UPAO-BIOLOGIA - 2019

SEMINARIO 3
CELULAS MADRE Y SUS
APLICACIONES
TERAPEUTICAS

Mblgo. Dr. Enrique Martin Alva

C.B.P. : 3582 R.N.B.E : 0090
DOCTOR EN CIENCIAS BIOLOGICAS
MAGISTER EN MICROBIOLOGIA CLINICA
ESPECIALISTA EN ANALISIS CLINICOS Y BIOLOGICOS
Objetivos de aprendizaje
• Conocer los conceptos básicos sobre las células madre: tipos,

características y origen.
• Aprender los mecanismos de acción de las células madre in vitro e
in vivo.
• Conocer las posibles aplicaciones de la terapia celular en
combinación con la terapia génica y/o la bioingeniería.
• Hacerse cargo del potencial real de las células madre y de las
perspectivas futuras en medicina regenerativa
La historia de una vida…
30 billones de
células
Morfológica y
Metabólicamente
Diversas
 ¿Qué es una célula madre?
Célula madre

AUTO-RENOVACIÓN DIFERENCIACIÓN
(hacer copias) (especialización)

Célula especializada
Célula madre Por ej. muscular, nerviosa

www.eurostemcell.org/films
Lo que muestra el diagrama
¿Porqué auto-regenerarse Y diferenciarse?
1 célula madre

4 células
especializadas

1 célula madre
Auto-renovación: asegura Diferenciación reemplaza células
no se acaben las células muertas o
madre dañadas durante la vida
 Células madre de los tejidos:
Introducción a la renovación de tejidos:
Jerarquía de la Diferenciación

célula madre
célula madre:
- puede auto-renovarse
- se divide raras veces
- potencialidad alta TOTIPONTES Progenitores comprometidos:
- escasa - “células amplificadoras Células especializadas:
transitorias” - trabajan
- multipotentes - no se dividen
- se dividen rápidamente
-No se auto-renuevan
células precursoras o progenitoras
 GENERALIDADES

Con el desarrollo actual de la investigación y los avances obtenidos en los campos de la biología celular, se
ha identificado una nueva posibilidad terapéutica en medicina basada en los nuevos conocimientos sobre las
células madre y su capacidad de diferenciarse en nuevos y diferentes tejidos, a esto se le ha denominado
Medicina Regenerativa. Ésta se sustenta en tres grandes pilares:
1) Terapia celular,
Proceso controlado en el que se busca que la célula madre se diferencie en cualquier tipo de tejido,
brindándole la oportunidad de corregir falencias, defectos o ausencias celulares y funcionales a
tejidos u órganos en cualquier localización del cuerpo humano.1

2) la administración de elementos
sub celulares y en

3) la ingeniería de tejidos
(in vivo e in vitro).1

Mironow V, Visconti R, Markwald R. What is regenerative medicine? Energence of applied stem cell and developmental biology. Expert Opin Biol Ther 2004;4:773-81.
 Células madre: definición
autorrenovarse y clasificación
a largo plazo

células
precursoras o CELULA
progenitoras MADRE

Según TEJIDO
Según su
QUE LAS
POTENCIAL
ORIGINA

MULTIPOTENCIALES Y
TOTIPOTENCIALES PLURIPOTENCIALES EMBRIONARIAS ADULTAS
UNIPOTENCIALES

Gálvez, P., Ruiz, A., & Clares, B. (2011). El futuro de la medicina clínica hacia nuevas terapias: terapia celular, génica y nanomedicina. Medicina Clínica, 137(14), 645-649.
Imagen http://lascelulasmadre.es/static-lascelulasmadre.es/img/celulas-madre.jpg
 Células madre: Clasificación
A.-Potencialde B.-Tejido de procedencia
diferenciación; Blastomero del cual son aisladas:
5 días 1.-Células madre embrionárias (ES)
a.- TOTIPOTENTE ICM + EE 1.1 Células madre germinales, (ICM)
aisladas de fetos de la cresta germinal,
Cigoto Blastocisto ICM
1.2 EE Tejido extraembrionario Placenta
b.-PLURIPOTENTE ICM
ectodermo, mesodermo y endodermo
células madre 2.- Células madre somáticas CMA
embrionarias (ES), 3.- iPS (induced pluripotent stem cells)

c.- MULTIPOTENTE
1 o 2 ecto , meso y endodermo
B.- Tejido de procedencia (ICM)
del cual son aisladas
(ES)

