriones
presentes. El estudio comparativo de los cromosomas de la línea
germinal en mitosis espermatogonales se hará en un suplemento
urgente al presente trabajo.
En la Fig. 2 se analizan cuatro células que van desde la prófase tardía
(a) hasta la metafase tardía (d). Los cromosomas de las metafases por
la contracción de la colchicina varía en longitud entre 1 y 8 micras (Fig.
2 b), pero todo el rango de variación de la Fig. 2 es de 1 a 11 micras. La
morfología cromosómica cromosoma es más o menos concordante
con las observaciones de otros trabajos, como, por ejemplo, el
idiograma de HSU (1952). Los cromosomas pueden dividirse en tres
grupos: cromosomas M (centrómero mediano-submediano; Índice
brazo largo: brazo corto 1-1,9), cromosomas S (centrómero
subterminal; índice de brazos 2-4,9), y los cromosomas T (casi
Centrómero terminal; índice del brazo 5 o más).
La fig. 2. Cuatro análisis de idiogramas de fibroblastos de pulmón
embrionario humano cultivados en Vitro.
Los cromosomas han sido agrupados en tres clases: M (fila superior), S
(fila inferior), y T (entre, excepto en b, donde T está al final de la fila S).
Dentro de cada clase los cromosomas han sido más o menos
dispuestos en orden decreciente de tamaño. - X 2400.
CONCLUSIÓN
“La ocurrencia casi exclusiva del cromosoma número 46 en un tejido somático derivado de cuatro embriones
humanos individuales es un hallazgo muy inesperado. Asumir un mecanismo regular para la exclusión de dos
cromosomas del idiograma en la formación de un cierto tejido es poco probable, incluso si esta suposición no
puede ser totalmente desestimada en esta etapa de investigación. Nuestra experiencia de un tejido somático
en ratones y ratas, a saber, el hígado regenerador, se opone a esta suposición. El conjunto de cromosomas
diploides exactos siempre se encontró en la regeneración hígado.”
“Después de la conclusión de que el tejido estudiado por nosotros había 46 como número de cromosoma, el
Dr. EVA HANSEN-MELANDER amablemente informó que durante la primavera pasada había estudiado, en
cooperación con los Dres. YNGVE MELANDER y STIG KULLANDER, los cromosomas de las mitosis del hígado
en embriones humanos abortados. Este estudio, sin embargo, fue temporalmente porque los trabajadores no
pudieron encontrar todos los 48 cromosomas humanos en su material; como cuestión de hecho, el número
46 se contó repetidamente en sus diapositivas. Hemos visto fotomicrografías de las profases hepáticas de
este estudio, mostrando claramente 46 cromosomas. Estos hallazgos sugieren que 46 puede ser el número
correcto de cromosomas correcto en tejido hepático humano, también.”
Por lo tanto, se ha hecho un control renovado y cuidadoso del número de cromosomas en mitosis
espermatogonales del hombre no queremos generalizar nuestros hallazgos actuales en una declaración de
que el número de cromosomas del hombre es 2n = 46, pero es difícil evitar la conclusión de que esto sería la
explicación más natural de nuestras observaciones.
Expresiones de gratitud. - Deseamos expresar nuestro sincero agradecimiento a la Sociedad de Cáncer de
Suecia por el apoyo financiero de esta investigación y al Dr. RUNE GRURB por suministrarnos cultivos de tejidos.
JOE HIN TJIO Y ALBERT LEVAN

RESUMEN
Se estudiaron los cromosomas en cultivos de tejidos primarios de seres humanos los fibroblastos explorados de
cuatro embriones individuales. En todos ellos se encontró el número cromosómico 46, en lugar del esperado
número 48. Dado que todas las 265 mitosis contaron todas, excepto 4, Número 46, este número es
característico del tejido estudiado. El posible soporte de este resultado sobre el número de cromosomas del
hombre es discutido.
Instituto de Genética, Lund, 26 de enero de 1956.
 CITOGENETICA CONVENCIONAL

 Finales del Siglo XIX: publicación de Flemming en 1882 primeras

ilustraciones del cromosoma humano a partir de observaciones al
microscopio.
 El anatomista alemán G. Waldyer introdujo el término cromosoma en
1888
 En 1902-1903 Boveri y Sutton publican la Teoría Cromosómica de la
Herencia.
 En 1921 Theophilus Painter demostró la presencia del cromosoma Y
en preparaciones obtenidas a partir de testículo. Determinó el
número de cromosomas = 48
 CITOGENETICA CONVENCIONAL

