Academia Brillanti

BIOLOGIA MOLECULAR Y CELULAR

LISOSOMAS, DEGRADACION Y
MUERTE CELULAR
Pedro Quiroga Castañeda

Julio-2017
 LISOSOMAS
 PROTEINAS DE MATRIZ LISOSOMAL
 PROTEINAS DE MEMBRANA LISOSOMAL

 DEGRADACION DE PROTEINAS
 DEGRADACION LISOSOMAL
 DEGRADACION EN PROTEOSOMAS
 UBIQUITINACION
 AGRESOMAS

 MUERTE CELULAR
 APOPTOSIS

 NECROSIS

 AUTOFAGIA

 OTROS MECANISMOS 2
 lisosomas
 Organelas citoplasmáticas limitadas
por una sola membrana.
 Descubiertas por Christian de Duve.
 Presentes en todas las células
eucariotas.
 Contienen 50-60 enzimas
hidrolíticas.
 Son los degradadores de residuos o
desechos de la célula.
 Su FUNCION catabólica es
complementada por organelas
asociadas a los lisosomas (LROs).

3
 lisosomas

 Matriz lisosomal ácida (PH

4,8) favorable para actividad
enzimática.
 2 clases de proteínas son
esenciales para su
funcionamiento:
 Hidrolasas lisosomales.
 Proteínas
integrales de la
membrana lisosomal (LMPs)

4
 lisosomas
 Enzimas hidrolíticas son elaboradas
en el RE y modificadas en el aparato
de Golgi.
 50-60 enzimas hidrolíticas.
 Degradan material procedente de:
 Endocitosis
 Fagocitosis
 Autofagia
 Participan en:
 Degradación en volumen
 Procesamiento pro-proteínas
 Procesamiento de antígenos
 Degradación de la matriz
extracelular
 Iniciación de apoptosis

5
 lisosomas
 Proteínas integrales de la
membrana lisosomal (LMPs), aprox. 25
en lisosomas de mamífero.
 Cumplen diversas funciones:
 Acidificación del lumen lisosomal.
 Importación de proteínas desde el
citosol.
 Fusión de membranas.
 Transporte de productos de
degradación al citoplasma.
 Las más abundantes:
 Proteína de membrana asociada al
lisosoma 1 (LAMP1).
 Proteína de membrana asociada al
lisosoma 2 (LAMP2).
 Proteína integral de membrana
lisosomal 2 (LIMP2).
 Tetraspanin CD63.
 Bomba de protones tipo vacuolar.

6
CELULAS
ESPECIALIZADAS
EN FAGOCITOSIS
TIENEN GRAN
CANTIDAD DE
LISOSOMAS.
MACROFAGO DE
MEDULA OSEA

EVENTOS DURANTE LA FAGOCITOSIS: FORMACION

ACTIVIDAD EN LOS FAGOLISOSOMAS

USMP-FMH-FN-BCM-2016-II H. Lezama 8
 LAS ENZIMAS
DESTRUYEN EL
CONTENIDO DEL
FAGOLISOSOMA
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II H. Lezama 9
 lisosomas

Biogénesis lisosomal:

 Requiere integración de
vías endocítica y
biosintética.
 FrecuenTEMENTE emerge
del aparato de Golgi.
 En algunos casos SE
desarrolla gradualmente
a partir de endosomas
tardíos .

10
LAS CÉLULAS CONTIENEN MÚLTIPLES
SISTEMA PARA
DEGRADAR PROTEÍNAS.

l El Sistema Ubiquitin-proteasoma
l El Sistema Lisosomal
l El Sistema Intra-mitochondria
l Calpains (Ca2+-dependiente de proteases)
l Caspasas
l Proteasas de membranas
11
9
DEGRADACIÓN DE
PROTEINAS MAL PLEGADAS

 Mal plegada = no
funcional.
Desnaturalizacion.
 Rompe enlaces covalentes,
no covalentes, disulfuro.
 Chaperona-n glucanasa-
ubiquitina.
 Proteosoma.

12
 IMPORTANCIA CLINICA
Muchas enfermedades neurológicas y otras son causadas por la
acumulación, mas que por la degradación de proteínas con estructuras
anormales.

