SALMONELLA

SALMONELLA
 A diferencia de otros miembros de la familia
Enterobacteriaceae, Salmonella no son habitantes normales del
intestino humano (excepto en portadores después de la
infección).
 Causan enfermedad diarreica, que puede ser grave. Se
trasmiten desde los animales y los productos de estos hacia el
hombre, en el cual producen enteritis, infección general y
fiebre intestinal.
 Son bacilos gramnegativos, móviles, no esporulados. Todos
excepto S. typhi, carecen de cápsula. Capaces de respiración
aerobia y anaerobia.
 SALMONELLA

 Sus antígenos son:

 Los antígenos O, están constituidos por los polisacáridos de la
pared celular.
 Flagela H
 Capsular Vi (virulencia).
 IDENTIFICACION DE
LABORATORIO
 Existe una serie de técnicas utilizadas en microbiología distintas
de las técnicas clásicas de cultivo e identificación.
 El diagnóstico de una infección por Salmonella se realiza
aislando este microorganismo mediante cultivos. Su aislamiento
a partir de sangre, orina y heces indica el diagnóstico.
 Toleran la bilis. No delicados. Oxidasa negativa.
 No fermentan la lactosa. Producen ácido y gas a partir de la
glucosa (excepto S. typhi, que es anaerogénico).
 La identificación final de las cepas aisladas se basa en las
características bioquímicas y las pruebas de aglutinación con
antisueros monoespecíficos, estas pruebas constituyen el
método de diagnóstico serológico más empleado.
 IDENTIFICACION DE
LABORATORIO
 Sobreviven a la congelación en el agua durante periodos
prolongados. son resistentes a ciertos productos químicos
(verde brillante, desoxicolato)que inhiben a otras bacterias
intestinales, por lo que son de utilidad su inclusión en los
medios con la finalidad de aislar salmonellas.
 Medios de cultivo selectivos para el aislamiento de
Salmonella: Agar Desoxicolato Citrato, Salmonella Shigella,
Hektoen Entérico, Xilosa Lisina Desoxicolato, Sulfito
Bismuto.
 La serotipificación y la tipación con fagos es útil para
investigar los brotes epidémicos.
 Agar Desoxicolato Citrato ADC
El medio contiene 3 veces mayor cantidad
de sales biliares que el agar Mac Conkey,
es muy útil para seleccionar especies de
Salmonella en muestras abundantemente
contaminadas con bacilos coliformes u
organismos grampositivos.
Los citratos sódico y férrico retardan el
desarrollo de Escherichia. Coli.
La lactosa es el único hidrato de carbono.
El rojo neutro detecta la producción de
ácido.
Las colonias de E. coli son pequeñas y rojo intenso´.
Los no fermentadores de lactosa, forman colonias grandes incoloras.
Salmonella, Shigella, Proteus.
 Agar Salmonella Shigella
El agar SS es un medio altamente selectivo,
que inhibe el desarrollo de la mayoría de los
coliformes y permite el crecimiento de
Salmonella y Shigella.
La alta concentración de sales biliares y
citrato de sodio inhibe a todas las bacterias
Grampositivas y muchas Gramnegativas,
incluyendo a los coliformes.
La lactosa es el único carbohidrato y el rojo
neutro detecta la producción de ácido.
El tiosulfato de sodio es una fuente de S,
permitiendo la detección del H2S por el
precipitado negro formado con el citrato
férrico.
Colonias incoloras, son lactosa (-) y H2S (-), Salmonella y Shigella.
Las Colonias lactosa (+) se colorean de rojo, Escherichia coli.
Colonias incoloras con centro negro, son lactosa (-) y H2S (+), Proteus, Salmonella.
 Agar Hektoen Entérico H.E.
 La alta concentración de sales biliares inhibe el
desarrollo de todas las bacterias Grampositivas y
retarda el desarrollo de muchas cepas de
coliformes.
 La fucsina ácida reacciona con el azul de timol,
virando al amarillo al bajar el pH del medio por
acción de los ácidos que se pueden producir a
partir de tres hidratos de carbono (Lactosa,
Sacarosa y Salicina).
 El tiosulfato de sodio es una fuente de S y la
producción de H2S se detecta por el citrato
férrico.
 Lactosa (+) forman colonias color naranja
brillante a rosa salmón. Escherichia coli.
 Lactosa (-) muestran colonias semitranslúcidas
de color verde azulado
 Colonias negras, productoras de H2S. Salmonella.
 Agar Sulfito Bismuto S.B.

