INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

LABORATORIO DE QUÍMICA ORGÁNICA
PRÁCTICA 10 “ENSAYOS CUALITATIVOS DE
AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS”

Téllez Sandoval Dioney – Buendia Granillo Mitzi – Gonzalez Torres Diana

1OV2
OBJETIVOS
Por medio de sus propiedades físico-químicas
Identificar
aminoácidos
HIDROLISIS Por cromatografía en placa fina
DE UNA
PROTEINA

Poner en evidencia los grupos funcionales de los aminoácidos

presentes mediante reacciones cualitativas
INTRODUCCIÓN
¿Qué es un polímero?
 Son macromoléculas que se forman con la vinculación de
otras clases de moléculas denominadas monómeros.

Las proteínas son polímeros biológicos, componentes

principales de células vegetales y animales; químicamente
son poliamidas, cuyos monómeros son α-aminoácidos.
Enlace peptídico
 Los péptidos y
las proteínas están formados
por la unión
de aminoácidos mediante
enlaces peptídicos.
 Es un enlace entre el
grupo amino (–NH2) de
un aminoácido y el
grupo carboxilo (–COOH) de
otro aminoácido.
 AMINOACIDOS
Un aminoácido es una molécula orgánica con un grupo amino (-NH2) y un grupo
carboxilo (-COOH).

Los aminoácidos se pueden clasificar en 𝛼, β o 𝛾-aminoácidos dependiendo de la

posición del grupo amino en la cadena carbonada.

Cuando el número de aminoácidos es mayor de 80, se considera proteína.

 TIPOS DE
AMINOÁCIDOS
• Los 𝛼 -aminoácidos son
especialmente importantes, a esta
familia le pertenecen los 20
aminoácidos que forman parte de
las proteínas.
 PROTEÍNAS
• Sonbiomoléculas o
polímeros
formadas por
cadenas lineales de
aminoácidos
(mayores a 80), se
clasifican de
acuerdo a su
función que
desempeñan:
PROTEÍNAS FIBROSAS O
ESTRUCTURALES
Sirven como armazón y son la base de
nuestros tejidos y órganos, y también son
insolubles en agua por alto contenido de
aminoácidos hidrofóbicos.
• Colágenos: en tejidos con cartílago
• Queratinas: en formaciones epidérmicas:
pelos, uñas, plumas, cuernos
• Elastinas: en tendones y vasos
sanguíneos
• Fibroínas: en hilos de seda, (arañas,
insectos)
 PROTEÍNAS GLOBULARES O
HEMOPROTEÍNAS
• Adoptan formas esféricas o globulares
compactas doblando sus cadenas, por lo que
presentan estructuras terciaria y cuaternaria.
• Son proteínas pequeñas solubles en agua
• Desempeñan diferentes funciones en el
organismo, como transportadores de oxígeno
• (hemoglobina); catalizadores biológicos
(enzimas); mediadores químicos (hormonas);
en
• el sistema inmunológico (anticuerpos, gama
globulina),
 PROTEÍNAS CONJUGADAS O
HETEROPROTEÍNAS
• Formadas por una fracción proteica y
por un grupo no prostético
• Glucoproteínas: formadas por una
fracción glucídica (del 5 al 40%) y una
fracción proteica unidas por enlaces
covalentes
• Lipoproteínas: formados por un
núcleo con lípidos apolares y una capa
externa polar
• Nucleoproteínas: Son asociadas con
un ácido nucleico (que puede ser ARN
o ADN).
ESTRUCTURA DE UNA PROTEÍNA

Las proteínas se pueden
hidrolizar con soluciones
diluidas de ácidos minerales
a ebullición suave
Hidrólisis parciales: Se obtienen fragmentos
peptídicos, así como aminoácidos aislados
Hidrólisis totales: Donde se obtienen mezclas
de aminoácidos.

Determinación Algunas de estas

de la estructura reacciones son coloridas,
de una proteína como la reacción
xantoprotéica y la reacción
con ninhidrina.