 Podemos considerar el inicio de la Citogenética Humana en 1956, Joe Hin Tjio (1919-2001) y Albert Levan (1905-1998)
cuando se determina el número exacto de cromosomas de la
especie humana y fue en 1956, cuando Tjio y Levan (1956)
descubrieron que esa dotación cromosómica consistía en realidad
en 46 cromosomas.
 Para ello, utilizaron nuevas técnicas, que incluían el uso de la
colchicina y la aplicación del choque hipotónico en fibroblastos
de pulmón de cuatro fetos humanos. Este hallazgo, fue ratificado
por Ford y Hamerton en el mismo año.
 LA DECADA PRODIGIOSA DE LA CITOGENETICA
 JEROME LEJEUNE y cols, en 1959, médico de la Clínica des Maladies
Infantiles del Hópital Necker-Enfantas Malades de Paris : estudiaron
citogenéticamente a un grupo de niños deficientes que compartían el
fenotipo de la entonces denominada "Idiocia mongoloide“ : SINDROME
DOWN TRISOMIA G : TRISOMIA 21

 JACOBS Y STRONG en 1959, estudiaron a un grupo de varones con un

fenotipo similar al descrito por Klineffelter varios años antes : SINDROME
KLINEFELTER : 47,XXY

 FORD y cols., en 1959 estudiaron citogenéticamente a un grupo de

individuos que tenían el fenotipo del Síndrome de Turner
(descrito por Henry Turner en 1939) Cariotipo 45,X

 MOORHEAD y cols., en 1960, modifican la técnica citogenética

introduciendo el uso de la fitohemaglutinina que estimula la división
celular de linfocitos de sangre periférica, con lo que aumenta la eficacia de
la técnica.
 KLAUS PATAU y cols., en 1960 Citogenético que estudió los cromosomas
humanos. Descubrió dos trisomías humanos - para los cromosomas 13 y
18 - buscando pacientes con retraso mental y otras múltiples anomalías
del desarrollo. Trisomy 13 se llama síndrome de Patau.

 JHON HILTON EDWARDS y cols., en 1960 profesor de genética en

Birmingham y Oxford, contribuyó a todos los aspectos de su tema en la
población, la citología y los estudios de trisomía, así como la radiación,
el grupo sanguíneo y los estudios de ligamiento. Él desarrolló una
herramienta de investigación, la red de Oxford, para mapear homologías
entre secuencias genéticas en diferentes especies. Reconoció la trisomía
18 en los bebés muertos y anormales, la condición que lleva su nombre
y determinan la TRISOMIA E: TRISOMIA 18

 SANDBERG y cols., en 1961, define el cuadro clínico del primer caso con
cariotipo 47,XYY.
Jhon Hilton Edwards
 CARR y cols., en 1961 definen los dos primeros casos
con un cariotipo 48,XXXX.

 KESAREE y cols., en 1963, encuentra un caso con una clínica similar,

pero con un cariotipo de 49,XXXXX.
 JEROME LEJEUNE y cols., en 1963, hicieron la primera
descripción de una anomalía cromosómica estructural, la del
(5p-) y la denominan "Síndrome de Cri du chat" o "síndrome
del maullido del gato“

 SCHACHENMANN y cols., en 1965 describieron un caso con

un pequeño cromosoma extra, de origen desconocido,
considerado como marcador. Aparecen más pacientes con el
mismo marcador extra y con rasgos comunes. A todos ellos
se les cataloga como “Síndrome de Cat-eye”, por el aspecto
característico de los ojos, aún sin haber definido el origen del
cromosoma marcador. Años más tarde, en 1981, Schinzel lo
define como derivado de uno o dos cromosomas 22
 CITOGENETICA CONVENCIONAL

Los dos grandes maestros fundadores de la citogenética humana. a, Jérôme Lejeune construyendo
un cariotipo humano en su laboratorio de París (abril de 1966); c, Klaus Patau observando
cromosomas en el Laboratory of Genetics de Madison (circa 1961) [a, foto del autor; b, cariotipo
gentileza de Lejeune y publicado (91); c y d, cortesía de la Prof. Eeva Therman-Patau].
CONFERENCIAS DE CITOGENETICA
Conferencia en Denver en 1960 (Denver Study Group,1960)
PROPOSITO: Lograr un primer consenso sobre el modo de clasificar a los
cromosomas, haciéndolo en función de su tamaño, y de la localización de
su centrómero. Clasificándolo en 7 grupos.

En el congreso de citogenética de Denver (1960), se propuso ordenar los cromosomas de

acuerdo con su longitud numerando los pares del 1 al 23. Patau se opuso a esta simple
clasificación demostrando que algunos cromosomas no se podían clasificar inequívocamente
sólo por su longitud y posición del centrómero. Por ello propuso, y posteriormente se aprobó,
subdividir los pares de cromosomas en grupos (grupos que nombró de la A a la G) incluyendo
en cada grupo aquellos pares más parecidos morfológicamente y cuya clasificación en pares
específicos era más problemática.