 El agar SB es altamente selectivo para Salmonella typhi y es uno de los medios más
sensibles para detectar H2S producido por este organismo.
 Este medio contiene: glucosa en la fórmula: la fermentación de glucosa produce
reducción del sulfito, con formación de sulfuro de hierro y colonias negras.
 El metal pesado bismuto y el verde brillante son inhibidores del desarrollo de todas
las bacterias Grampositivas y de la mayoría de las Gramnegativas, excepto la
Salmonella.
 Las colonias de Salmonella typhi son negras con brillo metálico.
 Las colonias de Salmonella enteritidis forman colonias negras y sin brillo.
 Las colonias de Salmonella paratyphi forman colonias verdosas.
 IDENTIFICACION DE
LABORATORIO
 La detección de anticuerpos circulantes (prueba de Widal) puede ayudar
en el diagnóstico de la fiebre entérica.
 Es importante el estadio de la enfermedad para valorar el significado de
un título elevado de aglutininas. Los bacilos tíficos pueden aislarse en la
sangre, las heces y la orina, antes que la prueba de aglutinación de una
reacción positiva. A medida que aumenta el título de aglutininas,
disminuye el número de cultivos positivos.
 Las reacciones de aglutinación tienen por finalidad demostrar la
presencia de anticuerpos en el suero del enfermo a partir de la primera
semana de la enfermedad.
 La demostración de anticuerpos en el suero contra las especies de
Salmonella, resulta útil para el diagnóstico de las formas tifoideas y
puede constituir el único resultado positivo de laboratorio, si los
métodos de cultivo fallan.
 REACCION DE WIDAL
FUNDAMENTO
 Se trata de una reacción de aglutinación, donde los anticuerpos actúan
sobre los antígenos constituidos por bacilos muertos.
 Los anticuerpos se denominan aglutininas y los antígenos bacilares
aglutinógenos.
 La reacción de Widal es un método serológico que se utiliza
frecuentemente para el diagnóstico de la fiebre tifoidea, de las fiebres
intestinales y de la fiebre ondulante.
 La reacción mide el título del suero para suspensiones de gérmenes
conocidos.
 La reacción de Widal puede realizarse en placa de vidrio
(microscópica) o en tubos (macroscópica).
 REACCION DE WIDAL
INTERPRETACION DE RESULTADOS
 La reacción de Widal se considera positiva cuando la aglutinación se
observa en una dilución 1/80 o mayor, lo que indicaría infección
tifoidea, siempre que el paciente no haya recibido vacunas antitíficas.
La reacción negativa no excluye el diagnóstico. Por lo común la
aparición de las aglutininas específicas ocurre entre el 6 y 8 día de
evolución de la enfermedad y así el título aglutinante alcanza la mayor
intensidad al llegar al vigésimo día, comenzando luego el desarrollo
paulatino. En algunos casos, la persistencia de un título aglutinante
elevado se prolonga durante un lapso muy grande. Títulos pequeños de
aglutinación que pueden llegar hasta 1/40 se observan en otras
infecciones y en la tuberculosis.
 REACCION DE WIDAL
INTERPRETACION DE RESULTADOS
 La reacción de Widal es inútil para efectuar el diagnóstico temprano de
la fiebre tifoidea, puesto que la positividad no se obtienen antes de los
4 a 8 días de enfermedad. Por eso se aconseja recurrir en principio al
hemocultivo o urocultivo. Cuando transcurre cierto tiempo el
hemocultivo o urocultivo dejan de ser adecuados, y aumenta la
importancia de la reacción de Widal.
 La vacunación antitífica puede ser responsable de reacciones positivas
durante varios años.
 Pueden observarse reacciones inespecíficas con antígeno de
Salmonella O grupo D en suero de pacientes con influenza. También
se encontraron reacciones inespecíficas en pacientes con enfermedad
hepática crónica activa y consumidores de narcóticos.
 REACCION DE WIDAL
INTERPRETACION DE RESULTADOS
 Los anticuerpos H aparecen hacia el 10-12 día y se elevan a cifras muy
superiores (1/160). Después de la curación, disminuyen lentamente y
persisten durante meses y años, por lo que pueden encontrarse títulos
altos en los vacunados o en antiguos tifoideos con enfermedades
interecurrentes.
 Los anticuerpos O aparecen hacia el 8 día, su tasa se eleva
progresivamente para alcanzar cifras del orden de 1/320 en el período
de estado. Después de la curación, disminuyen rápidamente y
desaparecen en el curso de algunas semanas. Las aglutininas O, en
cambio, tienen gran valor a títulos bajos.
 La presencia de una tasa significativa de anticuerpos O, tiene mucho
más valor para el diagnóstico de una infección actual o reciente que la
presencia de anticuerpo H, que pueden no ser más que la prueba de una
infección antigua.
 REACCION DE WIDAL
CURVA DE EVOLUCIÓN DE LAS TASA DE
ANTICUERPOS pg 130
 REACCION DE WIDAL
PREPARACION DEL ANTIGENO