 Enfermedad de Alzheimer (b-amyloid, tau)

 Enfermedad de Huntington (Huntingtin)
Tau aggregates  Enfermedad de Parkinson (a-synuclein)
(Azheimer’s disease)

 Enfermedad de ALS “Lou Gerhig’s” (SOD)

 Enfermedad de la espina-Bulbar y atrofia
muscular (receptores de andrógenos).
Lewy Bodies
(Parkinson’s Disease)
Enfermedad por Priones “Mad Cow
13 disease” (prion)
ROL FISIOLÓGICO DE LA DEGRADACIÓN
INTRACELULAR DE PROTEÍNAS

Control de calidad

Procesamiento antigénico

Regulación en funciones celulares

Adaptación a estadios fisiológicos

o patológicos

14
 EL MODELO UBIQUITIN-PROTEASOMA
PARA LA DEGRADACIÓN DE PROTEÍNAS
TIENE DOS FASES.

Proteina

ATP Modificación del substrato

ADP por ubiquitin

Ub
ATP Degradación del substrato
ADP Por el proteasoma

Péptidos y
amino ácidos 15
 UBIQUITINA

O  76 amino acids
=
Gly-C-OH
Carboxyl terminus
 Mr = 8,000
(glycine 76)

 Altamente conservada
 Ampliamente distribuida

(glycine 76) 16
 Proteínas Ubiquitinadas son degradadas
Por el proteasoma.

Proteolisis

Peptides and
ATP ADP amino acids

Not degraded
Proteasome
Reconoce la cadena
Poliubiquitin y no la proteina Monoubiquitin
17
LA ESPECIFICIDAD PARA UBIQUITINACION SE LLEVA A
CABO CON MÚLTIPLES ENZIMAS DE CONJUGACIÓN.
degron
E3(n)

Ubiquitin E3(n)
O E1 E2(n)
E2(n)
=

-C-OH
ATP

G76
E1 E2(n)

PREMIO NOBEL 2004

18
ESTRUCTURA DE UN
PROTEOSOMA

a) Imagen de microscopía
electrónica del
proteosoma 26 S de
levadura S. cerevisae

b) Representación
esquemática de la
estructura y función del
proteosoma 26 S

19
muerte celular
 Apoptosis
 Autofagia
 Cornificación

 Necrosis
 Modalidades atípicas (en estudio):
 Catástrofe mitótica (muerte celular
precedida por multinucleación o muerte
celular durante metafase)
 Anoikis
 Excitotoxicidad
 Degeneración Walleriana
 Paraoptosis
 Piroptosis
 Pironecrosis
20
 Entosis
Muerte celular 21
APOPTOSIS
 Primera denominación: necrosis por
contracción (shrinkage necrosis).
 1972 Ker la denominó apoptosis.
 “caer o morir como caen los pétalos o las
hojas en otoño” (griego).
 Ocurre durante toda la vida.
 Fundamental en la homeostasis.
 De crucial importancia durante el desarrollo.

22
 APOPTOSIS
 H. Robert Horvitz (1986) investigo el modelo genético implicado en la muerte
celular programada.
 Usando un sistema modelo conocido y caracterizado, el nematodo Caenorhabditis
elegans.

 La apoptosis, a diferencia de la necrosis, consume ATP, cuya energía es

utilizada para la activación de unas enzimas llamados caspasas, cuya

activación en cascada producen los efectos que podemos ver en la célula.

23
24
Mechanisms of caspase activation
a. Proteolytic cleavage e.g.
pro-caspase 3

b. Induced proximity, e.g.

pro-caspase 8

c. Oligomerization, e.g. cyt c,

Apaf-1 & caspase 9
25
Back
 APOPTOSIS
 No induce respuesta inflamatoria.
 Cambios morfológicos:
 Pérdida de adhesión celular
 Contracción celular por pérdida de agua y Na+
 Condensación de cromatina a nivel nuclear
(estructuras en media luna)
 Núcleo se rompe en múltiples fragmentos
 Fragmentación del DNA (piezas de 180-200 pb)

26
 APOPTOSIS
 Cambios morfológicos:
 Se mantiene integridad de la membrana
plasmática
 Formación de cuerpos apoptóticos que son
rápidamente reconocidos y fagocitados por
macrófagos o por células vecinas sin pérdida de
su contenido.
• MORFOLÓGICA: ENCOGIMIENTO NUCLEAR Y CELULAR,
CONDENSACIÓN DE CROMATINA (PICNOSIS), FORMACIÓN DE
YEMAS, FRAGMENTACIÓN NUCLEAR (CARIORREXIS) Y
FORMACIÓN DE CUERPOS APOPTÓTICOS.
• BIOQUÍMICA: PERMEABILIZACIÓN DE LA MEMBRANA
MITOCONDRIAL (PMM) Y/O ACTIVACIÓN MASIVA DE
27 LA CASPASAS.
PROCESOS EN LOS QUE INTERVIENE
LA APOPTOSIS

1.- En toda etapa del desarrollo o

reparación tisular en donde se
produzcan células en exceso.
2.- Eliminación de linfocitos.
3.- Eliminación de células infectadas
y tumorales 28
ETAPAS DE LA APOPTOSIS:
1.- Activación (inducción negativa/positiva)

*Receptores
a.- de muerte (Fas, TNF)
b.- normales (glutamato)
*Rutas de transducción celular (mensajeros: Ca2+,
radicales libres, proteínas codificadas por genes
supresores)

2.- Decisión (mitocondria)