PROGENITORES
 Fuentes de Células troncales
(ICM)

Feto y un
nuevo
CMA
individuo.
CME/ES.

Y LAS iPS ? (induced

No Feto , ni pluripotent stem cells)
Anexos
embrionarios
3.- Células adultas pluripotenciales inducidas. 2007, Takahashi y cols.
iPS (induced pluripotent stem cells)
CMA reprogramadas a comportarse como CME.
Derivación, a partir de CMA a
células pluripotentes con
COMO SE HACE ?
características similares a las ES,
tanto a nivel de expresión de
marcadores pluripotentes como de
1. Vectores virales
capacidad de diferenciación in
vitro e in vivo 2. Estimulación de Prot.
Específicas(epigenetica)

Células madre de los tejidos:
¿Dónde las encontramos?
Superficie del ojo Retina,cornea
pulpa dentaria, vasos sanguíneos,
Células que lograron mantenerse
Indiferenciadas durante el desarrollo fetal,
Por su
Capacidad de autorrenovación
cerebro

,hígado, Epidermis piel Corazon

páncreas, Glandula mamaria
tejido adiposo,
folículo piloso,
Testículos,Prostata, epitelio del tubo digestivo
Ovario

sangre periférica y de cordón

médula ósea
umbilical, médula espinal, pulpa
Muscles Esqueletico dentaria, vasos sanguíneos,

10/06/11
 https://www.sebbm.es/revista/articulo.php?id=151&url=epigenetica-de-la-transdiferenciacion-y-reprogramacion-celular

Plasticidad de las células madre

Transdiferenciación capacidad de una célula Propiedades Celula pluripotente -
madre derivada de un determinado órgano para a) Capacidad de diferenciarse a nivel clonal, ( De

CONTROVERTIDO
generar, no solo células maduras de dicho tejido, sino única célula A tejidos de cualquiera de las tres
también de otros tejidos.
capas embrionarias;

b) Funcionalidad demostrada in vitro, y

.DOGMA DE IRREVERSIBILIDAD
c) Capacidad de asentarse persistentemente en el
tejido diana in vivo, contribuyendo mediante su
diferenciación a los distintos tipos celulares.

.The Waddington´s epigenetic landscape The Waddington´s epigenetic landscape modificado

 Plasticidad de las células madre Esquema de la generación de células
Procesos de transdiferenciación por la iPS y su posible aplicación terapéutica
acción de factores de transcripción
 Mecanismos de los fenómenos de diferenciación observados en CMA
1. Heterogeneidad de las
CMA presentes en una
población celular con
coexistencia de
cél.progenitoras con
capacidad de diferenciarse
2. Fusión de las células 3. Fenómenos epigenéticos de 4. Persistencia de
madre trasplantadas con reprogramación en la etapa células madre adultas
Clonal. Consumación de un con capacidad multi o
las células específicas
proceso de desdiferenciación y
residentes en un órgano pluripotencial.
rediferenciación celular .

A.- Varias Celulas Madres B.- Fusion Celular C.- Trans/diferenciacion D.- Pluri/Multipotencial
 MEDULA OSEA
Plasticidad potencial de
algunas células madre
adultas

(las flechas indican la posible capacidad de

transformación de la célula madre)
 Fuentes tisulares de células madre médula ósea, el cordón
umbilical o el tejido adiposo
CÉLULAS MADRE ADULTAS PRESENTES EN LA MÉDULA OSEA

demostrado
recientemente generar
células pluripotentes a
partir de células
somáticas diferenciadas

Células progenitoras
adultas multipotentes
Poblaciones de células madre presentes en la médula ósea.