1. ANTIGENOS FLAGELARES (H)

Se siembra en frasco con caldo una cepa activa y móvil de Salmonella
typhi, incubando durante 24 horas a 37 C. Luego se pasan unas décimas
de ml del cultivo a tubos inclinados o frascos con agar, continuando la
incubación a 37 C de 18 a 24 horas. El cultivo desarrollado se lava con 5
a 10 ml de solución salina estéril formolada (1.4% de formol). Se agita y
se coloca en refrigerador a 6-8 C. Se inspeccionan a diario los cultivos
para cerciorarse de la esterilidad y se preparan diluciones de la suspensión
que contengan 1,000 millones de microorganismos por ml, conservándose
en frascos estériles, oscuros y refrigerados.
 REACCION DE WIDAL
PREPARACION DEL ANTIGENO

2. ANTIGENOS SOMATICOS (O)

Se procede igual pero partiendo de cepas inmóviles, suspendiéndose
los microorganismos en solución salina fenolada (0.5% de fenol).
Después de agregar la mitad de volumen de alcohol absoluto se incuba
a 37 C, 18 a 24 horas, comprobándose luego la esterilidad del medio.
Se lleva la concentración a 1,000 millones de gérmenes por ml con una
concentración alcohólica entre 2.5 y 4%.
 REACCION DE WIDAL
PROCEDIMIENTO
1. MUESTRA
 Suero limpido, no debe inactivarse ni calentarse ya que los anticuerpos
son termolábiles.
2. REACTIVOS
 Antígenos Febriles Salmonella, suspensión de antígenos bacterianos.
 Antígenos Paratyphoid A (Salmonella antígeno flagelar a).
 Antígenos Paratyphoid B (Salmonella antígeno flagelar b).
 Antígenos Typhoid H (Salmonella antígeno flagelar c)
 Antígenos Typhoid O (Salmonella antígeno somático d).
 3. MATERIAL
 Placa de vidrio Micropipetas automáticas
 Reloj Fuente de luz
 REACCION DE WIDAL
 4. METODO DE AGLUTINACION EN PLACA
En una placa de vidrio, colocar en cada pocito 40ul de suero y agregar
una gota de suspensión de antígeno, mezclar y agitar la placa en forma
circular durante 3 minutos.
Observar la presencia o ausencia de aglutinación utilizando una fuente
de luz.
Tífico H Tífico O Paratífico A Paratífico B
Antígenos 1 gota 1 gota 1 gota 1 gota
Suero 40 ul 40 ul 40 ul 40 ul
 REACCION DE WIDAL
 4.1. TITULACION
 Empleando micropipetas apropiadas colocar en cada pocito 80ul,
40ul, 20ul, 10ul y 5 ul de suero.
 Colocar 1 gota de antígeno sobre cada gota de suero.
 Mezclar el suero y el antígeno utilizando una varilla.
 Agitar la placa durante 3 minutos en forma circular.
 Observar la aglutinación utilizando una fuente de luz.
 Los grados de aglutinación se interpretan de acuerdo a la siguiente
escala:
Aglutinan 100% 4+
Aglutinan el 75% 3+
Aglutinan el 50% 2+
Aglutinan el 25% 1+
Negativo, no aparece aglutinación.
 REACCION DE WIDAL
 4.1. TITULACION
 Las diluciones del suero en la titulación en placa se muestra a
continuación.

