UPAO-BIOCA 2018

Practica 6
DETERMINACION BT,BD e BI, Hb y
ACIDO URICO
Mblgo. Dr. Enrique Martin Alva
C.B.P. : 3582 R.N.B.E : 0090
DOCTOR EN CIENCIAS BIOLOGICAS
MAGISTER EN MICROBIOLOGIA CLINICA
ESPECIALISTA EN ANALISIS CLINICOS Y BIOLOGICOS
 DETERMINACIÓN DE BILIRRUBINAS DETERMINACIÓN DE ACIDO URICO
PROCEDIMIENTO
PROCEDIMIENTO
I- TECNICA CON REACTIVO UNICO I- TECNICA PARA SUERO
En 3 tubos marcadas B (Blanco), S (Standard ) y D (Des- En tres tubos marcados B (Blanco), D (Directa) y T (Total)
conocido), Colocar: colocar:
B D T
B S D

Muestra (suero) 200 ul 200 ul 200 ul Standard - 20 ul -

Agua destilada 2,5 ml 2,5 ml -
Rx van Muestra - - 20 ul
Reactivo A - - 2,5 ml
der Bergh
Reactivo B 200 ul - -
Rx Trabajo 1 mL 1 mL 1 mL
Mezclar e incubar 5’/37oC o 20’ /(18-25oC).
( Rx Erlich).Diazorreactivo - 200 ul 200 ul
Retirar, enfriar y leer en espectrofotómetro a 505 nm o en fotocolorímetro con filtro verde
(490-530 nm), llevando el aparato a cero con el Blanco.
Mezclar de inmediato cada tubo por inversión. Luego de
FUNDAMENTOS DEL METODO
5', leer a 530 nm
El esquema de reacción es el siguiente:
. Las lecturas pueden efectuarse entre 4' y 15' , excepto
para BD ,leer a 5’ exactos. Si se lee antes, habrá UOD
subvaloración por reacción incompleta. Si se lee ácido úrico + 2 H2O + O2 alantoína + H2O2 + CO2
después, habrá sobrevaloración porque reaccionar la BI POD
CALCULO DE LOS RESULTADOS 2 H2O2 + 4-AF + 3,5-DHS quinonimina roja
Bilirrubina total (mg/l) = (T - B) x f
Bilirrubina directa (mg/l) = (D - B) x f La cantidad de ácido úrico se determina midiendo la absor- bancia de
Bilirrubina libre (indirecta) = BRB total - BRB directa este pigmento.
VALORES DE REFERENCIA Suero o plasma
CALCULO DE LOS RESULTADOS
Bilirrubina en suero o plasma Hombres: 2,5 - 6.0mg/dl
ácido úrico (mg/l) = D x f
- Adultos: Mujeres: 2,0 - 5,0 mg/dl
Directa: hasta 2 mg/l 10 mg/dl(1)
f= Orina
Total: hasta 10 mg/l Orina: 250 a 750 mg/24 horas
S
 DETERMINACIÓN DE BILIRRUBINAS
PROCEDIMIENTO
I- TECNICA PARA SUERO
En tres tubos marcados B (Blanco), D (Directa) y T (Total)
colocar: FUNDAMENTOS DEL METODO
B D T La bilirrubina reacciona específicamente con el ácido sulfanílico diazotado produciendo
un pigmento color rojo-violáceo (azobilirrubina) que se mide fotocolorimétricamente
Muestra (suero) 200 ul 200 ul 200 ul a 530 nm.
Agua destilada 2,5 ml 2,5 ml - Si bien la bilirrubina conjugada (directa) reacciona directamente con el diazorreactivo,
Rx van la bilirrubina no conjugada (indirecta) requiere la presencia de un desarrollador acuoso
der Bergh Reactivo A - - 2,5 ml
(Reactivo A) que posibilite su reacción. De forma tal que, para que reaccione la
Reactivo B 200 ul - - bilirrubina total (conjugada y no conjugada) presente en la muestra, debe agregarse
Diazorreactivo - 200 ul 200 ul benzoato de cafeína al medio de reacción.
( Rx Erlich).
REACTIVOS PROVISTOS
Mezclar de inmediato cada tubo por inversión. Luego de A. Reactivo A: solución acuosa de benzoato de cafeína 0,13 mol/l, tamponada y
5', leer a 530 nm estabilizada Rx van der Bergh
. Las lecturas pueden efectuarse entre 4' y 15' , excepto .
para BD ,leer a 5’ exactos. Si se lee antes, habrá B. Reactivo B: solución de ácido sulfanílico 29 mmol/l y
ácido clorhídrico 0,17 mol/l.
subvaloración por reacción incompleta. Si se lee
después, habrá sobrevaloración porque reaccionar la BI C. Reactivo C: solución de nitrito de sodio 0,07 mol/l.
Diazoreactivo c/b 1/21 ( Rx Erlich).

