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Hongos entomopatógenos:

Isaria fumosorosea
FABIOLA GARCÍA
Introducción
Plaga: cualquier organismo que compite y causa daño sobre un animal o vegetal

Hasta el momento se han descrito más de 750 especies de hongos entomopatógenos y el


aislamiento de nuevas cepas continúa. Dentro de los más utilizados a nivel mundial se
encuentran Metarhizum anisopliae (33.9%), Beauveria bassiana (33.9%), Isaria
fumosorosea (transferida al género Isaria, antes Paecilomyces fumosoroseus) (5.8%) y Beauveria
brongniartii (4.1%)

De Faria & Wraight, 2007


Generalidades:
Taxonomía. Género Isaria.
La primer descripción de I. fumosorosea fue realizada por
Wize en 1904 cuando lo aisló de una larva del gorgojo de
la remolacha azucarera Cleonus punctiventris en Ucrania.
Se encuentra comúnmente en el suelo, plantas, agua y,
menos frecuentemente, en el aire en todos los
continentes excepto en la Antártida. Se ha aislado de más
de 40 especies de artrópodos, representando 10 órdenes.

Organismos susceptibles: gorgojos, escarabajos de tierra,


escarabajos de plantas, pulgones, moscas blancas,
Reino: Fungi. psílidos, avispas, termitas y una variedad de mariposas y
División: ascomycetos polillas
Clase: sordariomycetos
Orden: hipocreales
Familia: Clavicipitaceae

Hussein et al., 2016; Zimmermann, 2008


Morfología
Hongo de rápido crecimiento
Colonias de aspecto de fieltro, polvoriento, granular
Al principio las colonias son blancas, y pueden permanecer
así o cambiar con el tiempo a tonalidades rosadas y grisáceas.

Los conidióforos se producen solos o en grupos, de


paredes lisas, hialinas, con verticilos ramificados con
grupos de 3-6 fiálides. Las fiálides tienen forma de matraz
con una porción basal globosa a elipsoidal, y
los conidios son cilíndricos

Zimmermann, 2008
Físico y químico. Tubo y enzimas: proteasas, lipasas y quitinasas

Tubo germinativo
penetra

Mecanismo de acción
El desarrollo de la enfermedad en el insecto
esta dividido en tres fases:
1. Adhesión y germinación de la espora en
la cutícula del insecto
Inhibición del
2. Penetración en el hemocele (sistema sistema regulador
y mortandad
circulatorio) y
3. Desarrollo del hongo, que generalmente
resulta en la muerte del insecto

Téllez-Jurado et al., 2009


Insectos sobre los que tiene
patogenicidad
Las principales ordenes de insectos que afecta I. fumosorosea son:
Acari
Blattodea
Coleoptera
Díptera
Hemiptera (mosquita blanca)
Hymenoptera
(abejas, avispas, hormigas)
Isóptera (polillas)
Lepidoptera (mariposas)
Neuroptera
Xylosandrus germanus Anastrepha ludens Diaphorina citri (psílido de los
Thysanoptera (trips o arañuelas)
cítricos)
Kushiyev et al.,2018; Stauderman et al., 2012;
Procesos de producción
El proceso de desarrollo de un agente de control biológico conlleva varias etapas desde el
aislamiento del microorganismo
La etapa inicial comprende el aislamiento del microorganismo y la evaluación de su actividad
plaguicida, además de definir un medio de cultivo que cubra los requerimientos nutricionales
para la esporulación y que sea adecuado para la obtención masiva del inóculo permitiendo una
buena relación costo-rendimiento en la producción

I. fumosorosea produce principalmente dos tipos de propágulos (estructura de reproducción):


Conidios (pared gruesa, más viables para utilizarse en biocontrol)
Blastosporas esporas asexuales exógenas (Se les considera una forma levaduriforme; estas son
más sensibles a la desecación y tienden a morir más rápidamente que los conidios )

Gandarilla, 2012
Medios de cultivo
Los tipos de cultivo más comúnmente utilizados en la producción de
hongos se pueden clasificar en cultivos bifásicos y cultivos líquidos
agitados o fermentaciones líquidas
Cultivo bifásico.
En este tipo de cultivo se desarrolla el inóculo en líquido agitado y luego se
pasa al soporte sólido. El arroz es el más utilizado a nivel mundial.
Sustratos: Amplio rango sustratos sólidos. Un sustrato ideal es aquel que
proporciona grandes espacios para la aireación, que mantiene sus
partículas individuales separadas después de la hidratación y esterilización
para proveer espacios entre partículas y la formación de conidios.
Cereales y los residuos agroindustriales son los sustratos nutritivos más
utilizados en la producción de hongos entomopatógenos (Desventaja:
menos control sobre el ambiente nutricional) El sustrato nutritivo
comúnmente seleccionado para la producción de conidios de hongos es
Oryza sativa L. (Disponibilidad mundial)