Volumen de suero Título

80 ul 1/20
40 ul 1/40
20 ul 1/80
10 ul 1/160
5 ul 1/320
 REACCION DE WIDAL
VALORACION DE RESULTADOS
 En un tratamiento precoz con cloramefenicol puede, en algunos casos,
frenar o impedir la aparición de anticuerpos O. No se encontrarán más
que las aglutininas H aisladas.
 En el curso de una fiebre tifoidea, la presencia de anticuerpos O y
cifras muy débiles de anticuepos Paratyphi A y B. Esto se debe a que
estos tres gérmenes tienen en común un factor de su antígeno
somático, el responsable de estas aglutinaciones cruzadas.
 Sí un sujeto vacunado tuviera, a pesar de la vacunación, una fiebre
tifo-paratífica, se hallarían en el serodiagnóstico, además de los
anticuerpos H, reflejo de la vacunación, aglutinina O del gérmen
infectante, mientras que el título de las aglutininas H correspondientes
se elevaría.
 Resultados falso positivos se evidencian:
 Curso de paludismo, Tifus exantemático, Lupus eritematoso, Yersinia
pseudotuberculosis, algunas levaduras.
 ENFERMEDADES
 La Salmonella no es un habitante normal del intestino
humano (excepto en portadores después de la infección).
Se trasmiten desde los animales y los productos de estos
hacia el hombre, en el cual producen enteritis, infección
general y fiebre intestinal.

 La enfermedad diarreica es la manifestación más común de

infección por especies de Salmonella distintas de S. Typhi
y S. Paratyphi. Estas últimas especies invaden el cuerpo
desde el tracto gastrointestinal para causar enfermedad
sistémica: tifoidea y paratifoidea (fiebres entéricas).
.
 ENFERMEDADES
 LA ENTEROCOLITIS
 Se caracteriza por una invasión en el tejido epitelial y subepitelial de los
intestinos delgados y grueso. Las cepas que no invaden no causan
enfermedad. Los microorganismos penetran a través y entre las células
mucosas de la lámina propia, causando inflamación y diarrea.
 La diarrea se produce como consecuencia de la invasión por Salmonellas de
las células epiteliales en la porción terminal del intestino delgado. Las
bacterias emigran hasta la lámina propia de la región ileocecal, donde se
multiplican estimula una respuesta inflamatoria que confirma la infección al
tracto gastrointestinal y media la liberación de prostaglandinas. Las
prostaglandinas a su vez activan el AMP cíclico y la secreción de líquidos,
lo que da lugar a diarrea.
 ENFERMEDADES
 LA ENTEROCOLITIS
 Al contrario de la enterocolitis por Shigella, en donde la dosis infectantes es
muy pequeña (100microorganismos), la dosis por Salmonella es mucho
mayor (100,000 microorganismos). El ácido gástrico es una defensa
importante del huésped; la gastrectomía o el uso de antiácidos abate la dosis
infectante de modo significativo.
 DATOS CLINICOS
 La S. Typhimurium es la causa más común de enterocolitis.
 Después de un período de incubación de 6 a 48 horas, los síntomas
comienzan con náuseas y vómitos, que luego progresan a dolor abdominal y
diarrea, que puede variar de leve a grave, con o sin sangre.
 DIAGNOSTICO DE LABORATORIO
 El microorganismo se aísla con mayor facilidad de una muestra de heces.
La Gastroenteritis es la Manifestacion más común
de la Infeccion por Salmonella
Ingestión de Salmonella enteritidis

