UNIVERSIDAD VERACRUZANA

CULTIVO DE CÉLULAS Y TEJIDOS

DRA. PATRICIA PAVÓN OROZCO

ING. EN BIOTECNOLOGÍA

KEVIN ANTONIO MORENO GONZÁLEZ

Es una serie de técnicas y métodos de cultivo de tejidos utilizados para
multiplicar plantas asexualmente en forma rápida, eficiente y en grandes
cantidades
Usos:
 Multiplicar o propagar plantas nuevas
 Obtener plantas libres de enfermedades (tales como virosis)
 Obtener grandes cantidades de plantas que no se propagan
eficientemente.

Se forma a partir de una yema con el subsecuente de un brote vegetativo que

son puestos a enraizar en otra etapa , para la formación de las primeras raíces
y para finalizar con el enraizamiento final
 Ya que las células vegetales tiene propiedades totipotenciales que tiene las
células vegetales , esto se refiere a la capacidad de regenerar una planta.
 Así las células somáticas de cualquier tejido pueden formar tallos , raíces , o
embriones somáticos

 La regeneración ocurre en fases consecutivas :

*Fase de desdiferenciacion: Las células son competentes al estimulo organogénico
o embriogénico
*Fase de inducción : Células se determinan para formar órgano o embrión.
*Fase de realización : Donde se forma el órgano o embrión.
Las fases van directamente afectadas por el balance hormonal del medio de cultvo.

Etapas de la micropropagacion :

Etapa 0 “Preparacion del material Fisiologia Vegetal”

Empleo de explantos .Los factores que influyen son :

• El tipo de órgano que sirve como explanto
• *La edad ontogénica y fisiológica del mismo.
• *La estación en la cual se colecta el material vegetal.
 *El tamaño del explanto
 Los órganos jóvenes o bien rejuvenecidos son los que tienen mayor respuesta en el
establecimiento que los adultos. Es conveniente hacer crecer las plantas donantes
por un tiempo en condiciones de invernáculo.
 Para plantas tropicales es necesario temperaturas de 25°C y baja humedad
relativa 75%.
 Etapa 1 “ Establecimiento de Cultivo”
 Se busca establecer cultivos axenicos. El éxito esta determinado por la edad de la
planta donante, edad fisiológica, estado de desarrollo y el tamaño del explanto.
 Cuando hay una planta enferma se trata con técnicas adecuadas para la
eliminación de patógenos como la termoterapia , la quimioterapia a través de la
aplicación de antibióticos , desinfectantes, antivirales y cultivo de meristemas.
 La desinfección superficial incluye : lavado de explantos con agua corriente , etanol
al 70% durante un minuto , seguido de concentraciones de hipoclorito de sodio (0.5
a 1.5%) con gotas de tensaactivos para favorecer su penetración y actividad.
 Multiplicación
 Se busca mantener y aumentar la cantidad de brotes para nuevos ciclos de
multiplicación sucesivos y poder destinar parte de ellos a la siguiente etapa de
producción .
 Aquí se busca la evitar la formación de callos para disminuir el riesgo de
variación somaclonal. En esta etapa los reguladores de crecimiento son las
auxinas,citocininas y acido giberelico , según las condiciones de crecimiento
dependerá la multiplicación de los explantos.
 La etapa de maduración comprende de dos periodos , la fase de inducción y la
fase de multiplicación.
 En la primera se aplica concentraciones elevadas de reguladores de
crecimiento para favorecer la desdiferenciacion y en la segunda se requiere un
balance hormonal adecuados para los procesos de diferenciación y
multiplicación celular.
 Se utilizan reguladores que sus condiciones y rangos de concentraciones deben ser
optimizados para cada especie , genotipo y etapa de multiplicación determinada.
 Los cultivos se incuban en luz 27+-2°C con 14 horas de fotoperiodo e intensidad
lumínica moderada.
 se emplean agentes absorbentes de fenoles en el medio de cultivo, tales como el
carbón activado y la polivinilpirrolidona o antioxidantes como el ácido ascórbico, la
modificación del potencial redox con agentes reductores, la inactivación de las
fenoloxidasas con agentes quelantes o la reducción de su actividad o afinidad por el
sustrato utilizando un bajo pH, o bien cultivando in vitro en condiciones de oscuridad.
 Etapa 3: Enraizamiento y aclimatación
 En esta etapa se produce la formación de raíces
adventicias. En las especies herbáceas es
relativamente fácil mientras que en las especies
leñosas es complicado por su limitada capacidad
rizogénica. El enraizamiento puede realizarse tanto
en condiciones in vitro como ex vitro.
 El enraizamiento ex vitro permite que el
enraizamiento y aclimatación se logren
simultáneamente y que raramente se forme callo
en la base de las estacas, asegurando así una
conexión vascular continua entre el vástago y la
raíz. Sin embargo, el estrés asociado a la
evapotranspiración acelerada de las plantas
durante las etapas iniciales del trasplante puede
reducir considerablemente la tasa de
supervivencia.