VALORES DE REFERENCIA Nacidos a término Prematuros

CALCULO DE LOS RESULTADOS Bilirrubina en suero o plasma Sangre de cordon 25 mg/l
- Adultos:
Directa: hasta 2 mg/l hasta las 24 hs 60 mg/l 80 mg/l
Bilirrubina total (mg/l) = (T - B) x f
Bilirrubina directa (mg/l) = (D - B) x f Total: hasta 10 mg/l hasta las 48 hs 75 mg/l 120 mg/l
Bilirrubina libre (indirecta) = BRB total - BRB directa del 3º al 5º día 120 mg/l 240 mg/l
 DETERMINACIÓN DE ACIDO URICO
FUNDAMENTOS DEL METODO
El esquema de reacción es el siguiente:
PROCEDIMIENTO
I- TECNICA CON REACTIVO UNICO UOD
En 3 tubos marcadas B (Blanco), S (Standard ) y D (Des- ácido úrico + 2 H2O + O2 alantoína + H2O2 + CO2
conocido), Colocar:
POD
2 H2O2 + 4-AF + 3,5-DHS quinonimina roja
B S D

Standard - 20 ul -
La cantidad de ácido úrico se determina midiendo la absor-
bancia de este pigmento.
Muestra - - 20 ul UOD: uricasa
Rx Trabajo 1 mL 1 mL 1 mL POD: peroxidasa
4-AF: 4-aminofenazona
Mezclar e incubar 5’/37oC o 20’ /(18-25oC). 3,5-DHS: sal sódica de 3,5-diclorohidroxibenceno sulfónico
Retirar, enfriar y leer en espectrofotómetro a 505 nm o
en fotocolorímetro con filtro verde (490-530 nm),
llevando el aparato a cero con el Blanco.

VALORES DE REFERENCIA

CALCULO DE LOS RESULTADOS Suero o plasma

ácido úrico (mg/l) = D x f Hombres: 2,5 - 6.0mg/dl
10 mg/dl(1) Mujeres: 2,0 - 5,0 mg/dl
f= Orina
S Orina: 250 a 750 mg/24 horas
 CUESTIONARIO A RESOLVER

UREA CREATININA
1. Haga un esquema sobre la síntesis de la 1. Que órganos y que intermediarios metabólicos participan
en la síntesis de la creatinina ?
urea?
2. Que relación guarda la creatinina con la masa muscular?
2. Como afecta una dieta rica en proteínas la
concentacion de urea en sangre ? 3. Cuales son las enfermedades en que aumenta la
creatinina ?
3. Que ocurre en una hemorragia digestiva 4. Tiene la misma importancia la determinación de
con los niveles de urea ? creatinina y urea ?
4. En que enfermedades aumenta la urea en 5. Que es la insuficiencia renal,prerenal,renal y postrenal ?
sangre? 6. Que es la depuración de creatinina, como se realiza y
cuales son sus indicaciones m?
5. Cuales son las principales alteraciones del 7. Como influye la dieta en el nivel de creatinina serica?
ciclo de la urea?
8. Cual es la importancia de la creatina?
6. Que relación tiene el aumento de la urea 9. Que importancia tiene la creatinina en la evalucion
con el de la creatinina ? nutricional?
 METABOLISMO
3.-
DE LA 3.- ictericia coloración amarillenta
BILIRRUBINA de la piel y mucosas debida a un
aumento de la bilirrubina , es signo
clínico externo de un proceso
patológico subyacente que ocurre
en algún punto del metabolismo
de la bilirrubina,

1
 Metabolismo del grupo hemo Metabolismo de la bilirrubina

bilirrubina conjugada a diferencia de la no Macrófagos

conjugada, puede atravesar el filtro
glomerular y pasar a la orina.
Urobilinógeno y Urobilina

❖La bilirrubina conjugada se elimina por bilis y pasa al

intestino en donde es degrada por las bacterias
intestinales a urobilinógeno, que en parte se oxida a
urobilina.