Se adhiere a las células epiteliales en la

porción terminal del intestino delgado

La bacteria penetra en las células y emigra a la

lámina propia de la región ileocecal

Se multiplica en los folículos linfoides, causando

hiperplasia e hipertrofia reticuloendoteliales

Los leucocitos polimorfonucleares confinan

la infección al tracto gastrointestinal

La respuesta inflamatoria media también Estimula la producción de AMPc

la liberación de prostaglandinas y la secreción activa de líquido

DIARREA
 ENFERMEDADES
 EN LA TIFOIDEAY OTRAS FIEBRES ENTERICAS
 La infección comienza en el intestino delgado, pero hay pocos síntomas
gastrointestinales. Los microorganismos entran a los fagocitos
mononucleares de las Placas de Peyer, se multiplican y luego se propagan
a fagocitos hepáticos, de vesícula biliar y esplénicos. De este modo se
produce bacteriemia, que acompaña al comienzo de la fiebre y a los otros
síntomas, quizá debida a una endotoxina.
 La supervivencia y proliferación del microorganismoen fagocitos es una
carácterística sorprendente de esta enfermedad, así como su predilección
por invadir la vesícula biliar, hecho que puede conducir al establecimiento
del estado de portador y a la excreción de bacterias por heces durante
largos períodos.
 ENFERMEDADES
 EN LA TIFOIDEAY OTRAS FIEBRES ENTERICAS
 DATOS CLÍNICOS
 La fiebre tifoide es causada por S. Typhi, y en la fiebre entérica por S.
Paratyphi A y B, el comienzo de la enfermedad es lento, predominando
fiebre y estreñimiento en lugar de vómitos y diarrea. Después de la
primera semana, conforme la bacteriemia se vuelve sostenida ocurren
fiebre alta, delirio, abdomen sensible y esplenomegalia. Las manchas
rosáceas, es decir, paulas rosa en el abdomen, se relacionan con la fiebre
tifoidea, pero sólo rara vez aparecen. En la tercera semana, la enfermedad
comienza a resolverse, pero pueden producirse complicaciones graves
como hemorragia o perforación intestinal. Casí 3% de los pacientes con
fiebre tifoidea se vuelven portadores crónicos. Este índice es más elevado
en mujeres que han padecido enfermedad biliar.
 DIAGNOSTICO DE LABORATORIO
 Un hemocultivo es el procedimiento que tiene mayor probabilidad de
revelar al microorganismo durante las dos primeras semanas de la
enfermedad.
 ENFERMEDADES
 LA SEPTICEMIA
 Se produce sólo en alrededor de 5 a 10% de las salmonelosis y se presenta
en una de dos situaciones: en pacientes con una enfermedad crónica
subyacente como anemia por células falciformes, cáncer o en niños con
enterocolitis.
 El curso séptico es más indolente que el desarrollado por muchos otros
bacilos gramnegativos. La bacteriemia siembra en numerosos órganos,
con osteomielitis, neumonía y meningitis como las secuelas más comunes.
Los tejidos con lesiones previas, como infartos u aneurismas, son a
menudo sitios de ábscesos metastásicos.
 DATOS CLINICOS
 La causa más frecuente es producida por la S. Choleraesuis. Los síntomas
empiezan con fiebre y enterocolitis ligera o sin ella, y luego prosiguen a
síntomas focales relacionados con el órgano afectado, a menudo huesos,
pulmón o meninges.
 Enfermedades Clínicas
producidas por Salmonella
Fiebres intestinales Septicemias Gastroenteritis

Período de incubación 7 a 20 días Variable 8 - 48 horas

Iniciación Insidiosa Súbita Súbita

Fiebre Gradual, después una “meseta” Ascenso rápido, después Generalmente baja
alta con estado “tifoideo” temperatura en agujas
“séptica”

Duración de la enfermedad Varias semanas Variable 2 a 5 días

Síntomas gastrointestinales A menudo constipación temprana; A menudo no hay Náuseas, vómitos,

más tarde, diarrea sanguinolenta diarrea la comienzo

Hemocultivo Positivo durante la primera y Positivo durante la fiebre alta Negativo

segunda semana de la enfermedad

Coprocultivo Positivo de la segunda semana en Pocas veces es positivo Después del comienzo,
adelante; negativo al principio de rápidamente positivo
la enfermedad
CURSO DE LA FIEBRE TIFOIDEA
Frecuencias relativas con que son positivos los cultivos de
sangre, orina, heces y pruebas de aglutinación durante
el curso de la fiebre tifoidea. Pg 128
 TRANSMISION
 Diseminación en animales; se encuentran en la cadena de
alimentos (especialmente en pollos, huevos, carne, leche y
crema).
 Se adquieren por ingestión de alimentos contaminados o de
persona a persona (por vía fecal-oral) S. typhi sólo es patógeno
para el hombre.
 Diseminación por vía fecal-oral, habitualmente a través de
agua o alimentos contaminados. Los portadores son una fuente
importante de infección.
Ciclo de Transmisión de Salmonellas
entre los Animales y el Hombre
Alimentos de
origen animal

