SEMINÁRIO DE VALIDAÇÃO

ANALÍTICA.
Professora : Andréa Rodrigues Chaves
Alunas: Christiane Campos
Cibele Favoreto
INTRODUÇÃO
 Produto está sendo produzido como especificado?

 Qual a concentração de Sódio?

 Qual a composição química?

 Quais as espécies presentes?

 Há resíduos pesticidas ?

 Esta água é potável?

 Este produto é biodegradável? 2

INTRODUÇÃO
 Definição do problema analítico.

 Seleção do método analítico: planejamento.

 Amostragem.

 Preparo da amostra.

 Calibração.

 Avaliação dos resultados.

 Ação. 3
INTRODUÇÃO

Método
Problema. Amostra Validação
Análise

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INTRODUÇÃO
VALIDAÇÃO

 Conferir confiança a uma medida.

 Assegurar a qualidade de um resultado.

 Conferir se os resultados/métodos atendem as especificações.

 Cumprir protocolos de órgãos de controle e fiscalização.

INMETRO – Vocabulário internacional de termos fundamentais e gerais de metrologia, 2a ed., Brasil, 2000.
ARTIGO

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INTRODUÇÃO

 Byrsonima – Murici

 Comumente usada para fins fitoterápicos.

 No Brasil suas maiores aplicações: Inflamação na pele, úlceras

gastrointestinais e febre.

 Infusão

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INTRODUÇÃO

 Diasteroisômeros

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MATERIAL

B. Basiloba B. Crassa B. verbascifolia

B. Cocolobifolia B. Intermedia

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EQUIPAMENTO

 HPLC – PDA – CD (Jasco, Tokyo Japão/As-2055)

 Bomba PU-2089

 Coluna Chiracel OD-H (5 x 250 x 34.6 mm)

 Software: Ez Chron, Elite 3.17

 Fase móvel – n-hexano, etanol e 0,1% Propanol em solução

isocrática.

 Taxa de fluxo 0,5 mL.min -1

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CONDIÇÕES DE EXPERIMENTO
 Temperatura ambiente

 Soluções Padrões de Catequina (C) e Epicatequina (EC) foram

preparadas com n-hexano/etanol (1:1, v/v) com 0,1% TFA.

 Estocados a 48°C

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PREPARAÇÃO DAS AMOSTRAS
 Compostos metanólicos.

Folhas secas .
Pó.
Banhos Ultrassom em clorofórmio e posteriormente em metanol.
O extrato foi dissolvido em 20ml de metanol com água (2:8, v/v).
Purificado.
Acidificado com ácido acético até pH 4

 Infusão

1g de pó mergulhado por 10 minutos a 80°C.

Filtrado com papel filtro
Acidificado com ácido acético até pH 4 12
IDENTIFICAÇÃO E QUANTIFICAÇÃO

 Extratos e infusões foram analisados por HPLC

 Tempo de retenção

 A quantidade de analito foi mensurada pela área de pico e

comparados com as referências.

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RESULTADOS E DISCUSSÃO
 Separação quiral e identificação dos enantiômeros
RESULTADOS E DISCUSSÃO
 Separação quiral e identificação dos enantiômeros
HPLC-PAD-CD
 RESULTADOS E DISCUSSÃO
 Linearidade e Sensibilidade

Comprimento de onda: 220nm (PDA)

A seleção do range ocorreu de acordo com a quantidade dos analitos na amostra
investigada.

Compostos Catequina Epicatequina

R2 0,992 0,995
LOD 0,77 0,42
LOQ 2,32 1,27
Y= 392872.04176c + 66099.56619 372426.3894c - 1917.03676

Níveis de concentração: 1, 2, 5, 10, 20, 50 e 100 µg/ml.

(5 injeções foram feitas para cada solução)
RESULTADOS E DISCUSSÃO
 Seletividade

Foi determinado através da comparação dos tempos de retenção (tR)

de cada padrão com os picos obtidos por experimentos de spiking em
amostras reais do extrato e da infusão.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
Spiked
Extrato
metanólico

Infusão
RESULTADOS E DISCUSSÃO
 Repetibilidade
Interday e Intraday:
- A precisão dos tempos de retenção foram determinados por 10
injeções do extrato metanólico para cada espécie com spiked de 20
µg.ml-1 de catequina, epicatequina e ent-epicatequina.

A precisão intraday foi realizada para 3 diferentes dias:

- Experimento intraday entre 0,3 e 0,7%
- Experimento interday entre 3 e 5%
RESULTADOS E DISCUSSÃO
 Exatidão e Precisão
As amostras das espécies Byrsonima foram fortificadas com 10, 250 e 500 µl
da solução padrão e submetida ao processo de extração.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
CONCLUSÃO
 A espécie B. coccolobifolia não foi possível identificar nenhum dos
quatros diasteroisômeros. A espécie B. basiloba mostrou as
maiores concentrações dos mesmos.

 A partir de um problema analítico o trabalho propôs uma

metodologia para separação e quantificação dos pares de
enantiômeros.

 Método demonstrou ser sensível para a análise dos quatro

compostos investigados.

 Os limites de quantificação estão de acordo com ANVISA e

Eurachem
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CONCLUSÃO FINAL

 O artigo não apresenta as desvantagens da técnica utilizada.

 A fim de avaliar a precisão do método poderia ser utilizado um

método complementar como a utilização de um padrão interno.

 A utilização da cromatografia líquida em modo isocrático

minimiza as variações decorrentes da análise.

 Não há na ANVISA limites especificados dos compostos

quantificados.

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AGRADECIMENTOS
 Universidade Federal de Góias

 Ao Pesquisador Clenilson M. Rodrigues

 A Embrapa Agroenergia.
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Obrigada
pela
atenção !!!
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