Ley de Beer e Instrumentación

RADIACIÓN
ELECTROMAGNÉTICA
 Las ondas de luz viajan a diferentes

velocidades en diferentes sustancias.
 Si una onda pasa de una sustancia a otra, su
velocidad cambia.
 Si una onda choca con una superficie, a un
ángulo dado, también cambia su dirección.
Absorción de la Luz
 Cuando una molécula absorbe un fotón, su
energía aumenta. Se dice que ha pasado a un
estado excitado.
 Si una molécula emite un fotón, su energía
disminuye
 El estado de mínima energía de una
molécula se llama estado fundamental
Interacciones REM-Materia
 Microondas: estimula el movimiento rotacional de las
moléculas cuando absorben esa radiación
 Infrarrojo: estimula el movimiento vibracional de las
moléculas cuando la absorben
 Visible y UV hacen que los electrones pasen a orbitales
de mayor energía
 Rayos X y radiación UV vacío o lejano rompen
enlaces químicos e ionizan moléculas
 Los rayos X que se utilizan en medicina dañan el
cuerpo humano y deben ser reducidos al mínimo
Ejercicios
 ¿en cuántos kJ/mol aumenta la energía de OZ
cuando absorbe radiación UV de longitud de
onda de 147 nm?
 ¿qué aumento de energía experimenta el CO2
cuando absorbe radiación infrarroja de número
de onda 2300 cm-1?
Desarrollo
 E = h c / l
 = (6,626 x 10-34 Js) --------------------
2.998 x 108m/s
(147 nm) (10-9 m/nm)

 = 1.35 x 10-18 J/molécula
 = (1.35 x 10-18 J/molécula) (6.022 x 1023 moléculas/ mol)
 = 814 kJ/mol
 Esta energía es suficiente para romper el enlace
O=O del oxígeno.
Desarrollo
 E = h c / l = hcn
 = (6,626 x 10-34 Js)(2,998 x 108 m/s) (2300 cm-1) (100 cm/m)
 = 4.6 x 10-20 J/molécula
 = (4.6 x 10-20 J/molécula) (6.022 x 1023 moléculas/ mol)
 = 28 kJ/mol
 Al absorber radiación IR aumenta la amplitud de
las vibraciones de los enlaces de CO2
Medida espectrofotométrica
 Cuando una muestra absorbe luz, la potencia radiante del
haz de luz disminuye.
 La potencia radiante, P, es la energía por segundo y por
unidad de área del haz de luz
 La luz se hace pasar a través de un monocromador para
seleccionar una longitud de onda. La luz de una sola
longitud de onda se llama monocromática, o sea de “un
color”.
 La luz monocromática con una potencia radiante P0 , incide
en una muestra de longitud b. la potencia radiante del haz
que emerge por el lado opuesto de la muestra es P. Como la
muestra puede haber absorbido algo de luz, P ≤ P0
Transmitancia
 La transmitancia, T, se define como la fracción de la luz
incidente que pasa a través de la muestra.
 Transmitancia: T = -----
P
 T puede valer de 0 a 1 P0
 El porcentaje de transmitancia es simplemente 100 T y

puede valer desde 0 a 100 %.
Absorbancia
 A = - log10 ----P= - log T
 Relación entre transmitancia

P0 y absorbancia
P/P0 %T A
1 100 0
0,1 10 1
0,01 1 2
 Esto explica por qué la A y no la T, es directamente proporcional a la
concentración
Absorbancia
 Cuando no se absorbe luz,
 P= P0 y A=0
 Si se absorbe el 90 % y se transmite el 10 %,
 P= P0/10 y A= 1
 Si solamente se transmite el 1 % de luz,

 A= 2
 La Absorbancia a veces también se llamaba densidad óptica
Absorbancia
 La absorbancia es importante
porque es directamente
proporcional a la concentración,
c, de la especie que absorbe la
luz en la muestra.
Leyes de la Absorción
 Cuando un haz de radiación
monocromática, con una potencia P0,
incide sobre una cubeta conteniendo
una solución, puede ocurrir:
 Parte del haz de radiación es absorbido por el
medio que está siendo analizado.
 Parte de la radiación incidente puede ser
reflejada:
 dependiendo de la especie absorbente o,
 de las diferencias entre  del medio de propagación
de la radiación y el  del medio que esta siendo
analizado.
 Parte de la radiación incidente puede ser

dispersada:
 Dependiendo del medio: no sea transparente ni
homogéneo
 Parte de la radiación incidente puede atravesar
el medio analizado y ser transmitida, siendo su
potencia menor a la potencia de la radiación
inicial.
Potencia Reflejada
 Puede ser minimizada:
 Uso de medidas relativas y,
 Cubetas con paredes homogéneas, de menor
espesor y de caras paralelas
 Una cubeta conteniendo la muestra y otra cubeta
conteniendo todos los componentes de la cubeta
anterior menos la sustancia de interés.
Potencia Reflejada
 La medida del haz transmitido por
la segunda cubeta servirá de
referencia para calibrar el
instrumento, antes de la medida de
la potencia transmitida por la
cubeta que contiene el material a
analizar.
Potencia Reflejada
 Como vemos es necesario usar:

 Cubetas prácticamente idénticas
 De espesor reducido y
 De caras paralelas
Potencia Dispersada
 Normalmente los procedimientos
involucrados en la absorción de
luz, son realizados en soluciones
homogéneas y transparentes, de
modo que la potencia de la
radiación dispersada puede
despreciarse
Po = Pt + Pd + Pa
Cubeta
Pd
Pt < Po
Pt
Po
Pa
 Por lo anterior podemos considerar que:
 PO = Pa + Pt
 Las potencias incidente y transmitida pueden ser

medidas directamente, y
 La potencia absorbida puede determinarse como
la diferencia entre P0 y Pt.
 Pa = Po - Pt
 Investigaciones sobre la relación entre las
potencias de radiación incidente y transmitida
fueron realizadas por Pierre BOUGUER (1729)
y por Johann H. LAMBERT (1760), llegando a
enunciar dos leyes fundamentales que
caracterizan al proceso de absorción:
 “La intensidad o potencia de luz

monocromática transmitida por un
medio homogéneo es proporcional
a la intensidad o potencia de luz
incidente”
Pt = k Po
Leyes de la Absorción: Ley de
Lambert
 “La intensidad o potencia de luz
monocromática transmitida disminuye
exponencialmente al aumentar
aritméticamente el espesor del medio
absorbente”
 Pt = Po e-kb
Lambert
 Pt = Po e -kb
 b = espesor del medio absorbente

 k = constante para la longitud de onda y el
medio absorbente, denominada coeficiente
de absorción
Lambert
 Pt = Po e -kb
 Pt = Po 10-0.4343 kb
 k’ = k/2.3206 = k * 0.4343
 Pt = Po 10 -k’b
Lambert
 Pt = Po 10- k’b
Pt  k 'b
= 10
PO
Lambert
Pt  k 'b
= 10
PO
 Pt / Po = Transmitancia, fracción de la luz
incidente transmitida por un espesor b
Ley de Lambert - Bouguer
 “Cuando una radiación monocromática

proveniente de una onda plana pasa a través
de un medio capaz de absorber radiación, de
concentración constante, la potencia radiante
disminuye logarítmicamente a medida que la
longitud del paso óptico aumenta
aritméticamente”.
Leyes de la Absorción: Ley de Beer
 August Beer (1852) estudió la influencia de
la concentración del componente absorbente
en la transmisión y absorción de la luz.
 Descubrió que existe la misma relación
entre la transmisión y la concentración que
la descubierta por Lambert entre la
transmisión y el espesor del medio
absorbente:
 “Laintensidad o potencia de un haz de

luz monocromática transmitido
disminuye exponencialmente al
aumentar aritméticamente la
concentración de la especie
absorbente”
 Pt = Po e-kc
 Pt = Po e -kc
 Pt = Po 10-0.4343kc
 k’’ = k/2.3206 = k * 0.4343
 Pt = Po 10-k’’c
 Pt = Po 10 -k’’c
 Pt
 log = k'' c
P0
Pt
como A =  log
P0
Pt
 log = k'' c
P0
Ley de Lambert – Bouguer - Beer
 Pt = Po 10 -k’b
 Pt = Po 10 -k’’c
 Pt = Po 10 -k’k’’bc
 definiendo una constante a

 a = k’ * k’’
 y como
P
A =  log t
P0
 tenemos
LEY DE BEER

 A = Absorbancia
 b = trayecto óptico, cm
 a = absortividad, L g-1 cm-1
 c = concentración, g/L
Ley de Lambert – Bouguer – Beer
LEY DE BEER

A = Absorbancia
 b = trayecto óptico
  = absortividad molar
 c = concentración molar
Leyes de la Absorción:
Ley de Lambert-Beer
 A = Absorbancia
 b = trayecto óptico
 a = absortividad
 c = concentración
 c=g/L
 b = cm
 a = L g-1 cm-1
Ley de Lambert-Beer
 A =  bc
  = absortividad Molar = M-1 cm-1
 c = moles/L b = cm
  permite comparar
cuantitativamente la absorción de
varias especies
Ley de Lambert-Beer
 La absortividad Molar  depende de:
 La sustancia absorbente
 Longitud de onda
 Temperatura de medición
 Solvente
 A mayor ε mayor nivel de absorción

observado por lo que más sensible el
método espectrométrico
Ley de Beer
 A = abc o A = ε bc
 Esta ecuación demuestra la

relación lineal entre la A y
la concentración c
Ley de Beer
 Por lo que manteniéndose