“comida” de
animales Alimentos
HOMBRE
domésticos humanos
Animales
salvajes

efluente excretas HOMBRE

Taxonomía de las Salmonellas

 La clasificación de Ewing limita el género a sólo tres

especies.
 La clasificación de Kauffman reconoce cada salmonella
serológicamente distinta. Estas especies se disponen
después en grupos. Son alrededor de 1500 serotipos,
nombrados por lo general por la ciudad en que se aislaron.
 Las demás distinciones serológicas se reconocen como
subtipos.
 CLASIFICACION DE EWING

Tres especies:

Salmonella cholerae-suis (un serotipo)

Salmonella typhi (un serotipo)

Salmonella enteritidis (>2000 serotipos)

 CLASIFICACION DE
KAUFFMAN-WHITE

Antígeno somático Antígeno flagelar (H)

Grupo Nombre
(O) Fase I Fase II

A S. paratyphi A 1, 2, 12 a -

S. paratyphi B 1, 4, 5, 12 b 1, 2
B
S. typhimurium 1, 4, 5, 12 i 1, 2
S. paratyphi C 6, 7, Vi c 1, 5
C1 S. cholerae-suis 6, 7 c 1, 5
S. virchow 6, 7 r 1, 2
S. typhi 9, 12, Vi d -
D
S. enteritidis 1, 9, 12 g. m -
 VARIACIÓN
 Los microorganismos pueden perder los antígenos H y
convertirse en no mótiles.
 La pérdida del antígeno O se acompaña de un cambio en
las colonias, de lisa a rugosas.
 El antígeno Vi se puede perder en parte o por completo.
también se puede adquirirse o perderse los antígenos en el
proceso de transducción.
 INMUNIDAD
 Las infecciones por S. typhi y S. paratyphi suelen conferir
cierto grado de inmunidad.
 La reinfección a menudo es más leve que la primer
infección.
 Los anticuerpos circulantes contra los antígenos O y Vi se
relacionan con la resistencia a la infección y a la
enfermedad.
 TRATAMIENTO
 Se efectúa con cloramfenicol, trimetropim con sulfametoxazol.
 Es un problema la resistencia múltiple a los fármacos transmitida de
manera genética por los plásmidos entre las bacterias intestinales.
 En la mayor parte de los portadores, los microorganismos persisten en la
vesícula biliar (sobre todo si hay cálculos).
 La enterocolitis es una enfermedad que se resuelve de manera espontánea,
sin tratamiento. Puede requerirse restitución de líquidos y electrólitos. El
tratamiento con antibióticos no acorta la enfermedad ni reduce los
síntomas; en realidad, puede prolongar la excreción de microorganismos,
incrementar la frecuencia del estado de portador y seleccionar mutantes
resistentes al antibiótico.
 Para fiebres entéricas y septicemia, el tratamiento es la ampicilina o el
cloramfenicol. La ampicilina deberá usarse en portadores crónicos de S.
Typhi. Para abolir el estado de portador, puede requerirse colecistectomía.
 Los abscesos focales se drenarán con cirugía, siempre que sea factible.
 PREVENCION
 Las Salmonelosis se previenen con reglamentos de salud pública y
medidas de higiene personal.
 Son importantes el tratamiento de aguas negras, la cloración del
suministro de agua que se controla por investigación de bacterias
coliformes contaminantes.
 Los cultivos de heces de manejadores de alimentos para detectar
portadores, el lavado de manos antes de trabajar con alimentos.
 La pasteurización de la leche y el cocimiento apropiado de las aves de
corral y las carnes.
 Se disponen de dos vacunas que confieren cierta protección contra S.
Typhi:
Una se compone de acetona exterminadora de microorganismos S. Typhi
y se administra de manera intramuscular.
La otra consiste en S. Typhi vivo atenuado y se toma de modo oral.