Técnica cromatográfica,
Dependiendo del tipo de
aminoácidos que contenga
una proteína, se pueden
realizar diferentes análisis Reacciones químicas, que pongan de manifiesto
la presencia de determinados aminoácidos.
 PROPIEDADES DE LOS REACTIVOS

Acido clorhídrico
– Peso molecular: 36,458 g / mol
– Masa: 35.977 g / mol
– Densidad: 1.639 g / L
– Punto de ebullición: 321 K (48 °C)
– Punto de fusión: 247 K (-26 °C)
– Olor: Olor picante e irritante.
– Estado físico: Líquido corrosivo transparente,
incoloro o ligeramente amarillento. COR
– Solubilidad en agua: 82.3 g / 100 g de agua a 0 ° C
- Síntomas: irritación nariz, garganta, laringe; tos,
asfixia; dermatitis; solución: quemaduras en los ojos, la
piel; líquido: congelación; En animales: espasmo
laríngeo; edema pulmonar
Hidróxido de sodio
– Peso molecular: 39.997 g / mol
– Estado físico: líquido incoloro o cristales blancos
– Color: incoloro o blanco W
– Olor: Inodoro
– Punto de fusión [°C] : 323 °C
– Densidad : 2,1 g/cm3
– pH : 13 a 14 (0,5% disoln.)
– Solubilidad en agua : 111 g/100 ml (20 °C)
– Punto de ebullición [°C] : 1390 °C
– Sintomas: irritación de ojos, piel, membrana mucosa;
neumonitis; ojo, quemaduras en la piel; pérdida temporal de
cabello. También es conocido como sosa cáustica.
Acetato de plomo
-Temperatura de ebullición: 100◦C
‐Temperatura de fusión: 75°C
‐Densidad: 2.55 ‐pH: : 5.5‐6.5
‐Peso molecular: 379.3 g/mol
‐Estado físico: Gránulos cristalinos blancos
‐Inhalación: El plomo puede ser absorbido a través del
sistema respiratorio.
‐Piel: El plomo y los compuestos de plomo se pueden
absorber a través de la piel en la exposición prolongada
‐Ingestión: ¡VENENO! Los síntomas del
envenenamiento del plomo incluyen el dolor y los
espasmos abdominales, náusea, vomitando, dolor de
cabeza
 Ninhidrina
- Fórmula molecular: C₉H₆O₄
- Masa molar: 178.15 g/mol
- Estado físico: sólido (polvo
cristalino) amarillo pálido.
- pH (valor) 4,6 - 5
- Punto de fusión: 250-258 °C
- INHALACION Tos, dolor de garganta.
- Solubilidad en agua a 20 °C: 20 g/l
 Nitrito de Sodio
-Fórmula química: NaNO2
- PM: 69g/mol
- Aspecto: De color blanco o amarillento granulado cristalino
- Solubilidad: 85,2 g/100 g de agua @ 20ºC
- Densidad: 2,17
- pH: 9.0 Solución acuosa
- Punto de ebullición: 320ºC
- Punto de fusión: 271ºC
- Inhalación: Tóxico. Causa irritación a las vías respiratorias y el
envenenamiento sistémico con síntomas paralelos a los de la ingestión.
- Ingestión: Tóxico. Puede irritar la boca, esófago, estómago, etc.
- Contacto con la piel: Causa irritación, enrojecimiento y dolor.
 Sulfato de cobre
• Estado físico: Sólido granular o polvo. Color: azul transparente.

• pH: 3.5-4.5

• Punto de ebullición : 150 °C

• Punto de fusión: 110°C

• Densidad (20°C): 2,284 g/cm³ Solubilidad: 20.3g/100g Agua

• Peso Molecular : 249.68 g/mol

• - Inhalación : Causa irritación a las vías respiratorias, los síntomas pueden incluir tos,
dolor de garganta y dificultad para respirar

• Contacto con los ojos : El polvo puede causar irritación. El contacto puede causar
conjuntivitis, ulceración, o nubosidad de la córnea.

• - Ingestión : Puede causar quemaduras dolorosas en la boca, el esófago y el estómago.

Gastritis hemorrágica, náuseas, vómitos, dolor abdominal, sabor metálico y puede dar
diarrea.