❖El urobilinógeno y la urobilina parcialmente se

absorben, pasan a la circulación general, y se
eliminan por vía renal.

❖En el adulto sano la eliminación diaria de

urobilinógeno por orina es <5mg/día. Se incrementa
en enfermedades con un catabolismo alto de la
hemoglobina (anemia falciforme, talasemias,
anemia hemolítica).

❖El urobilinógeno y urobilina no absorbidos se

convierten en estercobilina, pigmento que confiere
a las heces su color característico
 Ictericia pre-hepática

1. Aumento de la bilirrubina no
1,2 conjugada en suero
2. Niveles muy bajos de bilirrubina
conjugada en suero
7
3. Eliminación de bilirrubina conjugada
por bilis al intestino
3
4. Formación de urobilinógeno y
absorción intestinal
5. Elevación del urobilinógeno en orina
6. Ausencia de bilirrubina conjugada en
4 orina
4 7. No hay elevación de marcadores
hepáticos

5,6 bilirrubina conjugada a diferencia de la no

conjugada, puede atravesar el filtro glomerular y
pasar a la orina.
Ictericia intrahepática (metabólica, obstructiva)
A.- Incapacidad genética de metabolizar la bilirrubina
B. Disfunción hepática
C. Obstrucción intrahepática
1.Nivel alto de la bilirrubina no conjugada en suero (A)
2.Aumento de la bilirrubina conjugada en suero (A,C)
3. Menor eliminación de bilirrubina conjugada por bilis al intestino
7
(A,B,C)
4. Menor formación de urobilinógeno y absorción intestinal (A,B,C)
5. Menos urobilinógeno en orina (A,B,C)
6. Aumento de bilirrubina conjugada en orina (B,C)
7.Aumento marcadores hepáticos (B,C)

bilirrubina conjugada a diferencia de la no conjugada,

puede atravesar el filtro glomerular y pasar a la orina.
 Ictericia posthepática u
1 obstructiva
1. Niveles normales (bajos) de bilirrubina
no conjugada en suero
7
2.Niveles elevados de bilirrubina
2 conjugada en suero
3.Poca eliminación de bilirrubina
conjugada por bilis al intestino
3,4 4.Escasa formación de urobilinógeno y
absorción intestinal
5.Bilirrubina conjugada en orina elevada
6.Disminución del urobilinógeno en orina
7.Aumento de -GT y ALP

5,6
bilirrubina conjugada a diferencia de la no conjugada,
puede atravesar el filtro glomerular y pasar a la orina.
 La presión arterial, la resistencia arteriolar aferente y la resistencia arteriolar eferente.
80 a 150 mm Hg

 Irrigación renal.- 22% del gasto

cardíaco o 1,100 ml/min.
(proporcional al gasto cardíaco)

Filtración
 Se filtra alrededor del 20% del flujo
plasmático renal
 Las sustanciaspueden 1. filtrarse parcial
o completamente (aclaramiento renal),
2.- reabsorberse y/o ser
 3.-secretadas por los túbulos renales
 FG =125 ml/min o 180 l/día)

FG= Kf x Presión de filtraciónneta

Filtrado Glomerular (FG) = Kf x (Pg –Pb – πG + πB)

Coeficiente de la filtración capilar: Kf = FG / Presion de

filtración neta.
permeabilidad x área superficial de
filtro de los capilares Kf = 125 ml/min / 10 mmHg
=12.5 ml/min/mmHg.
 16.- ¿De que me sirve conocer el valor y el determinante de la Kf?
R.- Enfermedades como la DM y la HAS aumentan el espesor de los capilares glomerulares (al
aumentar el endotelio debido a la inflamación crónica) por lo que la conductividad hidráulica se
disminuye, por lo tanto el Kf se disminuye y esto se traduce en disminución del filtrado glomerular
que es la etapa o estadio final de la enfermedad renal crónica causada por estas 2 enfermedades.
HIPERTENSIÓN
reducción de NO sintetasa a nivel renal, la estimulación del sistema renina-angiotensina y la reducción de la perfusión renal

