Tutorial:

Inmunohistología

Orquídea L.Rodríguez
Felix J. Tapia

Instituto de Biomedicina
Facultad de Medicina
Universidad Central de Venezuela

XVIII Congreso Venezolano de Microscopia y

Microanálisis (CONVEMI), Cumaná 17 al 19 de
octubre 2018
Caracterización de la individualidad biológica

sondas moleculares
ADN

RNA sondas moleculares

sondas inmunológicas

proteínas

sondas inmunológicas

sangre

f. tapia
Inmunodetección: Diagnóstico y función

 Técnicas basadas en la reacción antígeno-

anticuerpo
 De utilidad en la detección de antígenos o
anticuerpos en diferentes muestras biológicas
 Permite evidenciar infecciones, respuestas
inmunitarias y componentes biológicos.
Inmunodetección: Diagnóstico y función

Especificidad Isotipo
Cantidad Afinidad

REACTIVOS
(Sonda inmunológica)
Molécula Indicadora
Enzima Fluorocromo

Cromógeno Fluorescencia

Métodos
Inmunoenzimáticos Métodos de
Inmunofluorescencia
 Inmunohistoquimica
Método Inmunoenzimático

 Usa anticuerpos para detectar y visualizar la

presencia, distribución, localización de una
determinada proteína de manera específica,
mediante microscopía de luz.
 Es menos sensible que un Western Blot o
un ELISA, pero permite la observación de procesos
en el contexto de células y tejidos intactos.
 El mismo protocolo puede funcionar perfectamente
con un anticuerpo, pero no así con otros. Algunos
anticuerpos pueden necesitar ajustes específicos en
alguno de los pasos del procedimiento.
Avidina Biotina Inmunoperoxidasa

avidina

biotina

peroxidasa
 Hibridación in situ

La hibridación in situ (ISH) es una técnica que se utiliza

para la localización y la detección de secuencias de
ADN y de ARN específicas en las células, cromosomas
o tejidos preservados,1​ mediante la formación de una
molécula híbrida entre una molécula endógena de ARN
o ADN de la célula y una sonda complementaria de ARN
o de ADN monocatenario.
Hibridación in situ: alternativas
 Hibridación in situ

Telómeros - FISH HER2+ centrómero cromosoma 17

en células de cáncer de mama
 Hibridación in situ

Progranulina mRNA en EBV en linfoma cutáneo de células NK-NKT

células epiteliales y
células endonteliales
Hibridación in situ e inmunocitoquímica

Macrófago (rojo) y células infectada

por HIV (negro)

Papillomavirus ADN rosado)

Queratinocitos citoqueratina (verde)
 micro ARN como biomarcadoes

Un micro-ARN o mi-ARN (micro-ARN de interferencia) es

un ARN monocatenario, de una longitud de entre 21 y 25
nucleótidos, que tiene la capacidad de regular la expresión
de otros genes mediante diversos procesos, utilizando
para ello la ruta de ribointerferencia.
Hibridación in situ: miRNA y FISH
distinguir BCC de MCC en una
detección simultánea
Identificación de los miRNA asociados a tumor:
miR-205 y miR-375 de bloques de parafina

BCC amarillo – MCC verde

Renwick et al. J Clin Invest 2013, 123:6 2694-2700

 Impacto de la Inmunohistología

CD8 en tejido T memoria CD4 CD45RA

Apoptosis en tejido
CD4

Lab. Biología Molecular, Instituto de Biomedicina

Universidad Central de Venezuela
 Impacto de la Inmunohistología

iNOS en
IL-10 en ganglio linfático de
Leihmaniasis visceral canina
ratón infectado con L. mexicana

CD4 en micosis fungoides LFA-1 en micosis fungoides

Lab. Biología Molecular, Instituto de Biomedicina
Universidad Central de Venezuela
Células de Merkel CK20 y neurofilamentos
células dendríticas inmadura células dendríticas inmadura células dendríticas madura
latentes

verde = MHC II
rojo = lisosoma lgpA/lamp 1

Mellman et al., 1998

 Impacto de la Inmunohistología

NSE en Merkeloma p53 en Carcinoma Basocelular

alfa actina de musculo

Glucagón en glucagonoma liso en vasculatura

Lab. Biología Molecular, Instituto de Biomedicina

Universidad Central de Venezuela
Inmunolocalización a nivel ultraestructural

Amilasa en células de pancreas Lamp1 en célula HepG2

Proteína A en E-coli Antígenos de Rickettsia

Inmunolocalización a nivel ultraestructural
Pars distalis de la hipófisis

Gamma-MSH

ACTH
 Linfocitos T citotóxicos CD8+ en granuloma
Células de Leishmaniasis

Células Dendríticas CD1a+ en epidermis

humana

Datos: Lab. Biología Molecular.

Instituto de Biomedicina Células NK CD56+ en LCL
 Receptores

TLRs en epidermis y
glándulas sudoríparas

Datos: Lab. Biología Molecular.

Instituto de Biomedicina
 Citocinas
IL-10 LCI

IFN- LCI

Datos: Lab. Biología Molecular.

Instituto de Biomedicina
 Péptidos
antimicrobianos

Péptido LL-37 en leishmaniasis cutánea difusa

Datos: Lab. Biología Molecular.

Instituto de Biomedicina
 Microscopia de inmunofluorescencia
Ensayos de Viabilidad

Parásitos vivos que emiten una señal de fluorescencia a 510 nm (verde) y los muertos que
emiten una señal a 580 nm (rojo). Naranja de acridina/ Bromuro de etidio. Barra: 10mm.
 Interacción Célula Dendrítica y Leishmania

1 hr

L. (L.) mexicana L. (V.) panamensis L. (V.) panamensis

D2SC-1 + amastigotes D2SC-1 + promastigotes FSDC + amastigotes
Amastigotes L. mexicana en leishmaniasis múrida
Metodos de Inmunofluorescencia
 Efectos del péptido antimicrobiano LL-37 sobre la proliferación

Control de fluorescencia Sin estímulo LL-37 2 µM

CFSE
+ estímulo

Proliferación

Antígeno de L. mexicana Antígeno + LL-37 1 µM Antígeno + LL-37 2 µM Antígeno + LL-37 5 µM

70 *
* Sin estímulo
proliferación (%)

LL-37 2M
50 Antígeno
Ag+ LL-37 1M
30 Ag+LL-37 2M
Ag+LL37 5M

10

Sin estímulo
LL-37 2uM
AntígenoAg+ LL-37
Ag+LL-37
1uM Ag+LL37
2uM 5uM
Gracias
@ftapia

felix.tapia@gmail.com

https://fjtapia.wordpress.com/

http://saber.ucv.ve/