Conferencia en Londres en 1963

PROPOSITO: A propuesta de Klaus Patau se clasifican los cromosomas
humanos en los grupos: A,B,C,D,E,F y G.
 CONFERENCIA DE CHICAGO 1966
SIMBOLOS
A-G Grupo de cromosomas
1 - 22 Número de los cromosomas autosómicos
X, Y Cromosomas sexuales
/ Separa las líneas celulares para describir mosaicismo
? Identificación dudosa de los cromosomas y estructura
Conferencia en Chicago en 1966 ace Acéntrico
PROPOSITO: Elaborar las reglas para la cen Centrómero
descripción de los cariotipos (fórmula dic Dicéntrico
cariotípica) end Endorreduplicación
Creación de los símbolos utilizados en la h Constricción secundaría o Región de tinción negativa
descripción de los cariotipos normales y i Isocromosoma
anormales, con coloración convencional. inv Inversión
mar Cromosoma marcador
mat Cromosoma de origen materno
pat Cromosoma de origen paterno
p Brazo corto de un cromosoma
q Brazo largo de un cromosoma
r Cromosoma en anillo
s Satélite
t Translocación
Simbolos repet Duplicación de la estructura cromosómica
 Conferencia de París de 1971
A.- Cambios recomendados a la nomenclatura de la
Conferencia en París en 1971: Conferencia de Chicago
PROPOSITO: Enfocó la identificación de los
cromosomas individuales, regiones y bandas y Los signos + Se colocan antes del signo respectivo, donde significan
detalló un método de escribir cambios ó - cromosomas enteros adicionales o faltantes.
estructurales con el uso del bandeo cromosómico. Se colocan después de un símbolo para denotar aumento o
disminución de longitud.
B.- Símbolos de Nomenclatura adicionales recomendados.
del Deleción
der Cromosoma derivativo
dup Duplicación
ins Inserción
inv ins Inserción invertida
rcp Translocaciones recíprocas
rec Cromosoma recombinante
rob Translocación robertsoniana (“fusión céntrica”)
tan Translocación en tandem
ter Terminal ó final (“pter” ó “qter”)
: Rotura (punto de quiebre, no reunión)
:: Rotura y unión
Desde árriba
Conferencia de París de 1975
 En 1976 se crea el Comité Permanente para la Nomenclatura de la Citogenética Humana (fue en el 5º
Congreso Internacional de Genética Humana de Ciudad de Méjico) y desde entonces funciona
publicando periódicamente recomendaciones para la nomenclatura.
 Debido al continuo aporte de los datos provenientes de la utilización de las nuevas técnicas utilizadas
por diferentes grupos de investigación, en 1977 se elaboró el Sistema Internacional para la
Nomenclatura en la Citogenética Humana (An International System for Human Cytogenetic
Nomenclature. ISCN). Se trataba de elaborar un documento para unificar las conclusiones obtenidas
en las Conferencias celebradas anteriormente (Chicago y Londres), con el fin de que todos los
investigadores utilizasen el mismo lenguaje genético.
 El ISCN se edita periódicamente y está sometido a una constante revisión por parte de un comité
permanente de expertos, que se encarga de la puesta al día e introducción de posibles cambios.
ISCN
1978
 BANDEO CROMOSOMICO
 Fue en 1970 cuando Casperson y cols., aparecen como los pioneros en aplicar a los cromosomas humanos
una técnica ya utilizada en células vegetales, que consistía en usar la Mostaza de Quinacrina, que teñía a los
cromosomas con un patrón de bandas claras y oscuras (Bandas Q), produciendo un patrón de bandas
fluorescente y cuya disposición era idéntica en los dos cromosomas del mismo par.
BANDAS G BANDAS R
BANDAS C
BANDAS NOR
Bandeo Cromosómico: Bandas GTG

Cariotipo humano: 46 XY
• ESTUDIO CITOGENETICO
CULTIVO MEDULA
OSEA
CULTIVO DE
LIQUIDO
AMNIOTICO
 CULTIVO DE
VELLOSIDADES
CORIALES
1983 Simoni
citogenetista que creó el
proceso, en el que los
resultados se ofrecen de
72 a 96 horas.
47,XY,+21
47,XXY
46,XY,t(3;5)(p13;q34)
45,rob(13,14)(q10,q10)
47,XY,+mar
TECNICA DE ALTA RESOLUCION

