Agrobacterium tumefaciens Agalla del cuello, material genético entre bacteria y célula vegetal. Formación de tumores en la zona de contacto entre el tallo y la raíz, raíces y tallos de plantas de interés agronómico. Las células infectadas contienen opinas. El tipo de tumor depende de la concentración de opinas, lo cual depende del material genético de la bacteria. Estudio in vitro Las células tumorales adquirieron la capacidad de sintetizar opinas durante la interacción con la bacteria. La naturaleza de las opinas depende de la cepa bacteriana, cada cepa degrada las opinas que produce. Plásmido Ti (Tumour inducing)
Schell lo descubrió en 1973.
Es de gran tamaño y portador del carácter patógeno. Las células de las agallas contienen un fragmento del plásmido, denominado ADN-T. Características DNA circular de doble cadena y de gran tamaño (200 – 800 Kb). Origen de replicación. Región vir constituida por varios genes de virulencia, algunos constitutivos y otros inducibles por los mismos. Región de transferencia: ◦ Borde derecho (Promotor) Cada uno de 24 – 25 pb ◦ Borde izquierdo (Terminador) ◦ Genes de síntesisde auxinas, citoquininas y opinas Genes del catabolismo de las opinas. Plásmido Ti Funciones Virulencia (Vir), responsable de la transferencia del ADN-T. Se expresan en la Síntesis de Opinas (Ops), alimento a la propia bacteria bacteria. Catabólica (Opc), catabolismo de las opinas.
Oncógena (Onc), consecuencia de la síntesis de Se expresan en la
auxina y citoquinina. célula vegetal Puntos críticos de control La RNA polimerasa debe reconocer al Construcciones promotor y terminador para poder expresar quiméricas el gen. Regeneración de una planta entera a partir Eliminar los de células transformadas. genes tumorales Caracteres con base genética compleja, como resistencia al frío, intervienen muchos genes. Gen quimérico en el Plásmido Ti Bacillus thuriengiensis Bacteria grampositiva del suelo. Durante la esporulación produce cristales de proteínas con actividad insecticida. Aislada por Berlines (1909) de los cadáveres del gusano de harina en Turingia. Se consideró a la bacteria la responsable de la muerte del gusano. Los agricultores esparcían esporas en los cultivos contaminados, pero se requería con frecuencia mayor a los insecticidas. Proteínas cry Provocan la lisis de las células intestinales de los insectos. Tóxicas para escarabajos, moscas y mariposas. Inocuas para humanos. El primer gen fue aislado por Schnepf y Whiteley en 1981. Chilton en 1983 obtuvo la primera planta Bt de tabaco resistente a insectos. Obtención de plantas transgénicas resistentes a los insectos. BIOBALISTICA •Transferencia directa de genes en una célula. •Método más utilizado para transformar las células vegetales. •Surgió en 1987 por Klein y colaboradores. •Método de transformación de células vegetales mediante disparo de micro proyectiles a alta velocidad. •Disparo de partículas de oro o tungsteno, de aproximadamente 1 um de tamaño, con ADN foráneo sobre células, tejidos u órganos vegetales. •Los disparos son mediante presión de helio o descarga eléctrica de alto voltaje. Cotinúa... •Los proyectiles alcanzan velocidades de cientos de metros por segundo. •Atraviesan pared celular y membranas, así se transporta el ADN hasta el genoma. Microcañón con partículas metálicas Partículas de metal con ADN en el exterior. Célula vegetal después de Equipo para la Biobalística los disparos Proceso