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Universidade Estadual do Maranhão

Programa de Pós-Graduação Mestrado em Ciência Animal

EFEITOS IMUNOMODULADORES DE
DAMNACANTHAL ISOLADOS DAS RAÍZES DE
MORINDA ELLIPTICA

Mestranda: Carolina Silva Costa


Orientadora: Prof.ª. Drª. Ana Lúcia Abreu Silva
Coorientadora: Prof.ª Dr.ª Solange de Araújo Melo

São Luís
2017
INTRODUÇÃO
 Morinda elliptica: dor de cabeça,diarreia,úlceras
gástricas e imunoestimulante.

 Damnacanthal:
 Antraquinona
 Inibidora da proteína quinase p56
 Atividade antifúngica, antibacteriana e antitumoral
OBJETIVO

 Investigar o efeito imunomodulador de damnacanthal


em timócitos de camundongo e a proliferação de
células mononucleares do sangue periférico (PBMC)
em humanos.
MATERIAL E MÉTODOS
 Raízes coletadas uma espécie depositada
herbário do departamento de biologia da
universidade Putra da Malásia.

 Foram utilizados 10 camundongos machos com 5-8


semanas de idade.

 Este trabalho foi aprovado pelo Comitê de


Cuidados e Uso de Animais, Universidade Putra
Malaysia (UPM)
MATERIAL E MÉTODOS
 Preparação de suspensões de células do timo
dos camundongos
A suspensãofoi lavada
Anestesiados com Timo removido e
com PBS
2% de Isofluorano e lavado com solução
suplementadocom
eutanasiados por balanceada de Hank
0,1% de BSA e 0,06%
luxação cervical
de citrato de sódio

O sobrenadante foi
descartado e 4 ml
DMEM com 10% de
soro inativado por
calor foi adicionado.

DMEM:Meio de Eagle modificado por Dulbecco


MATERIAL E MÉTODOS
 Isolamento de células mononucleares do
sangue periférico(PBMC):
 Sangue coletado em tubo de heparina

 Diluído com PBS e Ficoll plus e centrífugado

 Linfócitos coletados na interfase e lavados com


PBS
MATERIAL E MÉTODOS
 Ensaio de proliferação de linfócitos
3- [4,5-brometo de dimetiltiol-2-il] -
2,5-difeniltetrazólio-(MTT)

Meio de Eagle modificado de


Dulbecco(DMEM) adicionado aos
poços de placa

Suspensão celular(PBMC) foi


adicionada a todos os poços

Uma solução-mãe de MTT foi


adicionada a cada poço

A placa foi lida com ELISA de


espectrometria EL 340μ de Quantum
ELISALeitor
MATERIAL E MÉTODOS
 Análise de Citometria de Fluxo
 Determinar os efeitos de damnacanthal na
progressão do ciclo celular e no isolamento de
células mononucleares do sangue periférico
(PBMC) humano.
 Foi realizado para avaliar os efeitos
deDamnacanthal e mitógeno pokeweed (PWM) na
alteração das fases do ciclo celular das PBMC
 Fase significativa:G2 .

 Pwd foram usados como controle positivo.


MATERIAL E MÉTODOS
 Análise Estatística

 O teste t de Student foi usado para analisar a


significância estatística das diferenças entre o
controle e os valores tratados.
RESULTADOS
 Atividade mitogênica de damnacanthal no timócito de
camundongos.
RESULTADOS
 Atividade mitogênica de damnacanthal em células
mononucleares de sangue periférico em humanos
RESULTADOS
 Análise de citometria de fluxo de distribuições do ciclo
celularnas PBMC com base nos efeitos da proliferação
dedamnacanthal e PWM às 24, 48 e 72h de tempo de
incubação.
DISCUSSÃO
 Aumentou a proliferação dos timócitos e das
células mononucleares do sangue periférico.

 Hirazumi et al(1994,1996,1999) apoiaram


Damnacanthal para melhorar o sistema
imunológico através da modulação da proliferação
e regeneração do timo.

 Wang et al. (2002) mostraram que o efeito


proliferativo de Damnacanthal no PBMC foi menor
que o da PWM após as 48h e 72h de tratamento.
CONCLUSÃO
 Potencial para estimular a imunidade das células
com pouca ou nenhuma toxicidade para células
saudáveis.
 São necessários mais estudos para elucidar o
mecanismo exato das reações causadas por
damnacanthal.
 É vital utilizar múltiplos ensaios para permitir uma
avaliação abrangente do imunomodulador e a
eficácia deste composto.
 Além disso, estudos farmacocinéticos também são
fundamentais para avaliar melhor a eficácia,efeitos
de dose e toxicidade de Damnacanthal.

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