ENFERMEDAD CARDIOVASCULAR, ENFERMEDAD RENAL CRÓNICA Y DISFUNCIÓN ENDOTELIAL

activación inapropiada del sistema reninaangiotensina-aldosterona, el aumento del estrés oxidativo, la

disfunción endotelial por una disminución del óxido nítrico y las respuestas inmunes e inflamatorias mal
adaptativas

6.- ¿ Por que aumento la urea y la creatinina?

IRA 10 días Tx sunitinib , creatinina 1.8 mg/dl, TFG 50 ml/min, riñón único y hipertensión y tabaquismo.
Presentó altos niveles de LDH, un factor de riesgo para el desarrollo del SLT, e hipoalbuminemia (albúmina
2.9 g/dl) que podría aumentar los niveles de droga libre (DISFUNCION HEPATICA)

Urea en sangre. La principal causa del síndrome urémico es el fallo renal

IRA + DISFUNCION HEPATICA
 PRESION OSMOTICA
Los principales determinantes de la osmolalidad son las concentraciones
de sodio, glucosa y urea (nitrógeno ureico sanguíneo, BUN):

La osmolalidad del líquido intracelular y del extracelular se mantiene entre 290 y 310 mosm en cada compartimiento.

Ejemplo: Suponiendo que la concentración

del Na+ determinada en el laboratorio fuera
de 140 mOsmol, entonces la osmolalidad
efectiva del plasma sería

2 x 140 + 100 + 25 = 294,4 mOsmol/L

18 2,8
Análisis orina: tira reactiva, sedimento de orina, bioquimica
 Cálculo de la TFG
Aclaramiento de creatinina endógena
CrO (mg/dl Vol.O (ml)
CCl (ml/min)= x Ajustar por sc
CrS mg/dl 1440
Fórmula de Dubois
Variables: Cr O, Cr S , Vol orina , S.C (talla y min peso) (Kg,cm)
Aclaramiento de creatinina fórmula de Cockroft-Gault

(140-edad) x peso (Kg) Utilizar el peso ideal

CCl (ml/min)= x 0,85
72 x CrS (mg/dl) en la fórmula Cockroft
Variables: Edad, peso, CrS, sexo, s.c (talla y peso)

TFG estimada por fórmulas (ml/min/1,73 m2)

MDRD-4 = 186 x Cr -1,154 x edad -0,203 x 0,72 (mujer) x
1,21 (raza negra)
Ajustada a sc
CKD (EPI) = Mismas variables: Edad, CrS, sexo,
raza. Se ajusta mejor TFG>60 ml/min

http://www.medicasos.com/especialidades/nefrologia/fisiologia/141-determinantes-del-filtrado-glomerular
 Estimación usando la fórmula Cockcroft-Gault
estimar el aclaramiento de creatinina, que a su vez estima la TFG:

Ejemplo: creat serica de 0,01 mg/ml y excreta 75

mg/h orina.
El IFG se calcula como M/P ( M es la masa de
creatinina/Unid tiempo y P es creatinina serica).

b) Evaluación de las proteínas somáticas

Excreción urinaria de creatinina
La creatinina es un producto muscular, de tal forma que su evaluación es un reflejo indirecto de la masa muscular
(1 gramo de creatinina representa aproximadamente 18 g de masa muscular).
Se ha elaborado un índice que correlaciona la eliminación urinaria de creatinina con la talla del paciente;
VR :NORMAL > 80%,
DEFICIT 60-80 % déficit de masa muscular moderada
GRAVE < 60% déficit es grave.
Insuficiencia renal aguda: prerrenal, intrínseca y postrenal
Estadio AKIN Criterios de creatinina Criterios de diuresis
Estadio 1 > 0,3 mg/dl o aumento al 150% del basal <0,5 ml/kg y h por 6 horas.
Estadio 2 Aumento al 200-300% <0,5 ml/kg y h por hrs.
Estadio 3 > 300% o > 4 mg/dl con aumento de 0,5 mg/dl agudo <0,3 ml/kg y h por 24h o anuria
durante 12h
Se clasifica con el criterio que implique el estadio más alto, sea de diuresis o creatinina.
En caso de desconocerse la creatinina pre-enfermedad se calcular con la fórmula MDRD.