• - Contacto con la piel : Puede causar irritación y picazón

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
PREPARACIÓN DE SOLUCIONES

I-Hidrólisis de Grenetina
Descomposición de sustancias orgánicas por acción del agua
 I-Hidrólisis de Grenetina (Solución “A”)

En un matraz
balón de fondo • Poner a reflujo • Después de • Continuar
plano de 200 mL y calentar transcurrido el calentando por
colocar: suavemente tiempo 2 min y filtrar
• 1g de grenetina por 35 min agregar 0.5g
• 15 mL de HCl de carbón
• 10 mL agua activado
destilada
 II- Solución neutralizada de
hidrolizado de grenetina (Solución “B”)

• Tomar 5 mL de • Neutralizar con • Determinar el • Filtrar

la disolución “A” NaOH al 10% punto de
neutralización

NOTA: Utilizar ésta solución de grenetina

hidrolizada a pH neutro (solución “B”),
para efectuar la cromatografía, la prueba
de ninhidrina y la acción reguladora de
aminoácidos.
 III- Solución de Grenetina sin
hidrolizar (Solución “C”)

• En un vaso de precipitado • Agregar 20 mL de

• Agitar
colocar 0.5 g de grenetina agua destilada
 IV- Solución de Albúmina(Solución “D”)

• Preparar la solución de • Agregar 100 mL de • Filtrar

albúmina agitando la agua y agitar
clara de huevo por 10 seg.

Utilizar este filtrado (Solución “D”)

para efectuar las siguientes pruebas
 REACCIONES DE IDENTIFICACIÓN
Reacción Xantoproteica

En esta reacción se obtiene una coloración amarilla (griego XANTHOS=amarillo). El

ensayo es positivo para las proteínas que llevan el anillo bencénico (aromático) como
la tirosina, triptófano y fenilalanina. El color amarillo se debe a la formación de un
compuesto aromático nitrado. Esta reacción explica la aparición de una coloración
amarilla al caer gotas de ácido nítrico sobre la piel.
 Reacción Xantoproteica
Procedimiento

• Colocar en un • Agregar a cada • Calentar • Enfriar cada • Observar

tubo de ensayo 2 tubo 5 mL de suavemente tubo de ensayo y el cambio
mL de disolución ácido nítrico a baño María agregar gota a de color.
“A” y en otro 2 y observar la gota una
mL de solución coloración disolución de
“D” NaOH al 10%
hasta pH básico
 Reacción de precipitación

El enlace disulfuro en un enlace covalente que se produce cuando dos

grupos sulfhidrílo (SH) reaccionan para formar un puente disulfuro (SS).
Los residuos de cisteína pueden formar puentes disulfuro. Pueden unir 2
cadenas peptídicas o una sola para formar un anillo. Dicha prueba
identifica los enlaces disulfuro de las proteínas en donde la mayor parte
de las proteínas que contengan un numero mayor de puentes disulfuro.
 Reacción de precipitación

• Colocar en un tuvo de • Agregar a cada

ensayo 2 mL de uno 5 mL de • Calentar a
solución “A”, en otro solución de NaOH ebullición con
2mL de solución D y al 10% y 1.0 mL agitación por 5
en el tercero 2 mL de de solución de min y observar los
agua destilada acetato de plomo resultados.
al 10%
 Reacción de Biuret

La prueba de Biuret (sulfato cúprico en medio alcalino) es positiva

para todos los compuestos que tengan dos o más uniones peptídicas.
La coloración púrpura de una reacción positiva se debe a un complejo
de coordinación entre el Cu+2 y cuatro átomos de nitrógeno
proveniente de enlaces peptídicos.
 Reacción de Biuret
A seis tubos de ensayo, colocar las siguientes soluciones

Tubo testigo

• 0.5 mL de • 0.5 mL de • 0.5 mL de • 0.5 mL de • 0.5 mL de

agua solución de solución de solución de solución de
destilada + grenetina sin albúmina grenetina albúmina+
0.5 mL de hidrolizar + hidrolizada sin 0.5 mL de
sol. NaOH 0.5 mL de sol. neutralizar + solución de
al 10% NaOH al 10% 0.5 mL de NaOH al 10%
solución de
NaOH al 10%

A cada tubo, agregar 2 mL. de solución de sulfato de cobre al 2 %.

Agitar, observar y concluir.
 Reacción con Ninhidrina

Esta prueba es positiva tanto para proteínas como para

aminoácidos. En aquellos casos donde no da positiva la
prueba de Biuret, da positiva la de ninhidrina, e indica que no
hay proteínas pero sí hay aminoácidos libres de un ph 4 y 8.
 Reacción con Ninhidrina
• A cada tubo de ensayo colocar las siguientes soluciones

• 0.5 mL de • 0.5 mL de • 0.5 mL de • 0.5 mL de • 0.5 mL de

agua solución de solución de solución de solución al
destilada grenetina grenetina sin albúmina 1% de un
hidrolizada a hidrolizar aminoácido
pH neutro. patrón.