constante el camino óptico,
es posible determinar la
concentración de una especie
en solución a través de una
medida de absorbancia
Ley de Beer
 “Cuando un haz de radiación
monocromática proveniente de una onda
plana, pasa a través de un medio capaz de
absorber radiación, contenido en una celda
de paso óptico constante, la potencia
radiante disminuye logarítmicamente a
medida que aumenta la concentración
aritméticamente”
Alcances de la Ley de Beer
 Mayoritariamente se aplica en las regiones UV,
VIS, IR cercano, R. X.
 Aplicable a especies químicas: iones,
moléculas y átomos.
 Aplicable a soluciones diluidas, y matrices sin
gran complejidad.
 Aplicable a niveles de detección de analitos
del orden ppm o menores.
Alcances y Aplicaciones de la Ley
de Beer
 Absorción radiación UV-VIS por

compuestos orgánicos
 Absorción radiación UV-VIS por
compuestos Inorgánicos
Aplicaciones de la Ley de Beer
 Determinación de un constituyente absorbente
presente en una muestra
 Determinación de dos o más especies
absorbentes presentes en una muestra.
 Valoraciones fotométricas en cuyo sistema
participa una o más especies absorbentes.
 Cinética de reacciones químicas
 Determinación de un constituyente
absorbente
 Determinación de dos o más especies
absorbentes
 Valoraciones fotométricas en cuyo sistema
participa una o más especies absorbentes.
 Cinética de reacciones químicas
 Determinación de un constituyente
absorbente presente en una muestra:
 Medición directa de la muestra y un patrón
con lectura próxima a la muestra:
 Mediante Curvas de Calibración
 Medición directa de la muestra y un patrón

con lectura próxima a la muestra:
AX
C X = CR
AR
 Mediante Curvas de Calibración

 Curva de Calibración Externa
 Curva de Adición Estándar
 Curva del Patrón Interno

Curva de Calibración externa
 Etapas:
 Medición de la A de un número
determinado de soluciones patrones
con concentraciones conocidas del
analito, tratadas igual que la muestra
 Medición de la A de la muestra
 Etapas:
 Medición de la A de una solución Blanco
(todos los componentes de la muestra
menos el analito) y corrección de la A de la
muestra
 Establecer la recta
 Obtención de cM por interpolación en la

recta
 Obtención de la recta:
Representación gráfica: A vs cc
 Completamente lineal
 Rango lineal y región no lineal
 Puntos distribuidos no linealmente

pero con una tendencia manifiesta
 Recta:
Completamente lineal
 la
lectura de la muestra se interpola
en la recta obteniéndose la
concentración de la solución de
muestra
 Recta:
 Rango lineal y región no lineal
 lectura muestra rango lineal: interpolación en la
recta
 lectura muestra en rango no lineal: interpolación en
región no lineal, pero requiere mayor número de
patrones en esa zona
 Recta:
 Puntosdistribuidos no linealmente pero con
una tendencia lineal manifiesta
 Elevar número de datos
 establecer la mejor recta que pasa por los puntos
 ecuación de los mínimos cuadrados
 residuos cuyo error corresponde a errores

aleatorios de la medida y no a la
concentración
Ecuación de los mínimos cuadrados
 Cuando no todos los datos quedan en la recta, debido
a errores aleatorios del proceso de medida; se debe
intentar ajustar la mejor línea recta que pase a través
de los puntos.
 Se supone que la línea recta es la mejor relación entre
las variables, y = mx + b,
Y también se supone que las desviaciones
individuales de los puntos respecto a la recta, residuo,
proviene del error en la medida y no de error en la
concentración del patrón.
 Sumatoria de los cuadrados de los residuales de x

(xi )
( 
2
S xx =  ( x1  x) 2
= x  2
i
N
 Sumatoria de los cuadrados de los residuales de y
(yi )
( 
2
S yy =  ( y1  y ) = y 
2 2
i
N
Sumatoria de los cuadrados de los residuales

de x e y
( 
S xy =  ( x1  x)( y1  y ) = xi yi 
xi yi
N
• xi e yi son las coordenadas de los puntos

• correspondientes a los datos individuales.
•N número de pares de datos de la curva de calibración.
• x e y son los valores promedio de las variables
 Parámetros de la curva
 m = Sxy / Sxx
 b= y – m x y =  yi /N
x =  xi /N
La efectividad y confiabilidad de
sus resultados depende de la
exactitud en las concentraciones
de los patrones y la mínima
diferencia entre la matriz de los
patrones y de la muestra.
Igualdad de matrices
 Opciones Prácticas
 Separar el analito de la matriz de la
muestra
 Uso de las Curvas de calibración de
Adición Estándar
Curva de Calibración de Adición Estándar
Se utiliza para muestras complejas

en las que existen grandes
probabilidades de interferencia por
efecto de la matriz.
Curva de Calibración de Adición
Estándar
 Formas de aplicación de la Adición Estándar:
 Adicionar diferentes volúmenes de disolución

patrón a varias alícuotas de muestra del mismo
tamaño. Después cada disolución se lleva a un
volumen fijo, antes de efectuar la medida.
 Adicionar incrementos sucesivos de volúmenes
del patrón sobre un volumen fijo de muestra
exactamente medido, requiere el control del
volumen total en cada incremento.
 Preparación de la serie de disoluciones:

 Preparar una serie de matraces aforados de
volumen VT y añadir
 alícuotas idénticas, VX, de la disolución problema
con concentración cX
 volúmenes variables de una disolución patrón de
analito que tiene una concentración cS.
 reactivos apropiados y diluir hasta el volumen
determinado VT, y
 medir la Señal S
 Siendo S proporcional a C:
abVS cS abV X c X
S = 
VT VT
S = mVS  b
abcS
m=
VT
abV X c X
b=
VT
 La concentración de la muestra viene dada por:
cX
abV X
b VT VX c X
= =
m cS cS
ab
VT
bcS
cX =
mVX
Ejercicio de Adición Estándar
 Se extraen alícuotas de 10 mL de una muestra

de agua mineral que se vierten en cada uno de
5 matraces aforados de 50,00 mL.
 Se adicionan a cada uno de ellos exactamente:
0,00 mL - 5,00 mL - 10,00 mL - 15,00 mL -
20,00 mL de una disolución estándar que
contiene 11,1 ppm de Fe3+
 Enseguida se les agrega un exceso de
tiocianato para dar el complejo rojo Fe(SCN)2+
 Se diluyen a 50,00 mL y se miden las A de
cada solución:
 las A medidas fueron:
 0,240 - 0.437 - 0.621 - 0.809 - 1.009
respectivamente, medidas en cubetas de 0,982
cm
 A) ¿Cuál es la concentración de Fe3+ en el agua
mineral?
 cS =11,1 ppm Fe3+
 VX = 10,00 mL
 VT = 50,00 mL
 Representar los datos en la gráfica

 Obtener la ecuación de la recta
 A = m VS + b , calculando m y b
 Calcular cX
Recordando
 Sxx = Σ ( x i – x )2 x =  xi / N
 Syy = Σ ( yi – y )2 y =  yi / N
 Sxy = Σ ( xi – x ) ( yi – y )
 m = Sxy / Sxx
 b = y - mx
Curva de Calibración de Patrón Interno
 Se basa en la medida de la respuesta del

analito y de otra sustancia empleada
como patrón interno.
 Para esto se preparan una serie de
patrones con cantidades variables y
exactamente conocidas de analito y de
patrón interno y se mide la respuesta del
analito y del patrón interno.
 Para construir la curva de

calibración se representa el
cuociente de las respuestas entre el
analito y el patrón interno, Ra/Rpi,
respecto al cuociente de las
concentraciones, Ca/Cpi, para cada
uno de los patrones.
 A continuación se le agrega una cantidad

conocida de patrón interno a la muestra y se
miden sus señales, se calcula la relación de
las respuestas y se determina la relación de
concentración por interpolación en la recta
de calibración.
 Uso limitado:
 Para obtener buenos resultados,
conviene no tener cuocientes muy altos
y muy bajos.
 Este método sólo se aplica en
Cromatografía de Gases y en
Espectroscopía de Emisión Atómica.
 Ventajas:
 Cuando hay variables experimentales poco
reproducibles y que son críticas en la
respuesta, como el volumen de inyección en
CG y las condiciones de excitación en EE de
llama.
 Si estos parámetros influyen en la respuesta
afectan tanto al analito como al patrón
interno, pero no afectan a su cuociente.
 Requisitos para la sustancia

empleada como patrón interno
 Que no esté presente en la muestra
 Que tenga una respuesta parecida al
analito
 Que no interfiera en la respuesta del
analito
Principio de aditividad de la
Ley de Beer
 Sistemas multicomponente : “Si una solución
contiene dos o más sustancias absorbentes, que no
interactúan entre sí, la absorbancia total de la
solución corresponde a la suma de las
absorbancias de las especies absorbentes”
 Ley de Beer:
 AT = A1 + A2 + A3
 AT = a1bc1 + a2bc2 + a3bc3
Principio de aditividad
de la Ley de Beer
 Ley de Beer:
 AT = A1 + A2
 AT = a1bc1 + a2bc2
 Si se miden las A a las l de máxima absorción para
cada especie y calculando previamente las
absortividades a esas l y manteniendo b constante, se
pueden obtener las concentraciones de la mezcla por
medio de un sistema de ecuaciones:
Principio de aditividad de la Ley de Beer
 Para una mezcla de dos componentes

absorbentes: c1 + c2
 AT = a1bc1 + a2bc2
 a11bc1 + a21bc2 = A T l l1 para c1
 a12bc1 + a22bc2 = A T l l2 para c2

 Mezcla de tres componentes absorbentes:

 c1 + c 2 + c 3
 AT = 1bc1 +  2bc2 +  3bc3 b cte
 A1 = 11c1 + 21c2 + 31c3 para l1

 A2 = 12c1 + 22c2 + 32c3 para l2
 A3 = 13c1 + 23c2 + 33c2 para l3
 Mezcla de tres componentes absorbentes:

Resolución: matriz [3*3]
-1
c1 A1 11 21 3 1
c2 = A2 12 22 32
c3 A3 13 23 33

Principio de aditividad de la Ley de Beer:
uso de espectrofotometría de derivadas
 Una de las dificultades mayores es la
selección de las longitudes de onda para las
mediciones; esto puede minimizar
mediante:
 Uso de la espectrofotometría de derivadas
 Uso de longitud de onda dual, mediante
modulación de la longitud de onda, fuente de
corriente alterna.
Principio de aditividad de la Ley de Beer:
uso de espectrofotometría de derivadas
 Espectro normal:
A  :
A Espectro derivado:
l •Se grafica la
primera derivada
en función de la
l longitud de onda
Titulación Fotométrica
A + B C + D
 Especies Absorbentes:
 Analito
 Reactivoo Titulante
 Producto
Titulaciones Fotométricas
 Absorbe el analito solamente
Peq. mL Titulante
 Absorbe el titulante solamente
Peq.
mL Titulante
 Absorbe el producto solamente
Peq.
mL Titulante
 Absorbe el analito y el titulante
Peq. mL Titulante
 Absorbe el producto y el titulante, pero el
primero el doble que el segundo
Peq. mL Titulante
Alcances y Aplicaciones de la Ley de Beer
 Mayoritariamente se aplica en las regiones UV,
VIS, IR cercano, R. X.
 Aplicable a especies químicas: iones, moléculas y
átomos.
 Aplicable a soluciones diluidas, y matrices sin
gran complejidad.
 Aplicable a niveles de detección de analitos del
orden mg/L o menores.
 Absorción radiación UV-VIS por compuestos

orgánicos
 e- compartidos en enlaces entre átomos
 e- no compartidos o externos (S, X-, O2, N2)
 Absorción UVvacío : uniones C-C, C-H

 Absorción UV: enlaces insaturados, grupos
orgánicos insaturados (cromóforos)
 Absorción radiación UV-VIS por compuestos

Inorgánicos
 Radiación VIS: Elementos de transición: transiciones
electrónicas entre orbitales d ocupados y libres
 Dependen de la posición del elemento en el sistema periódico,
su estado de oxidación y del ligando
 Lantánidos y actínidos: 4 f y 5 f
 Son poco afectados por otras especies unidas con electrones
externos
Alcances y Aplicaciones de la Ley de
Beer
 Cambios de Absorción de complejos
orgánicos :
 Conjugación entre dos o más cromóforos
 Efectos del disolvente:
 Batocrómico:
 Hipsocrómico
 Hipercrómico
 Hipocrómico
 Cambios de Absorción de complejos orgánicos e

inorgánicos por transferencia de carga:
 Grupo donador de e- enlazado a un receptor de e- , al
excitarse un e- del donador se transfiere a un orbital del
receptor, provocando una oxidación-reducción interna.
 Generalmente actuan como:
 receptores: iones metálicos
 donadores: ligandos
Errores y limitaciones de la Ley de Beer
 %T A
 100 2
m=ab
T = 10 -abc
 50 1 m A = abc
 c g/L c g/L
PRECISIÓN FOTOMÉTRICA
 Determinada por el ruido instrumental.

 Ruido instrumental: fluctuaciones estadísticas de la señal
que llega al detector.
 Incertidumbre de T del orden de 0,001 - 0,002 de la escala
total.
 0,002 límite práctico en el trabajo ordinario.
 Valor real del T:
 Medir aproximadamente 30 porciones de una solución y calcular la
desviación estándar.
 Tomar T como el doble de la desviación estándar media de las
lecturas.
PRECISIÓN FOTOMÉTRICA
 Factores experimentales que afectan la precisión:

 Error relativo de concentración
 incertidumbre en la determinación de P, lectura.
 variación de dP, por efecto del ruido.
 Manipulación de la muestra
 celdas
 imperfecciones
 limpieza
 manipulación
EXACTITUD ESPECTROFOTOMÉTRICA
 La medida espectrofotométrica depende:

 Exactitud fotométrica
 Precisión fotométrica
 Linealidad fotométrica :
 capacidad de un sistema fotométrico para dar una
relación lineal entre la P incidente a su detector y a
su lectura
Parámetros que afectan la Exactitud
Fotométrica
 Relación entre el ancho de banda espectral,
banda instrumental, y ancho de banda de
absorción observada
 Barrido de l demasiado rápido, en instrumentos
con registrador
 Incertidumbre en la l
 Radiación parásita
ERROR DE LECTURA
 De acuerdo con la ley de Beer:
 T = P / Po = 10-abc
 Existe una relación entre la concentración y la