Gandarilla, 2012
Medios de cultivo
Cultivos líquidos agitados o fermentaciones líquidas
Alto grado de automatización del proceso, son muy rápidos, óptimo aprovechamiento de los
nutrientes (excelente para escalamiento industrial), abundantes blastoesporas (Desventaja:
aislados tienden a crecer como pellets miceliales)

Gandarilla, 2012
Estudios
En un estudio se evaluó el potencial entomopatógeno de Isaria fumosorosea y se usó como
referencia un aislado de una cepa comercial (Paesin) de Isaria fumosorosea sobre Bemisia tabaci
(Ninfa, huevo, pupa, adulto) bajo condiciones de invernadero en un cultivo de Phaseolus vulgaris L.
(frijol)

Se corroboró que La viabilidad de las conidias


la concentración fue determinada mediante
de ingrediente siembra del hongo en cajas de
Petri conteniendo agar
activo del hongo
incubadas
fuera de 5×109 durante 24h a 26ºC. Las Se realizaron cinco aplicaciones
conidias fueron consideradas con intervalos de siete días
Cada unidad experimental mediante una aspersora manual.
consistió en una maceta con como viables una vez que
emitieron el tubo germinal. Conteo (cámara de Neubauer)
planta de frijol y se colocó la
mosquita blanca en
diferentes estadios

Ruíz et al., 2013


Resultados: Humedad relativa 62%. Se ha
reportado necesaria 85% para Isaria
fumosorosea. Fuerte asociación de formación
de esporas en superficie del insecto con la
humedad

Resultados: En cada una de las cinco


aplicaciones se encontraron diferencias
significativas en el número de individuos muertos
ocasionado por I. fumosorosea en comparación
con el testigo, para los diferentes estados
poblacionales. siendo el número de ninfas totales
en el que mayor mortalidad ocurrió, mientras que
fue el estado adulto el que presentó la menor
mortalidad (<30%) . Menos susceptibles al efecto
micoinsecticida.

La mortalidad ocasionada por el hongo I.


fumosorosea
en los estados ninfales, de huevo y de pupa
muestra el
potencial que tiene el hongo para ser utilizado
como agente microbiológico en el control de
mosquita blanca en el cultivo de frijol.
Estudios
En un bioensayo se evaluaron las cepas ARSEF 3581, FE 9901, Apopka-97 de Isaria fumosorosea
Wize y una formulación commercial (Apopka-97 conidial) contra el psílido de los cítricos
Diaphorina citri (Hemiptera)
Todas las cepas fueron Las pruebas de Se produjo una mortalidad del 100% La mortalidad más rápida se observó
suministradas como viabilidad se de psílidos dentro de los primeros 12 para FE9901 y ARSEF 3581, seguido
formulaciones de realizaron en cada días en las concentraciones más altas, de la blastospora Apopka-97 y luego
blastosporas pulverizadas cepa con una mientras que en general más del 80% la formulación comercial conidial.
sobre salvado (Apopka-97) suspensión de 0.5 de los psílidos murieron con las
o tierra de diatomeas ml que contenía concentraciones más bajas para Dentro de las 24-48 horas
(ARSEF 3581 y FE 9901), se 105 esporas por ml todas las formulaciones. posteriores a la muerte, se
secaron al aire y se desarrolló un crecimiento micelial
cerraron al vacío en bolsas significativo en el insecto muerto,
que contenían entre 109 y seguido del desarrollo de fialides y
5x109 UFC conidiogénesis.

Blastosporas o conidios /mL


Stauderman et al., 2012
Estudios
En un estudio realizado se utilizaron 3 diferentes técnicas para la propagación masiva de aislados nativos del Noreste de
México de I. fumosorosea: HIB-19, HIB-23, HIB-29 y HIB-30

Fermentación sólida
Cultivo sumergido (Producción de Cultivo bifásico (Producción de (Producción de conidios)
blastosporas) conidios)

2 medios: Casaminoácidos y peptona de Todos los aislados fueron cultivados en agar papa Los aislados fueron cultivados en agar
colágeno dextrosa entre 14 y 21 días a 25°C. Después se papa dextrosa entre 14 y 21 días a 25°C.
Todas las cepas fueron cultivadas por 14 prepararon suspensiones de 1×106 conidios/ml Se prepararon suspensiones a una
días en agar papa dextrosa a 25°C y se con agua destilada para inocular 10 mL en concentración de 1×106 conidios/ml, estas
prepararon suspensiones de 5x105 matraces se utilizaron para inocular el sustrato.
conidios/mL para inocular cultivo líquido.
Se secaron las blastosporas y se cultivaron
en tierra de diatomeas al 5% (p/v). Se En ambos cultivos se inocularon los conidios en bolsas conteniendo 50g de arroz y 60% agua. Se
determinaron la concentración de inocularon con 5 ml de cada una de las suspensiones del pre-cultivo en el caso del cultivo bifásico, o
blastosporas, biomasa y % de viabilidad con 5 ml de cada una de las suspensiones de conidios para la fermentación sólida, se incubaron por 14
días a 25°C con luz blanca y agitadas c/3 días. Se determinó concentración de conidios y % de
viabilidad