Células madre de los tejidos:
¿Dónde las encontramos?
Superficie del ojo Retina,cornea
pulpa dentaria, vasos sanguíneos,
Células que lograron mantenerse
Indiferenciadas durante el desarrollo fetal,
Por su
Capacidad de autorrenovación
cerebro

,hígado,páncreas,
Epidermis piel Corazon
tejido adiposo, Glandula mamaria
folículo piloso, Testículos,Prostata,
Ovario epitelio del tubo digestivo

sangre periférica y de cordón

médula ósea
umbilical, médula espinal, pulpa
dentaria, vasos sanguíneos,
Muscles Esqueletico
Fuentes tisulares de células madre

CMA

CME/ES.

Y LAS iPS ? (induced

pluripotent stem cells)
 Células madre Pluripotentes ES(ICM)
TIPO VENTAJAS DESVENTAJAS
 Pluripotencialidad  Procedencia alogénica (potencial
inmunogénico)
Potencialidad teratogénica
Pueden mantenerse 
Células 
Se desconocen condiciones para
indefinidamente en cultivo 
madre
diferenciación hacia líneas celulares
embrionarias
específicas
ES(ICM)  Autorrenovación
 Problemas éticos y religiosos
Métodos de obtención y expansión
Inmortalidad 

complejos y costosos
 Multipotencialidad
 Procedencia autóloga

Capacidad de
(no ocasionan trastornos inmunológicos)
Células  No se ha comprobado que
produzcan neoplasias
madre
adultas  Plasticidad/versatilidad autorrenovación
No implican problemas éticos,
CMA
limitada


legales ni religiosos
 Método de obtención más
simple y menos costoso
 Células madre pluripotentes ES
Obtención de ES pluripotentes A.- Transferencia nuclear, B.- creación de líneas hematopoyéticas o
inmunológicamente compatibles C.- Inducción de expresión de HLA específicas del paciente

PACIENTE
Clonacion
Terapeutica

B.- creación de líneas

hematopoyéticas
Reprogramación
nuclear

Aplicaciones de la clonación de embriones humanos

 Células adultas pluripotenciales inducidas. iPS (induced pluripotent stem cells)
CMA reprogramadas a comportarse como CME. 2007, Takahashi y cols.

1. Vectores virales
2. Estimulación de Prot. específicas

derivación, a partir de células somáticas, de

células pluripotentes con características
similares a las ES, tanto a nivel de expresión de
marcadores pluripotentes como de capacidad de
diferenciación in vitro e in vivo
 Células madre adultas
Células madre hematopoyéticas (HSCs)
HSC, hematopoietic stem cells + 50 años en el
trasplante de M.O y han mostrado su efectividad en el tratamiento
de diversas enfermedades., Célula NK

Célula T

FUENTE Célula B

médula ósea, sangre Célula dendrítica

periférica,cordon
umbilical ,tras su megacariocito plaquetas

movilización de la HSC eritrocito

médula ósea mediante
macrófago
factores de crecimiento,
neutrófilo
médula ósea

Las CM hematopoyéticas son capaces de eosinófilo

contribuir en la angiogénesis y vasculogénesis. basófilo

(pluripotencialidad DEMOSTRADA). Progenitores comprometidos Células especializadas
 Células madre adultas
EPC (endothelial progenitor cells) tempranas (de origen monocítico)
Progenitores Papel Trofico

endoteliales BOEC (blood outgrowth endothelial cells).Tardias

capacidad de adherencia y Demostrado in vitro/ in vivo simplicación en la revascularización de los tejidos.
cinética de crecimiento,

• Gran capacidad proliferativa y de diferenciación

Células • Mantenimiento y expansión de CM
mesenquimales hematopoyéticas.
(MSC,mesenchymal stem cells
• ↓Inmunogenicidad y ↑versatilidad
inmunomoduladores

