UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

Universidad del Perú (DECANA DE AMÉRICA)

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

Departamento Académico de Microbiología y Parasitología

MICROBIOLOGIA GENERAL

P2. Siembra y Aislamiento

Dr. Víctor Crispín Pérez

 Estudio de bacterias

• Cultivo y aislamiento de colonias

• Pruebas diferenciales
(bioquímicas)
• Estructuras: microscopía previa
coloración
(Gram, pared celular,
esporas, flagelos, etc)
• Pruebas moleculares
 Medios de cultivo
• Soluciones de sustancias nutritivas distribuidos en tubos o placas de
Petri, y en condiciones adecuadas (esterilidad, temperatura, pH,
oxígeno) permiten el crecimiento de los microorganismos.
• Clasificación:
a) Por su consistencia: líquidos, semisólidos y sólidos.
b) Por su composición:
Enriquecidos (Agar Sangre, Agar Chocolate),
De enriquecimiento (Agar Salmonella Shigella)
Sintéticos (de composición química conocida)
Complejos
c) Por su finalidad:
Aislamiento primario (Agar Nutritivo)
Transporte (Cary Blair)
Selectivos (Agar Mc Conkey, Agar Azul de Metileno)
Diferenciales (Agar Mc Conkey)
 Cultivo de bacterias: siembra y aislamiento
• Objetivo
• Materiales
- Cepas
- Solución salina estéril
• Procedimiento
- Inoculación de caldo nutritivo
- Siembra en agar inclinado
- Siembra en Agar Nutritivo en Petri
- Siembra en Agar Mc Conkey
• Incubación a 37oC / 24 hs
• Lectura de cultivo
- Caldo nutritivo
- Agar nutritivo
- Agar Mc Conkey
Materiales para siembra
Medios de Cultivo
 Procedimiento
1. Rotular los medios
2. Esterilizar el asa de siembra
3. Inocular / sembrar
4. Esterilizar el asa de siembra
5. Incubar los materiales a 37oC / 24 hs.
6. Lectura del crecimiento bacteriano
7. Autoclavar y descartar los materiales
utilizados
 Técnica aséptica

a. Se esteriliza el ansa a la llama directa

b. Se sostiene el ansa con el índice, luego con el meñique se destapa el
tubo de muestra
c. Se flamea la boca del tubo para evitar contaminación
d. Se sumerge el ansa para tomar un inóculo del tubo
 x

e. Se flamea el tubo para evitar la contaminación

f. Se tapa el tubo con ayuda del meñique
g. Inocular o sembrar
1. Cultivo en medio líquido (Caldo Nutritivo)

37oC / 24 hs
CULTIVO EN CALDO
• Turbidez: opacidad más o menos densa
• Floculante: agregados dispersos
• Película continua sobre el líquido
• Sedimento: depósito de células en el fondo del
tubo que se resuspende al agitar.
37oC / 24 hs

Crecimiento:
• Filiforme: forma de hilo con bordes lisos
continuos.
• Equinulado: forma de hilo con bordes
irregulares continuos.
• Barbado: colonias semi-confluentes o no
confluentes.
• Difuso: crecimiento difuso y reducido.
• Arborescente: forma de árbol.
• Rizoide: forma de raíz
 Procedimiento
1. Esterilizar el asa en la llama del mechero
2. Enfriar el asa en un extremo de la placa de
agar.
3. Tomar la muestra con el asa.
4. Estriar la superficie del medio, sin romper
el agar.
5. Esterilizar y enfriar el asa.
6. Estriar el segundo sector, cruzar tres de las
estrías con el primer sector para arrastrar
microorganismos.
7. Esterilizar y enfriar el asa.
8. Estriar el tercer sector de forma similar al
segundo.
– Esterilizar el asa al termino del
procedimiento.
Morfología de colonias
Morfología de colonias
 Colonias bacterianas
• Tamaño: grande (diámetro mayor a 1mm), mediano (diámetro
aproximado a 1 mm), pequeño (diámetro inferior a 1 mm) y
puntiforme.
• Forma: puntiforme, circular, filamentosa, irregular, rizoide y
lanceolada.
• Borde: regular (continuo), irregular (ondulado, lobulado,
espinoso/dentado/lacerado, ondulado y filamentoso).
• Elevación: plana o aplastada (no elevación), elevada (convexa baja,
convexa cupuliforme, mamelonada, pulvinada y umbilicada).
• Superficie: lisa o rugosa.
• Consistencia: Blanda, dura o mucoide.
• Aspecto: Brillante, opaco y mate o translucido.
• Pigmento: de diferente color. Pueden ser pigmentos solubles en
agua y que decoloran el medio, pigmentos fluorescentes y
pigmentos nodifundibles confinados a las colonias.
• Olor: mariscos, fétido