Estadio RIFLE Criterios de creatinina Criterios de diuresis

Risk >150% o disminución FG > 25% <0,5 ml/kg y h por 6 horas.
Injury >200% o disminución FG > 50% <0,5 ml/kg y h por hrs.
>300% o > 4 mg/dl con aumento de 0,5 mg/dl <0,3 ml/kg y h por 24h o anuria durante 12h
Failure
agudo o disminución FG > 75%
Loss Pérdida de función renal > 1 mes
Pérdida de función renal > 3 meses
End Stage
Los últimos dos necesitan métodos de depuración extrarrenal.
 IRA prerrenal (70%) disminución en la perfusión renal, no afecta parénquima renal

Causa general Causa específica

Hipovolemia Reducción: hemorragia, pérdida digestiva, renal o cutánea, drenajes quirúrgicos.
Redistribución: hipoalbuminemia grave, traumatismo, peritonitis, pancreatitis.
Bajo gasto cardiaco Insuficiencia cardiaca, arritmias, IAM, TEP masiva, valvulopatías, hipertensión pulmonar, ventilación
mecánica.
Vasodilatación Sepsis, fístulas arteriovenosas, anafilaxia, ascitis, fármacos antihipertensivos, anestesia.
periférica
Vasoconstricción Adrenalina, noradrenalina, dopamina a dosis altas, cirrosis con ascitis, contrastes yodados, hipercalcemia.
renal
Interferencia con AINE, inhibidores de la COX-2, IECA, ARA II.
autorregulación

Si bien el riñón recibe el 20% del gasto cardiaco, el 90% de esto es tomado por la corteza, dejando sólo un 10% para la médula
renal, lo que la hace susceptible a isquemia y posterior necrosis.

riñón, a través de su autorregulación, puede mantener relativamente constante tanto la FG como el flujo renal,
dentro de un rango de 80 a 150 mm Hg
 IRA intrínseca o parenquimatosa (25%)
Las lesiones agudas de los túbulos renales, que se divide en necrosis tubular aguda isquémica
y tóxica, dan cuenta del 90% de las IRA intrínseca
Causa general Causa específica

Isquemia renal mantenida (causas de la prerrenal). Nefrotoxinas endógenas: mioglobinuria, hemoglobinuria, cadenas
Necrosis tubular aguda
ligeras de Ig, ácido úrico. Nefrotoxinas Exógenas: antibióticos, quimioterápicos, contrastes yodados, y fármacos.

Inflamatorias: GN agudas y rápidamente progresivas, vasculitis de pequeños vasos, rechazo, injerto.

Lesiones glomerulares y de la
Vasoespásticas: hipertensión maligna, toxemia gravídica, esclerodermia, contraste, hipercalcemia, cocaína, fármacos.
microcirculación
Hematológicas: microangiopatía trombótica, coagulación intravascular diseminada.

Nefritis intersticial alérgica, infección, rechazo agudo del injerto, obstrucción tubular difusa, infiltración (linfoma,
Lesiones tubulointersticiales
leucemia, y sarcoidosis)

Lesiones de grandes vasos Trombosis, tromboembolia, ateroembolia, disección, compresión.

IRA postrenal (5%)

Se da por una obstrucción en el flujo de orina desde los cálices a la uretra. Para que se genere IRA debe existir
obstrucción del flujo urinario de ambos riñones,
Causa general Causa específica
Lesiones ureterales Cálculos, cáncer, compresión externa (fibrosisretroperitoneal, abscesos o neoplasias),
coágulos, y
Cuello vesical Vejiga neurógena, hipertrofia prostática, cálculos, coágulos.
Lesiones uretrales Traumatismos, fimosis, estenosis valvular y congénita, tumor.