Contribuyen Hematopoyesis
(osteoblastos, condroblastos,
adipoblastos y mioblastos
 Potencial y limitaciones de las células madre
USOS
Pérdida o fallo funcional de
• trasplante del órgano,
• Reconstrucción un órgano o tejido la contribución
quirúrgica directa de las
• implante de sustitutos Aplicación de las células madre ha
sintéticos células madre con
ALTERNATIVA capacidad CONCLUSION
resultado ser
PROBLEMAS
regeneradora mucho más
• complicaciones quirúrgicas
• escasez de órganos +
limitada de lo
infarto de miocardio, ictus,DM,
rechazo inmunitario Alzheimer, Parkinson, daño med esperado
 Resultados estudios experimentales realizados con células madre
Tecnicas de transplantes
Autologos (Cel. Paciente )/ Alogenicos(Cel de otro Paciente)
Autologos
a) Como fracción fresca (aisladas a partir del
tejido y directamente inyectadas como
población total);

b) Tras previa selección, como

subpoblaciones concretas (p. ej., células
derivadas de la médula ósea, del cordón
umbilical o del tejido adiposo SVF, ADSC
(adipose derived-mesenchymal stem cells). ),
Alogenicos
c) Tras haber sido expandidas (células
mesenquimales (inmunomoduladoras),
mioblastos esqueléticos, las BOEC, etc.) e Alogenicos
incluso previamente diferenciadas in vitro.
 CAUSAS FRACASOS
TERAPEUTICOS CUANDO :
1.- Inyección intravenosa, muchas de
las células quedan retenidas en el
hígado o el pulmón sin llegar al
órgano de destino

2.- Se inyectan directamente en el

órgano diana, también pueden
escaparse a través de la vasculatura o
desaparecer como consecuencia de
una rápida necrosis/apoptosis
celular
 Células madre de los tejidos:
Células madre mesenquimatosas
(MSCs) 3.- Células son
Hueso (osteoblastos)
trasplantadas en los
tejidos

MSC Cartílago (condrocitos)

Contribucion baja
médula ósea e incluso nula
Grasa (adipocitos)

Progenitores comprometidos Células especializadas

Bajo grado de injerto
y supervivencia
celular.
Mecanismos implicados en el potencial terapéutico
de las células madre.
http://www.revmediciego.sld.cu
Acciones de las células madre

Diferenciacion en
células del tejido
dañado

Estimulación de células sanas Reclutamiento en el

presentes en la región lesionada, sitio de implantación de
incluyendo las que están en otras CM
estado quiescente en área de
penumbra
Liberacion
De Factores
Citoproteccion Angiogenesis Solubles
Efecto Inhibicion de la
Antiinflamatorio Apoptosis
 Nichos de las células madre
Nicho célula madre
Microambiente alrededor de las células madre que
provee soporte y las señales que regulan la auto-
renovación y diferenciación nicho

Contacto directo Factores solubles Células intermedias

 Mecanismos de acción de las CM.

A. Terapia celular regenerativa con células

mononucleares autólogas
Algunas aplicaciones de células madre:
 Aplicación clínica de las células madre: presente y futuro
BIOLOGIA CELULAR
INVESTIGACION
CLINICA iPS, por
supuesto

TRANSPLANTOLOGIA
HEMATOLOGIA

iPS, por supuesto

Clonación- INMUNOLOGIA
 Clonación-
transgenización
transgeniza
ción:

BIOMATERIALES
TERAPIA
CELULAR
 Con el desarrollo actual de la investigación y los avances obtenidos en los campos de la biología celular, se
ha identificado una nueva posibilidad terapéutica en medicina basada en los nuevos conocimientos sobre las
células madre y su capacidad de diferenciarse en nuevos y diferentes tejidos, a esto se le ha denominado
Medicina Regenerativa. Ésta se sustenta en tres grandes pilares:
terapia celular con otras estrategias, tales como la terapia génica o la bioingeniería,

