Presentado por:

M. en C. Williams Ramos Torres

Profesor:
Dr. José Manuel Cervantes Uc
Octubre 2018
I. Introducción CENTRO PÚBLICO DE INVESTIGACIÓN CONACYT

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 I. Introducción CENTRO PÚBLICO DE INVESTIGACIÓN CONACYT

Al aumentar la presión y la temperatura

de una muestra húmeda, es posible
secar la muestra al lograr el "punto
crítico" de ese líquido en el que el límite
de fase entre sus estados líquido y
gaseoso es eliminado. En este estado, el
gas se libera lentamente, minimizando
así el efecto de las fuerzas de tensión de
la superficie en las ultraestructuras
celulares.

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 I. Introducción CENTRO PÚBLICO DE INVESTIGACIÓN CONACYT

EM Sample Preparation Critical Point Drying, Julio 2013, Leica microsystems

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 I. Introducción CENTRO PÚBLICO DE INVESTIGACIÓN CONACYT

Agua y alcohol puntos críticos extremadamente altos

El uso del secador de punto crítico tiene que

Agua Pc= 218 atm, 374 ºC
Etanol Pc= 60 atm, 241 ºC
CO2 Pc= 73 atm, 31 ºC
ser precedido por el proceso de deshidratación
del etanol mediante el uso de concentraciones
crecientes de etanol para eliminar
gradualmente o, más bien, diluir el agua en el
tejido de la muestra, hasta que el componente
de agua en las células se sustituye
completamente con etanol al 100%.

EM Sample Preparation Critical Point Drying, Julio 2013, Leica microsystems

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 II. Objetivo CENTRO PÚBLICO DE INVESTIGACIÓN CONACYT

Mostrar el uso de CO2 como fluido supercrítico en la

preparación de muestras para microscopía electrónica
de barrido.

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 III. Metodología CENTRO PÚBLICO DE INVESTIGACIÓN CONACYT

•Al buffer de fosfatos de sodio 0.2 M y pH 7.2 se le adiciona el

reactivo Glutaraldehído (C5H8O2) en porcentaje de 2.5%,
Fijación
•Las muestras son sumergidas en el fijador durante 48 horas, 24
horas temperatura ambiente, 24 a 4ºC.

Lavado de Las muestras se lavan con el buffer de fosfatos de sodio 0.2

muestras M y pH 7.2,(sin fijador)

La deshidratación se realiza con etanol (C2H6O) a diferentes

Deshidratación concentraciones graduales (30%, 50% y 70%, 85% 96 y
absoluto).

Secado por CO2 Secado de las muestras empleando C02

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III. Metodología CENTRO PÚBLICO DE INVESTIGACIÓN CONACYT

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IV. Ejemplos CENTRO PÚBLICO DE INVESTIGACIÓN CONACYT

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IV. Ejemplos CENTRO PÚBLICO DE INVESTIGACIÓN CONACYT

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 V. Bibliografía CENTRO PÚBLICO DE INVESTIGACIÓN CONACYT

• Mogana Das Murtey and Patchamuthu Ramasamy , “Sample Preparations for Scanning Electron
Microscopy – Life Sciences”. Modern Electron Microscopy in Physical and Life Sciences.
http://dx.doi.org/10.5772/61720

• EM Sample Preparation Critical Point Drying, Julio 2013, Leica microsystems

• Protocolo de preparacion de muestras biológicas (CICY)

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