Aislamiento celular por

gradiente de densidad
y cultivo celular
Fundamento
 Muchos de los avances en biología celular y molecular son el resultado de estudios
llevados a cabo en células especializadas. Como los tejidos y órganos que componen
un ser vivo están formados por múltiples tipos celulares, una de las primeras tareas a las
que se enfrenta el investigador consiste en aislar una población pura de un
determinado tipo de células. Las diversas técnicas de separación se basan en las
diferencias existentes entre los distintos tipos celulares como, por ejemplo:
* la densidad de las células
¿Cómo se utiliza?
 SEDIMENTACIÓN ISOPÍCNICA
Esta técnica permite separar células en función de su densidad. Este método es
ideal para separar células cuyas densidades difieren en más de 0,02 g/ml. Para
ello se utilizan centrifugadoras convencionales y se aplican campos gravitatorios
de baja intensidad. La separación se consigue haciendo sedimentar las células en
un gradiente de densidad. Se distinguen dos tipos de gradiente de densidad:

• Gradiente discontinuo
•Gradiente continuo
 El medio con el que se forma el gradiente de densidad debe ser muy soluble
en agua para poder abarcar un amplio rango de densidades. Además, debe ser
inerte, no debe ser tóxico, no debe ser viscoso a concentraciones elevadas y
no debe ejercer mucha presión osmótica en disolución.
 En un gradiente de densidad, las células sedimentan hasta alcanzar aquella
posición en la que su densidad iguala a la del medio.
 Una vez separadas, hay que
extraer las células del gradiente
de densidad. Una forma de
hacerlo es introducir un medio de
flotación (muy denso)
directamente en el fondo del tubo
para que vaya desplazando el
gradiente y las células hacia
arriba. Las células son canalizadas
hacia el tubo de salida y se
recogen en una placa con
múltiples pocillos que ya tienen
medio de cultivo. Las células
diluidas ya separadas se cultivan
hasta alcanzar el número deseado
para realizar los experimentos
planeados
Ventajas del aislamiento celular
 Ventajas:
 estas técnica han permitido conocer el comportamiento in vitro de todo tipo
de células
 estas técnica son utilizadas para la producción de biofármacos
 ha permitido grandes avances en la búsqueda de nuevas curas
a enfermedades que antes se creían incurables
Cultivo celular

 Es el cultivo de células aisladas de

eucariotas pluricelulares, especialmente
células animales.
 Crecimiento de microorganismos como las
bacterias y la levadura, o de células
humanas, vegetales o animales en el
laboratorio. Los cultivos celulares pueden
usarse para diagnosticar infecciones, para
probar medicamentos nuevos y para la
investigación.
Ventajas del cultivo celular
 Como VENTAJAS de estos cultivos podemos citar:
Permiten un control preciso y fino del medio ambiente. En un cultivo se pueden
controlar las condiciones físico-químicas (pH, temperatura, etc.), y fisiológicos
(hormonas, factores de crecimiento, densidad celular, etc.).
Caracterización y homogeneidad de la muestra. La presión selectiva de las condiciones
de cultivo da lugar a un cultivo homogéneo del tipo celular más vigoroso. Esto facilita
mucho el tratamiento estadístico de los resultados.

Desventajas del Cultivo celular:

• Cantidad y coste. Producir 1 gramo de células en cultivo cuesta 10 veces menos que
obtenerlas a partir del tejido de un animal. Sin embargo, para producir hasta 100
gramos de células hay que incrementar tanto el instrumental como el personal, y
cantidades mayores necesitan instalaciones de tipo industrial.
Gracias