1) Terapia celular,

2) Administración de
elementos sub celulares y
en

3) la ingeniería de tejidos (in

vivo e in vitro).1
Mironow V, Visconti R, Markwald R. What is regenerative medicine? Energence of applied stem cell and developmental biology. Expert Opin Biol Ther 2004;4:773-81.
 II. principales
Los GENERALIDADES
trastornos patológicos en los que se centran los ensayos
clínicos en terapia celular.1
TRASTORNO TRATAMIENTO CELULAR
1. Infarto de miocardio Células musculares o mioblastos
2. Infarto de miocardio Células madre hematopoyéticas
3. Patología corneal Células limbocorneales
4. Patología de suelo pelviano Mioblastos esqueléticos
5. Isquemia crítica crónica de miembros inferiores Células mesenquimales

6. Isquemia crítica crónica de miembros inferiores en DM Células CD133+

7. Vitíligo Melanocitos
8. Tratamiento de la enfermedad del injerto contra el huésped Células mesenquimales
9. Fístula perianal Células mesenquimales
10. Esclerosis múltiple Células mesenquimales
11. Glioblastoma multiforme Células dendrıticas
12. Angiogénesis Células CD133+
13. Cirrosis hepática Hepatocitos

Gálvez, P., Ruiz, A., & Clares, B. (2011). El futuro de la medicina clínica hacia nuevas terapias: terapia celular, génica y nanomedicina. Medicina Clínica, 137(14), 645-649.
 Aplicación de la terapia celular en combinación con otras
estrategias
OBJETIVO : ↑grado de supervivencia y diferenciación celular y, la efectividad del tratamiento
Terapia génica
 Terapia génica
A)
in vivo. Aplicación directa de vectores que contengan el transgén.
El vector será capaz de transducir las células diana
del paciente con independencia de la vía de administración,
IVIM, o Local del tejido,
ex vivo
(1), Administrar genes a células extraídas del paciente
(2), estas células se mezclan con un virus modificado,
de forma que no pueda reproducirse y que transporte el
gen de interés
(3) lo que conlleva una alteración genética a las células
del paciente
(4), las cuales se trasplantan nuevamente al paciente
para producir la proteína deseada (4).

B) La terapia génica in situ se refiere a la

administración del transgén directamente dentro de la célula.
Esta estrategia implica generalmente el uso de vectores que se
administran mediante microinyecciones al interior del núcleo
celular.
 Destrucción
Desoxiadenosina Desoxi ATP de células T

No se activan
células B
Adenosín
desaminasa
(ADA)

Desoxinosina
Células T Reimplantación
aisladas del de células
Hipoxanti Compuestos transformadas
paciente
tóxicos al paciente

Xantina Vector viral

conteniendo el gen
de ADA corregido
Ácido úrico
Células T
aisladas del
paciente con gen
terapéutico

Terapia génica para la defi ciencia de la enzima adenosin diaminasa (ADA). Este protocolo fue el primer éxito de la
terapia génica en la clínica y se realizó en 1990. La inmunodefi ciencia severa combinada está ocasionada por la falta de la enzima
ADA, que es indispensable para el metabolismo de las purinas, y sin la cual no se realiza la proliferación de las células T del
Lesiones de la piel soportes de fibrina hasta fibroblastos de la dermis
incluidos en un gel de colágeno, los cuales favorecen el
crecimiento de las células epidérmicas
Enfermedades y lesiones oculares

células madre derivadas del epitelio corneal (CESC) y

del limbo del ojo (RSC)
 ES e iPS
Stem cell y diabetes:
Las células obtenidas a partir de cel. Ovales hepáticas , islotes pancreáticos,
médula ósea pueden ser diferenciadas in vitro hacia células β.

• La insulina
Nat Biotechnol
que 2003;21
se pueden (7):763-70.
obtener es muy pequeño, lo cual limita su aplicación terapéutica.
Terapia celular en enfermedades
neurológicas:
• Parkinson, esclerosis lateral amiotrófica, enfermedad de Alzheimer, los infartos
cerebrales o las lesiones medulares.

