EXTRACCIÓN ENZIMÁTICA

FACTORES QUE DETERMINAN LA ELECCIÓN DEL MÉTODO DE EXTRACCIÓN

ENZIMÁTICA

• Bautista Muñiz Mayra

• Belmares Hernández Jenifer
• Crescencio Velasco Edith
• Gaona Martínez Juan
• Navarro Agustince Fabiola
• Pérez Mercado Alondra
• Rivero Mata Eduardo
EXTRACCIÓN DE ENZIMAS

 Las condiciones para extraer las enzimas y pasarlas a solución son a

menudo críticas y requieren el estudio de muchas variables. Es necesario
destruir las células, eventualmente las estructuras subcelulares y disociar
las enzimas de otras moléculas.
 A veces es necesario pasarlas a solución como complejo mucoproteico o
nucleoproteico y disociarlo luego durante la purificación.
 Aunque la dispersión de agregados moleculares puede frecuentemente lograrse
mediante medios mecánicos, en muchos complejos enzimáticos están involucradas
fuerzas específicas; de la naturaleza de las mismas depende el método a emplear.
 En general, el primer paso consiste en la obtención de un homogéneo, que implica la
destrucción de la célula y el pasaje de las enzimas a solución o suspensión. Esto
puede llevarse a cabo por:
 Homogenización mecánica
 Homogenización sónica
 Desintegración térmica
 Desintegración química
 Homogenización por deshidratación
HOMOGENIZACIÓN MECÁNICA

 Puede utilizarse un homogeneizador de vidrio, mortero, licuadora, a veces con la

ayuda de abrasivos como alúmina, arena o bolitas de vidrio y con un solvente
adecuado, isotónico (sacarosa 0,25 M, NaCl 0,9%, KCl 0,15 M) o ligeramente
hipertónico, en un buffer adecuado para controlar el pH.
HOMOGENIZACIÓN SÓNICA

 El choque de ondas sónicas o ultrasónicas provoca cambios de presión de miles de

atmósferas, que rompen la pared celular. Se usa generalmente para bacterias y
levaduras y, a veces, para determinados tejidos animales (bazo, riñón, eritrocitos).
DESINTEGRACIÓN TÉRMICA

 El congelamiento y descongelamiento rápidos y repetidos suelen usarse para

desintegrar bacterias y eritrocitos. Por congelación se forman cristales de hielo
intracelulares, destruyendo la estructura. Al descongelarse, las células se destruyen
osmóticamente debido a la presencia de agua pura y se libera su contenido.
DESINTEGRACIÓN QUÍMICA

 Se utilizan agentes que atacan la pared celular, como el etanol, éter de petróleo,
isopentanol, etc.
HOMOGENIZACIÓN POR DESHIDRATACIÓN

 Se basa en la precipitación de proteínas por solventes orgánicos. En la preparación

del "polvo acetónico" se utiliza acetona en frío.