Transmitancia.
ERROR DE LECTURA
curva de transmitancia versus concentración
 T
T1 T
T2 T
 C1  C2
C1 C2 Concentración
Error Relativo de Concentración
 Para calcular el error en la concentración es

necesario determinar la incertidumbre de la
lectura de la transmitancia.
1 1 1 1
 A = log = ln = 0,434 ln
T 2,303 T T
 Si diferenciamos con respecto a T :

dA 0,434
 = -
dT T
 Despejando dA:
0,434
 dA = - dT
T
 Para obtener el error relativo de la A es

necesario dividir por A:
 dA = - 0,434 dT
A TA
 Como A = - log T
dA 0,434
 = dT
A T log T
 De acuerdo con la Ley de Beer A = abc :

d( abc)
 = - 0,434 dT
abc TA
abdc dc 0,434
 = = dT
abc c T log T
 La ecuación se puede representar :

c 0,434
= T
c TA
Sc 0,434 ST
= x
c log T T
 Gráfico del error relativo de concentración
c
%
c
20 40 60 80 %T
 Error Relativo de la Concentración cuando el
error absoluto de T = 0,01
c
T A ( 100 )
c
0.95 0.022 20.4
0.90 0.046 10.5
0.80 0.097 5.6
0.70 0.155 4.0
0.60 0.222 3.3
0.50 0.301 2.9
0.40 0.399 2.7
0.30 0.523 2.8
0.20 0.699 3.1
0.10 1.000 4.3
0.03 1.523 9.5
0.02 1.699 12.8
Métodos Diferenciales o de Transmitancias
Relativas
Método T = 0% T = 100 %
Común Obturador Disolvente
Alta Abs. Obturador Solución patrón <
concentrada que la
muestra
Baja Abs Solución patrón > Disolvente
concentrada que la
muestra
Máxima Solución patrón > Solución patrón <
Precisión concentrada que la concentrada que la
muestra muestra
Métodos Diferenciales o de Transmitancias
Relativas
 Método COMÚN:
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Solv.
Obt. Altas A A Medias Bajas A
Error mínimo en conc.
Muestras muy concentradas
Muestras de concentración adecuada a la escala
Muestras muy diluidas

Método Diferencial de Alta Absorbancia
 Método de Alta Absorbancia

Para muestras muy concentradas
Obt. Solv.
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
100
Factor de Amplificación = = 5
20
Método Diferencial de Baja Absorbancia
 Método de Baja Absorbancia

Para muestras muy diluidas
Obt. Solv.
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
100
Factor de Amplificación = = 2,5
40
Método Diferencial de Máxima Precisión
 Método de Máxima Precisión

Para resolver muestras de concentraciones muy cercanas
con lecturas en la parte media de la escala.
Obt. Solv.
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
100
Factor de Amplificación = = 5
20
c
%
c
MC
MBA
MAA
MMP
20 40 60 80 %T
Limitaciones y Desviaciones de la
Ley de Beer
 La Ley afirma que la A es proporcional a la concentración de la
especie absorbente.
 La Ley de Beer se cumple para una radiación monocromática
que atraviesa una disolución diluida, cuando la especie
absorbente no participa en un equilibrio que depende de su
concentración.
 Limitaciones :
 Sólo para soluciones diluidas (≤0.01 M) de la mayoría de las
sustancias
 Para soluciones de bajo contenido iónico
 Para soluciones con bajo contenido de grandes especies
moleculares de gran tamaño que puedan afectar
electrostáticamente a la especie absorbente.
 Para soluciones cuyas concentraciones no modifiquen
grandemente el índice de refracción de las soluciones
Ley de Beer
 Desviaciones :
 Químicas:
 Por asociaciones, disiociaciones, y/o
reacciones entre los componentes de la
muestra con el analito, entre el analito y el
solvente.
 Por cambios en el equilibrio químico de la
especie absorbente, por efecto de cambios
de pH, temperatura, solubilidad,
normalmente por causa de las diluciones.
Ley de Beer
 Desviaciones :
 Instrumentales:
 Por el no cumplimiento de hacer incidir sobre la
muestra un haz verdaderamente monocromático
como lo contempla la Ley.
 Por la presencia de radiaciones parásitas,
radiación que contamina la radiación separada
por el sistema selector de longitud de onda. Esta
radiación se produce por efectos de dispersión de
los diferentes componentes ópticos del sistema
monocromador.
Ley de Beer
 Desviaciones :
 Instrumentales:
 Efecto del ancho de banda.
 Efecto de la utilización de longitudes de
onda que correspondan a los extremos
útiles de los espectrofotómetros.
INSTRUMENTACIÓN PARA
ESPECTROFOTOMETRÍAS UV - VIS
 COMPONENTES BÁSICOS
 Fuente estable de energía radiante
 Dispositivo para seleccionar una región de longitud
de onda restringida
 Recipientes transparentes para la muestra
 Detector de la radiación transmitida
 Dispositivos de procesamiento de la señal y de la
lectura, registradores
 Óptica asociada
FUENTES DE ENERGÍA RADIANTE
 Condiciones que debe cumplir una

fuente de radiación:
 Emitir toda la banda de longitudes de onda
de la región espectral en que se ha de
utilizar.
 Emitir radiación de intensidad elevada,
constante, estable y sin fluctuaciones en
toda la región de longitudes de onda de
trabajo.
 Requisitos:
 Emisión de un espectro constante
 Intensidad elevada
 Estabilidad de la emisión en toda la

gama de longitudes de onda de interés
 Tipos de fuentes radiantes :

 Fuentes continuas
 Fuentes de líneas
 Láseres
FUENTES CONTINUAS DE ENERGÍA
RADIANTE
 Empleadas mayormente en Absorción y