Agregar a cada tubo 0.5 mL de solución de ninhidrina al 3% y

calentar a baño María por cinco minutos

Observar y concluir.
 Reacción de Ácido Nitroso

El ácido nitroso reacciona con el grupo amino formando los ácidos

hidroxilados correspondientes, liberando nitrógeno gaseoso.
 Reacción de Ácido Nitroso
• En cuatro tubos de ensayo colocar 3 mL de HCl concentrado y
enseguida agregar:

• 2 mL de • 2 mL de • 2 mL de • Tubo testigo
hidrolizado grenetina sin solución de sin proteína
de grenetina hidrolizar albúmina

Enfriar y agregar a los cuatro tubos de ensayo, 1 mL de solución acuosa de

nitrito de sodio al 5%. Observar y concluir.
 Acción reguladora de Aminoácidos

Los 𝛼-aminoácidos don anfóteros.

La zona de viraje del rojo congo es
de 5.2. La zona de viraje de la
fenolftaleína es en un pH de 8.6.

Observar y concluir
Efectuar el mismo ensayo
empleando fenolftaleína al
• En un tubo
colocar 2 mL de • Agregar a cada • Agregar a cada 0.1% como indicador, y
hidrolizado de tubo 0.3 mL de tubo gota a gota agregando solución de
grenetina pH de solución HCl 0.1N hasta hidróxido de sodio 0.1N de
neutro y en otro indicadora de cambio de igual forma, hasta cambio
2 mL de agua
rojo Congo coloración de coloración.
destilada
Observar y concluir.
 Cromatografía en placa fina

Los aminoácidos individuales obtenidos por la hidrólisis ácida de la proteína, se

separan por medio de una cromatografía de intercambio catiónico. En este método la
mezcla de aminoácidos es aplicada a una columna que contiene una resina a la cual
está unido fuertemente un grupo cargado negativamente (si estuviese unido un grupo
cargado positivamente, la cromatografía sería de intercambio aniónico). Cada tipo de
aminoácido es liberado de la columna al eluir una solución de fuerza iónica y pH mayor
a la anterior. A medida que el pH se incrementa, los aminoácidos pierden a sus
protones ionizables primero de su grupo a-carboxilo, luego de las cadenas laterales y
finalmente de los grupos amino, de tal manera que se transforman en moléculas
neutras, luego a medida que adquieren carga negativa son liberados de la resina de la
columna. Cada aminoácido emerge de la columna a un pH determinado:
 Cromatografía en placa fina

• Aplicar una • Hacer • Dejar secar el • Eluir el • Secar en la

pequeña aplicaciones cromatograma cromatograma estufa
muestra de de e introducirlo
hidrolizado aminoácidos en una cámara
de grenetina patrón que contenga
neutra una mezcla de
isopromanol-
agua 7:3

• Revelar con un
atomizador que
contenga una
• Identificar los aminoácidos presentes en el hidrolizado de
solución de
grenetina, determinando los valores de Rf
ninhidrina
 CONCLUSIÓN

Se logró identificar los diversos tipos de aminoácidos

presentes en las proteínas gracias a diversas
reacciones como es la reacción Xantoproteíca para
identificar aminoácidos aromáticos, la reacción de
precipitación para identificar enlaces disulfuro en
los aminoácidos, la reacción de Biuret para
identificar enlaces peptídicos, la reacción con
ninhidrina para identificar aminos libres de los
péptidos y por ultimo la cromatografía en placa fina,
con la cual identificamos los aminoácidos presentes
en una proteína hidrolizada con base a su polaridad.
 BIBLIOGRAFÍA

• Robert K. Murray, David A. Bender. (2010). HARPER

Bioquímica Ilustrada.Universidad de California:
McGRAW-HILLINTERAMERICANA EDITORES
• David L. Nelson, Michael M. Cox.. (2009).
LEHNINGER,Principiosde Bioquímica.Californio:
Ediciones Omega
• JohnMcMurry, QUÍMICA ORGÁNICA 7a
edición, Biomoléculas: aminoácidos,péptidos y
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S.A., México2008