Gandarilla-Pacheco et al., 2018


Cultivo sumergido
(Producción de blastosporas)

Concentración de blastosporas: En el medio de casaminoácidos se registró un aumento exponencial a partir de las


48h, en cambio con el medio con peptona de colágeno hasta las 72h de incubación.
Biomasa: La cepa Pfr-612 mostró la mayor producción (13,50 g/l) y el aislado HIB-23 solamente 7,70 g/l.
% Viabilidad: El porcentaje de germinación para el medio con casaminoácidos fue del 40-51%, mientras que para el
de peptona de colágeno fue del 55-56%

Gandarilla-Pacheco et al., 2018


Cultivo bifásico Fermentación sólida
(Producción de conidios) (Producción de conidios)

Producción de conidios: El valor mínimo de 5,69 × Producción de conidios: El valor mínimo de 6,69×108conidios/g
105conidios/g se registró para el aislado HIB-19 y se registró para el aislado HIB-29 y el máximo de 1,58×109
el máximo de 9,00 × 106conidios/g para el aislado conidios/g para la cepa Pfr-612
HIB-30
% Viabilidad: Los valores de germinación en promedio fueron
superiores al 90% a las 4 o semanas de almacenamiento.

Comparativo final de la producción de unidades infectivas de I. fumosorosea


según el método y el aislamiento:
La producción de conidios en fermentación sólida fue el método con el que se
obtuvieron los mejores resultados, ya que la producción de unidades infectivas de
I. fumosorosea con ese método superó a la de la fermentación líquida y a la del
cultivo bifásico. Estos resultados muestran el potencial de I. fumosorosea para
producir propágulos para el control de plagas

Gandarilla-Pacheco et al., 2018


Estudios
Las matrices de formulación pueden desempeñar un papel importante en la mejora de la
supervivencia de almacenamiento y la eficacia del control biológico de los
microorganismos utilizados para el control de insectos plagas.
En un estudio, se formularon blastosporas líquidas producidas en el cultivo del hongo
entomopatógeno Paecilomyces fumosoroseus con diferentes materiales orgánicos e
inertes. Las blastosporas de Paecilomyces fumosoroseus se produjeron en dos medios
líquidos diferentes, un medio de sales basales suplementado con casaminoácidos y
glucosa (LM1) y un medio que contiene peptona de colágeno y glucosa (LM2). Las
blastosporas producidas en los dos medios de prueba se formularon con varios soportes:
almidón de maíz, harina de arroz, polvos de talco, lima mexicana, arcilla de caolín
calcinada y tierra de diatomeas, los cuales fueron probados a distintas concentraciones
Suspensión: concentración 1x105 conidios/ml. Después de 3 días de crecimiento en
cultivo líquido, I. fumosorosea produjo blastosporas con un rendimiento de 5x108
esporas/ ml en LM1 y 5x107 esporas / ml en LM2
Se evaluó la supervivencia inicial y a largo plazo (después del almacenamiento a 4 y 28 °
C) de las blastosporas formuladas secadas al aire (En todas las formulaciones probadas,
la supervivencia de las esporas con el tiempo se redujo para las formulaciones de
blastosporas almacenadas a 28 ° C en lugar de a 4 ° C)
Bajo las condiciones de producción, secado y almacenamiento utilizadas, las
formulaciones de arcilla de caolín calcinado almacenadas a 4 ° C tuvieron la mejor
estabilidad de almacenamiento.

Sandoval-Coronado et al., 2001


Productos comerciales
Nombre comercial Orden / Familia Productora País
PreFeRal Hemiptera (Aleyrodidae) Biobest n.v. Europa, Japón.
Priority Eriophyidae,Tetranychidae (ácaros) T.Stanes & Company India
Pae-Sin Hemiptera (Aleyrodidae) Agrobiologicos del Noroeste México
S.A. de C.V. (Agrobionsa)
P. Fumosoroseus P. Fumosoroseus Centro de Sanidad Vegetal de México
Guanajuato (CESAVEG)
PFR-97 Hemiptera (Aleyrodidae, Certis, Inc. USA, México
Aphididae), Thysanoptera
(Thripidae), ácaros
(Tetranychidae)
Ago Biocontrol Coleoptera, Nematoda Ago Biocontrol Colombia
Fumosil Hemiptera (Aleyrodidae, Productos Biológicos Perkins Colombia
Aphididae, Pseudococcidae),
Thysanoptera (Thripidae)

De Faria & Wraight, 2007


Productos comerciales
Control de la mosca blanca del tabaco (Bemisia tabaci)
y la mosca blanca del invernadero (Trialeurodes
vaporariorum).
Bibliografía
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