Fluorescencia.
 Pueden emitir rangos estrechos de longitud
de onda, monocromáticas, o rangos
amplios, policromáticas.
FUENTE RADIANTE : Intensidad
 La intensidad de la energía radiante

de una fuente varía
exponencialmente con la intensidad
eléctrica proporcionada.
FUENTE RADIANTE : Intensidad
 Para evitar la influencia de las variaciones

en la intensidad de la emisión de la fuente
se puede recurrir:
 Uso de fuentes de poder reguladas para

estabilizar la potencia radiante emitida,
 Dividir el haz radiante en dos haces: un haz

de referencia y un haz que pasa por la
muestra
División del haz: espectrofotómetro
de doble haz
 Haz simultáneo:
 un haz pasa por la referencia directo al detector y el
otro haz pasa por la muestra y posteriormente a un
segundo detector
 Haz alternado
 El haz pasa por la referencia y la muestra
alternadamente y las señales se reciben en un solo
detector
FUENTES CONTINUAS DE RADIACIÓN
POLICROMÁTICA UV - VIS
 LÁMPARAS DE HIDRÓGENO O DEUTERIO:

* Son tubos de vidrio con ventanas de
cuarzo
* Para radiaciones UV, entre 220 y 370
nm. A los 360 nm se cambian las
lámparas en los espectrofotómetros
UV-VIS
 LÁMPARAS DE FILAMENTO DE WOLFRAMIO Y DE
HALÓGENOS
 Útiles entre 360 a 950 nm
 El filamento se calienta mediante suministro
directo de corriente continua, o bien, mediante
una batería de 6 V, para asegurar un voltaje
estable.
 LÁMPARAS DE ARCO DE XENÓN O MERCURIO A

ELEVADA PRESIÓN
 Producen una intensa radiación por el paso de
corriente a través de atmósfera de xenón
 Espectro continuo entre 250 a 600 nm, con una
intensidad máxima a 500 nm.
 En el caso de la lámpara de Hg hasta 10.000 nm
Intensidad de radiación de una fuente de
filamento de Wolframio
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
100 300 500 700 900 1100 1300 1500
longitud de onda nm
SELECTORES DE LONGITUD DE ONDA DE
LA RADIACIÓN
 FUNCIÓN
 Separar bandas angostas de radiación
 para permitir la resolución de bandas

de absorción muy próximas
 aumentar la sensibilidad de la
detección
 mejor acoplamiento a la Ley de Beer
SELECTORES DE RADIACIÓN
 FILTROS
 de absorción
 de interferencias
 PRISMAS
 de Cornu:
 de Littrow:
 de Bunsen:
 REJILLAS
 de reflexión, de difracción
 de refracción, de transmisión
 FILTROS
 Los filtros transmiten una región

diferente del espectro UV-VIS, la
sensibilidad de la medida está
directamente relacionada con el ancho de
banda espectral, por lo que depende del
filtro escogido.
SELECTORES DE RADIACIÓN : Filtros
 Tipos de Filtro:
 de absorción : se limitan a la región VIS
del espectro.
 de interferencias : operan en la región
UV-VIS-IR.
 Filtros de absorción :
 En general son utilizados en fotómetros, que
vienen acondicionados para usar una serie de
filtros.
 Funcionan absorbiendo ciertas zonas
espectrales y transmitiendo las bandas no
absorbidas, generalmente son vidrios
coloreados o una capa de gelatina entre dos
placas de vidrio, con anchos de banda entre
30 a 250 nm.
 Filtros de absorción :
 Existen también aquellos que son
capaces de absorber un porcentaje
significativo de la radiación,
transmitiendo bandas más estrechas
pero de transmitancias
significativamente pequeñas.
 Ejemplo de estos filtros son los de
corte.
Filtros
 Filtros de Absorción
Filtro Filtro
amarillo azul
Luz
blanca
Luz
blanca
Filtro Filtro
azul
Filtros de absorción
100
Filtro
%T naranja
Filtro
verde
50
Combinación
entre ambos
400 500 600 700

Longitud de onda, nm
 Filtros de interferencias :
 Basan su operación en el Principio de
Superposición de Ondas, logrando la
selección de ciertas bandas
espectrales estrechas por
interferencias ópticas, constructivas
y/o destructivas.
Filtros de interferencia
100
%T
50
Ancho de
banda
410 420 430 440

Longitud de onda, nm
 PRISMAS
 deCornu: dos prismas de 30° unidos,
uno dextrógiro y otro levógiro.
 deLittrow: prisma de 30° de reflexión

sobre una cara metalizada especular,
aluminizada o plateada.
 deBunsen: prisma de 60° de una sola

pieza.
PRISMAS
 Si un haz de luz pasa a través de un prisma, se

dispersa en forma de haces divergentes.
 La porción violeta del espectro resulta la más

desviada, la porción roja sufre la desviación
mínima y los otros colores ocupan posiciones
intermedias.
PRISMAS
 Para lograr que una determinada longitud de

onda de radiación desdoblada pase a través de
la rendija de salida, se hace girar el prisma hasta
que una banda de longitudes de onda, centrada
en la longitud de onda deseada, quede en la
rendija de salida.
PRISMAS
 MATERIALES DE FABRICACIÓN
 Sílice fundida
 180 - 270 nm
 Cuarzo
 200 - 270 nm
 Cristal de roca
 350 - 2000 nm
Dispersión de la radiación por un prisma