• Estudios in vitro e in vivo han demostrado que tanto las células madre embrionarias
como las adultas son capaces de diferenciarse a neuronas dopaminérgicas.

Las stem cell “prefieren un lugar con stress

tisular” (transdiferenciación)
Sin embargo no esta claro si se pueden formar
nuevos circuitos
Células madre y esclerosis múltiple:
• Esclerosis múltiple en ratón (encefalitis autoinmune
experimental) que la inyección de neuroesferas (células
madre neurales), tanto por vía intravenosa como
intratecal, promueve la remielinización (3)

Actualmente en
experimentación
en humanos

Nature 2003;422(6933):688-94.
Stem cell y lesión medular:
• Las células madre tienen capacidad para formar neuronas
motoras.
• A una rata con una lesión medular se le inyectaron stem cell
embrionarias
• Sin embargo el mecanismo pareciera ser por factores de
crecimiento locales que contribuyen a la reparación de axones
 Células madre en enfermedades
cardiovasculares:
• Es posible aislar en el músculo
cardíaco células madre
multipotenciales capaces de
diferenciarse in vitro e in vivo a
cualquiera de los tejidos
necesarios para reconstituir un
corazón dañado.(5)
• Se han implantado mioblastos
autogénicos (6)

Actualmente no se a demostrado que

estas células puedan transmitir impulsos
electro-mecánicos

Cell 2003;114(6):763-76.
Eur Heart J 2003;24(22):
2012-2020
 https://scielo.conicyt.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0034-98872014000800011

Mecanismos de acción terapéutica de las células madre. Se exponen de forma simplificada los principales
mecanismo por los que la terapia celular contribuye a la reparación miocárdica en infarto agudo al miocardio y en cardiopatías crónicas de diversa
etiología. CK: Citoquinas. TNFα: Factor de necrosis tumoral alfa. IGF-1: Factor de crecimiento insulínico tipo 1. bFGF: Factor de crecimiento fibroblastico
básico. VEGF: Factor de crecimiento endotelial vascular. VSMC: Células de músculo liso vascular. CE: Células endoteliales.
 CONCLUSIONES
Las propiedades exclusivas de las células madre y su
comportamiento biológico abren
perspectivas alentadoras en las investigaciones básicas y
clínicas con vistas a su empleo
terapéutico en diversas enfermedades.

No obstante, es preciso ahondar más en los mecanismos de

renovación, diferenciación y acción de las células madre,
consensuar resultados investigativos y establecer
recomendaciones clínicas basadas en las evidencias
científicas
Preguntas
1. Que es la plasticidad de las ES ?
2. ¿Qué propiedades debe tener una celula Pluripotente?
3. ¿ Que mecanismos de diferenciación conoce?¿Son excluyentes entre si ?
4.- Ventajas y desventajas comparativas de ES (ICM)y CMA 5.- Celula Pluripotente
6- Cual es el papel de las Cel. madre endoteliales en el proceso regenerativo y que las
caracteriza ?
7.- Cual es el papel de las Células madre hematopoyéticas (HSCs)
en el proceso regenerativo y que las caracteriza ?
8.- Cuales son las ventajas de las MSC,mesenchymal stem cells en su uso terapeutico?
9.- Cual es el potencial y las limitaciones de las CM en su uso terapéutico ?
10.-Que Mecanismos implicados en el potencial terapéutico de las células madre?
Preguntas
1. Que es una celula madre y que las diferencia de otras células del cuerpo ?
2. ¿Porqué auto-regenerarse y diferenciarse?
3. Como se clasifican las células madre y en base a que criterios?
De los siguientes términos ; Defina , mencione el origen ,potencialidad de
diferenciación, y que no pueden producir , ejemplifique :
4.- Celula totipotencial
5.- Celula Pluripotente
6- Celula Multipotente
7.- Células adultas pluripotenciales inducidas. iPS
8.- Células madre de los tejidos. Explique que propiedad celular permite
su permanencia