3.- Ejecución (degradación de proteínas y ácidos nucleicos)
Caspasas 29
Vías que conducen a la apoptosis
 Vía intrínseca (mitocondrial)

 Vía extrínseca (receptor de muerte)

USMP-FMH-FN-BCM-2016-II H. Lezama 30
Vías que conducen a la apoptosis

Vía intrínseca (mitocondrial)

 Controlada por la interacción de proteínas pro-
apoptóticas y anti-apoptóticas de la familia BCL2.
 Regulada por la caspasa 9 (daño celular abrumador).
 Iniciadores de la vía:
 Incremento intracelular de ROS
 DNA dañado
 Respuesta de proteínas no plegadas
 Deprivación de factores de crecimiento

31
Familia de proteínas BCL2
Anti-apoptótico Pro-apoptótico
 BCL2  BAX
 BCL-XL  BAK
 BCLW  BIM
 MCL1  BID
 A1  PUMA
 BOO/DIVA

32
Vías que conducen a
 Vía extrínseca (receptor muerte):
la apoptosis
Inicia cuando miembros de la superfamilia TNF se unen a
receptores muerte de la superficie celular.
 Receptores de membrana de superfamilia de receptores
TNF (CD95, DR3 y DR4), inducen el reclutamiento
proximal del complejo activador de caspasa.
 Se activa la caspasa-8.

• CASPASA 8 Y CASPASA 9 ACTIVADAS MOVILIZAN A SU VEZ A

LAS CASPASAS 3, 6 Y 7, PROTEASAS QUE INICIAN LA
DEMOLICIÓN DE LA CÉLULA
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II
A TRAVÉS DE LA DEGRADACIÓN
H. Lezama 33
DE
NUMEROSAS PROTEÍNAS Y LA ACTIVACIÓN DE DNASAS.
Vías de la
apoptosis

34
 Apoptosis signal to kill infected cells
Cytolytic lymphocyte/CTL (& natural killer lymphocyte) presents
Fas ligand/CD178 on its surface to tell the infected cell to die

Fas ligand

Externally driven
Apoptotic signals
Cytochrome c

Initiator caspases
The immunological synapse
holds the cells much tighter
together than shown here
Execution caspases

35
Apoptosis events
Fas/ CD95 is the
‘death receptor’
 NECROSIS
 Cuando las células sufren daños tales como
quemaduras, accidentes, radiaciones, traumas,
infecciones, etc. se produce necrosis.
 La muerte no ocurre de forma ordenada, de manera
general el núcleo no presenta cambios aparentes, las
mitocondrias aparecen dañadas, el agua y iones fluyen
hacia el citoplasma y la célula se hincha, con lo que
termina por romperse liberando el contenido celular
quedando en el medio proteasas y señales que atraen
células del sistema inmunitario, por lo que tiene lugar
una reacción inflamatoria en la zona. 36
 NECROSIS
 Características morfológicas:
 Edema nuclear y mitocondrial.
 Formación de prolongaciones en la
superficie celular.
 Desagregación de ribosomas.

Características morfológicas (si persiste la noxa):

Se acentúan más los cambios.
“Burbujeo” extremo en la superficie celular.
Gran dilatación mitocondrial.
Ruptura de la membrana.
Disolución de las organelas y núcleo.
Degeneración lisosomal 37
 Necrosis
 “Cadaver” (griego).
 Respuesta a una
noxa.
 El estímulo de la
muerte es la causa
directa de la
defunción celular.

38
 Necrosis
 Muerte celular por
agresión externa
(física, química o
biológica).
 Gran rESpUESta
inflamatoria en el
lugar de la injuria.
 Cambios
generalmente desde
parte externa hacia
la interna.
39
40
41
USMP-FMH-FN-BCM-2016-II H. Lezama 42
 Autofagia
 “comerse uno mismo” (griego).
 Proceso por el cual la célula recicla sus propias
organelas y componentes macromoleculares no
esenciales, redundantes o dañados.
 Respuesta adaptativa al stress sub-letal.
 Participa en:
 Supresión del crecimiento del tumor.
 Supresión de proteínas tóxicas mal plegadas.
 Eliminación de microorganismos intracelulares.
 Presentación de antígenos.
43
 A lo largo del desarrollo cualquier organismo
necesita la deshacerse de ciertas estructuras y
crear otras
 Durante un proceso de metamorfosis.

44
 Autofagia
Tres formas:

1. Macroautofagia
2. Microautofagia
3. Autofagia mediada por
chaperonas

Regula formación de autofagosoma:

• Fosfatidilinositol 3 kinasa (PI3K)

• Beclin-1 (BECN1)
• mTOR (sirolimus)
45
 aspectos fisiológicos Y moleculares
 Estadios:

1. Vesículas nucleares
2. Elongación vesicular
3. Fusión de una doble
membrana (auto-
fagosoma/lisosoma)
formación del auto-
lysosoma.

46