Uuh-Narvaez Josabet

Fundamento de separación Composición de la fase estacionaria y fase móvil Cromatograma

muestra Fase estacionaria Fase móvil

analito
Solventes que imitan la
empaque Etapa de fuerza iónica y la
interacción polaridad experimentada
Ligando
por el analito y el ligando
Etapa de en su entorno.
Etapa de lavado
elusión Fig. 2 Separación de isoenzimas H4 y M4 de LDH.
Condiciones: muestra, 1,3 µg de LDH-H4 y 11.8 µg
de LDH-M4; columna, 10 cm \ 5 mm i.d.; fase
Solución con empaque Ligando estacionaria, Cibacron Blue F3G-A en
Bioespecifica LiChrosorb Si 60, 5 µm; fase móvil, 1 ml min-1 de
analito puro Columna tampón de fosfato de potasio (pH 7,5); después
regenerada de 3 minutos comienza un gradiente de NADH de
0-4 mM; detector, actividad enzimática con UV,
Inespecífica 340 nm. Temperatura 4ªC.
Figura 1.- etapas en la separación del analito en
cromatografía de afinidad. Gran superficie, De origen biológico
tamaño y o sintético Columnas Ram Cromatography
Características de los analitos porosidad
controlable
Su mayor campo es la
purificaciòn o aislamiento de Tipos de ligandos
Ligandos de alta especificidad
sustancias de naturaleza
Anticuerpos
biologica : proteìnas o àcidos Geles orgánicos: Inhibidores de enzimas y cofactores
nucleicos Acidos nucleicos
Agarosa
1 •Solubilidad Ligandos generales
Referencias bibliográficas
Acrilamida Lectinas
2 •Capacidad amortiguadora Proteina A y Proteina G
Fractogel TSK Boronatos • Hage David. 2010. Crhomatography Affinity. En
Absorbance- Antibiotcs (1, pp.17-23) Linconl,
3 •Especificidad Tintes sinteticos Nebraska: Tylor and Francis group.

Sílice CPG Metales quelados

• VeronikaR. Meyer. (2004). Practical high performance
liquid chromatography. St.Gallen: John Wiley y Sons.