TINCIÓN DE GRAM

LABORATORIO 4 LABORATORIO 3
Arias Romero Tania Lizeth López Grifaldo Lizbeth
Rangel Morales Verónica Perea Alcalá Fernando
Denise
Rosales Vázquez Maria Luisa
 INTRODUCCIÓN
•Fue desarrollada por Hans Christian Gram en
1884. Es utilizada para agrupar las bacterias en
Gram positivas y Gram negativas dependiendo del
grosor de su pared celular.
 INTRODUCCIÓN.
Gram comenzó a experimentar nuevos
colorantes y por accidente y azar, se percató
de que ciertas bacterias encontradas en tejidos
pulmonares de pacientes fallecidos por
neumonía retiene el colorante (cristal violeta)
después de lavarlas con alcohol.
 TINCIÓN DIFERENCIAL
En esta tinción se utilizan dos colorantes
contrastantes (primario y secundario) y un
decolorante de por medio que nos permite
diferenciar grupos de bacterias de acuerdo
a su reacción con los colorantes.
 OBJETIVOS
• Conocer el concepto de la tinción de
Gram y su importancia.
• Llevar a cabo la tinción de Gram con
especies bacterianas conocidas.
• Observar el efecto de la variación del
tiempo al efectuar la decoloración
con alcohol - acetona.
 FUNDAMENTO
Capacidad de una bacteria de retener o no el
colorante primario (cristal violeta) aún después de
una decoloración con alcohol acetona,
dependiendo del grosor de su pared celular y de
su composición química.
 GRAM +
La pared celular de la célula
Gram-positiva es gruesa y
consiste en varias capas
interconectadas de
peptidoglicano así como de
algo de ácido teicoico.

El componente principal es
la mureína, un
peptidoglicano que solo se
encuentra en los
procariontes.
 GRAM -
El espesor de la pared
celular de una bacteria
Gram-negativa es
considerablemente menor
a la de una Gram-positiva.
Está formada únicamente
por peptidoglicano y está
rodeada por una
membrana exterior
compuesta de fosfolípidos,
lipopolisacáridos y
lipoproteínas.
 FUNDAMENTO
CRISTAL VIOLETA
El cristal violeta es básico (se une a componentes
celulares de carga negativa). Atraviesa la envuelta celular
y se acumula en el citoplasma.

Los constituyentes protoplamáticos

de las bacterias Gram + y Gram –
se combinan con el cristal violeta
por un enlace iónico entre sus
grupos ácidos y sus grupos básicos
del colorante.
 FUNDAMENTO
MORDENTE (LUGOL)
Incrementa la afinidad del colorante primario con la
célula formando un complejo de mayor tamaño
llamado clatrato o laca.

El complejo tiene mayor

afinidad por el sustrato que el
colorante por sí mismo. Esto
incrementará aún más en las
Gram positivas que en las
Gram negativas.
 FUNDAMENTO
En la decoloración, el alcohol- En las bacterias Gram-
acetona deshidrata a las bacterias negativas el alcohol penetra
Gram-positivas por que tienen una rápidamente en la capa externa
pared celular muy gruesa y se cierran que es rica en lípidos y el
los poros de ésta e impide la salida complejo se extrae fácilmente.
del complejo cristal violeta-yodo.
 FUNDAMENTO
Factores que afectan el resultado de la
decoloración:

•Edad del cultivo.

•Condiciones del cultivo.

•Intensidad de la decoloración con alcohol.

 FUNDAMENTO
SAFRANINA
Molécula cargada positivamente (catión) capaz de
recombinarse con elementos celulares de cargas
negativas.
Las bacterias Gram - se teñirán
de rosa posterior a la
decoloración, las cuales pierden
el colorante cristal violeta por
efecto de la decoloración.
MÉTODO Y DESARROLLO
 RESULTADOS

Escherichia coli Bacillus megaterium

y Escherichia coli
 RESULTADOS

Staphylococcus aureus
 RESULTADOS

Bacillus megaterium y
Escherichia coli Staphylococcus aureus
FALTA DE DECOLORACION FALTA DE DECOLORACION
 RESULTADOS

Staphylococcus aureus Bacillus megaterium

SOBRE DECOLORACION SOBRE DECOLORACION
 RESULTADOS

Bacillus megaterium Staphylococcus aureus

FROTIS CON MUESTRA EN EXCESO FROTIS CON MUESTRA
Y SOBREDECOLORACION DEFICIENTE Y
SOBREDECOLORADA
 CUESTIONARIO
• 1. ¿Qué importancia tiene la técnica de
coloración de Gram en la identificación de las
bacterias?
Es de gran importancia, ya que permite, de
acuerdo con la estructura y grosor de la pared
bacteriana, agrupar las bacterias en Gram
positivas y negativas. Y así poder saber su
resistencia a diversos factores y a antibióticos.
 CUESTIONARIO
• 2. ¿Cuál es el paso crítico en la tecnica de
coloracion de Gram? Diga por qué.
La decoloración ya que si hay una sobre
extracción del colorante puede haber
variaciones en los resultados de los gram
positivos ,al igual que si la decoloración es
deficiente los Gram negativos no se teñirán
con el colorante secundario adecuadamente.
 CUESTIONARIO
• 3. Diga el nombre de 3 bacterias Gram
positivas y 3 de Gram negativas.

GRAM POSITIVOS GRAM NEGATIVOS

Streptococcus pyogenes Klebsiella pneumoniae

Streptococcus pneumoniae Salmonella typhi

Clostridium tetani Neisseria gonorrhoeae

Tratado de Microbiologia, Davis, Dulbecco,

Eisen, Ginsberg,Wood, SALVAT, segunda
edicion 1978
 BIBLIOGRAFÍA
• Tortora Gerard J., B. R. (2007). Introducción a la microbiología. Buenos
Aires, Argentina: Ed. Médica Panamericana.
• Volcy, C. (2004). Lo malo y lo feo de los microbios. Colombia: Univ.
Nacional de Colombia.