 Yunis en 1976, desarrolló un método que permitía la obtención de

cromosomas largos, por estar en profase o prometafase, reduciendo
el tiempo de exposición de las células a la colchicina. Esta y otras
técnicas de alta resolución emplean diversos productos para obtener
el máximo número de mitosis. En el método descrito por Yunis (1976),
el producto utilizado era el metotrexato.
 Posteriormente Misawa y cols. (1986), utilizan el bromuro de etidio
como agente intercalador del DNA en la técnica para la obtención de
cromosomas prometafásicos.
 Recientemente, Mascarello y Hubbard, (1991) han publicado una
nueva variante en la que se emplea la actinomicina D para la
sincronización de los cultivos celulares, con la que también se
obtienen estos cromosomas de alta resolución.
CITOGENETICA CONVENCIONAL
 En 1975 Dutrillaux y en 1976 Yunis desarrollaron técnicas de sincronización celular:
TECNICAS DE ALTA RESOLUCIÓN
 Bandeo de alta resolución

Bandeo 500 bandas / 5-8 Mb Bandeo 650 bandas / 3-5 Mb

SINDROMES PRODUCIDOS POR MICRODELECIONES
Síndrome Williams: del (7)(q11.3)

Síndrome Miller Dieker: del (17) (p13.3)

Síndrome Prader Willi Síndrome Angelman

del 15(q11q13)pat del 15(q11q13)mat

Síndrome Smith Magenis: del (17)(p11.2)

Síndrome Di Gorge: del (22)(q11.2)

1984 (Pinkel & Gray): Citogenética Molecular
Del 22q11.2
Multibanding – FISH ( m-Band)
Karyotipador y estación FISH
PCR: Reacción en cadena de la Polimerasa
• Kary Mullis concibe la idea en
1983, mientras trabaja para la
Cetus Corp. (Biotecnología)
• Saiki, R., Scharf, S., Faloona, F.,
Mullis, K., Horn, G., and Erlich, H.
(1985). Enzymatic amplification of
beta-globin genomic sequences and
restriction site analysis for diagnosis
of sickle cell anemia. Science 230:
1350-54
• Los detalles de la PCR se publican
después.
PCR
 Corte de un termociclador en tiempo real

En la PCR en
Tiempo Real, el
investigador
realmente ve el
incremento en la
cantidad de DNA a
medida que es
amplificado
 Amplificación de Sondas dependiente
de Ligamiento Múltiple (MLPA)

MLPA es una técnica que utiliza un conjunto de pares de sondas para detectar
deleciones/duplicaciones en distintas regiones del genoma. Las sondas están separadas
en dos oligonucleótidos (RPO y LPO, por Right Probe Oligonucleotidey Left Probe
Oligonucleotide, respectivamente). Cada una de estas mitades está compuesta por un
sitio de hibridación a ADN (RHS y LHS, por Right Hibridation Sitey Left Hibridation Site,
respectivamente), un fragmento espaciador o “Stuffer” (que es una secuencia obtenida
de un bacteriófago sin homología en el genoma humano y que sirve para darle “longitud”
a la sonda) y una secuencia complementaria a dos primers(RPB y LPB, por Right Primer
Bindingy Left Primer Binding, respectivamente)
Análisis de MLPA por GENEMARKER
Figura: A. Diagrama del resultado
obtenido en la prueba de MLPA
para el paciente RMI007. Deleción
en 1q44.
B. Diagrama de la confirmación
mediante el Kit P036. La flecha
indica el lugar donde se muestra un
valor en la relación inferior a 0.7,
indicando deleción.
C. Esquema del cromosoma
indicando el lugar de la deleción
Figura 26: A. Diagrama del
resultado obtenido en la prueba
de MLPA para el paciente
RMI087. Duplicación 21q22.3.
B. Diagrama de la confirmación
mediante el Kit P036. La flecha
indica el lugar donde se
muestra un valor en la relación
superior a 1.3, indicando
duplicación.
C. Esquema del cromosoma
indicando el lugar de la
duplicación
MICROARRAYS

EL ENFOQUE GENOMICO: “ El estudio de todo al mismo tiempo”

 Matríz con 120.000 sondas diseñada
40,000 genes en una única matriz para genotipar 3.000 loci bialélicos
 Affymetrix

Applications
Expression profiling
Comparative genomic hybridization
Single nucleotide polymorphism
Sequencing
Gene by gene approach NGS (exome sq or panels)
Importancia de los estudios genéticos en Medicina?

Neonatologia Pediatría Urología Cardiología

Endocrinología
Hematología
ESTUDIOS
GENETICOS
Psiquiatría
Neurología

Gineco-Obstetricia Medicina Fetal Oncología

ESTUDIOS 1980
GENÉTICOS FISH

Citogenética
1960

1990
PCR

Real time PCR

2000

Microarrays
2005 Secuenciación
Importancia de los estudios genéticos en
Medicina
DIAGNOSTICO
TRATAMIENTO : Selección
Evaluación
PRONOSTICO

“Adecuado ASESORAMIENTO GENETICO”

“Las pruebas genéticas NO son

el futuro sino es el PRESENTE”
MUCHAS GRACIAS
herrerahh7@yahoo.es
Mutations in the genes that function during
meiosis may play a role in causing non-disjunction