Radiación Infrarrojo
incidente
Radiación l1
Radiación l2
Radiación l2
Radiación l2
Ultravioleta
b
REJILLAS
de reflexión, de difracción

de refracción, de transmisión
Rejillas de Difracción
 Las rejillas corresponden a una superficie lisa de

vidrio o metal, normalmente con una capa
especular, que presenta una serie de surcos o
ranuras uniformes, en un número que va de 100
a 1800 por mm, por lo que se hacen con un
diamante, con un control preciso para mantener
el espaciado igual entre líneas.
REJILLA DE DIFRACCIÓN
Rejilla de reflexión
Rejilla de escalerilla o Echelle

REJILLAS DE DIFRACCIÓN
 Son diseñadas para reflejar o transmitir luz.

 La dispersión es el resultado del proceso de
difracción y las interferencias ópticas que
suceden con radiaciones dispersadas.
 Sus ventajas más notables son:
 resolución y dispersión elevada dependiendo de
su longitud y sus líneas.
 Se utilizan en montajes que permiten una
dispersión casi constante con la longitud de onda
REJILLA DE DIFRACCIÓN
N
Rayos incidentes
Rayos difractados
r
RANURAS
i
A D
d
d = distancia entre surcos

Rejillas de Difracción
 Los defectos en el rayado producen

espectros no deseados, más débiles, que
aparecen acompañando a una línea más
intensa.
 Corresponden a radiaciones de 2º y de 3º
orden que acompañan a la radiación de 1º
orden.
Difracción por una rejilla
 Si se obtiene una línea de primer orden, n = 1, de 800

nm en un ángulo de difracción r, aparecerán en ese
mismo ángulo, líneas de segundo orden, n = 2, de 400
nm y de tercer orden, n = 3, de 267 nm.
 La línea de primer orden es la más intensa, las líneas
de órdenes mayores son de menor intensidad y
pueden ser eliminadas por medio de filtros.
 La intensidad de las líneas de primer orden
corresponden a valores superiores al 80 % de la
radiación incidente, en algunos casos hasta un 90 %.
SISTEMA MONOCROMADOR Y
POLICROMADOR
 Los monocromadores y policromadores

desdoblan la radiación policromática en las
longitudes de onda que la forman y separa estas
longitudes de onda en bandas muy angostas.
COMPONENTES DE UN
MONOCROMADOR
 Rendija, o ranura o slit, de entrada

 Sistema colimador
 Dispersor de radiación
 Focalizador
 Rendija, o ranura o slit, de salida
SISTEMA MONOCROMADOR
 REQUISITOS:
 Simplicidad de diseño
 resolución elevada
 útil en una amplia gama espectral
 gran capacidad dispersiva
 pureza de la radiación de salida

SISTEMA MONOCROMADOR
 El funcionamiento del monocromador

comprende tres aspectos fundamentales:
 Resolución
 Poder de captación de la luz
 Pureza de la radiación de salida

Prisma de Littrow : montaje
Littrow
Superficie especular
Montaje Littrow
Superficie especular
Prisma de Bunsen: diseño Bunsen
Slit de Slit de
entrada salida
Prisma
FUNCIONAMIENTO DEL SISTEMA
MONOCROMADOR
 : DISPERSIÓN LINEAL RECÍPROCA
 D-1 = dy / dx nm / mm
 DISPERSIÓN ANGULAR DE UNA REJILLA
 d / dl
 ECUACIÓN DE DIFRACCIÓN DE LA REJILLA
 nl= d ( sen i + sen r )

 señala que existen diferentes valores de l para un ángulo de difracción r dado.
 Para n = 1 máxima intensidad de la radiación
 Para máximos de difracción: d sen r = n l

EJERCICIO 1
Una rejilla de difracción de 21.5 mm tiene 6140

líneas.
a) Calcular la distancia d entre líneas
adyacentes
b) Qué ángulos tendrán los haces de intensidad
máxima cuando la radiación incidente tiene
una longitud de onda de 589 nm?
• d = 21.5 * 106 / 6140 = 3501 nm
• Condición de máximo: d sen r = n l
• si n = 1 sen r = 589 / d
• r = 42.33°
EJERCICIO 2
Una rejilla de difracción que contiene 1500

líneas por mm se irradia con un haz de luz
policromática bajo un ángulo de incidencia de
46°. Calcular la longitud de onda de la
radiación que aparece en el ángulo de reflexión
de 20°.
•Calcular d en nm
•calcular l aplicando ecuación de difracción
n l = d ( sen i + sen r )
• r = 20°, para n = 1, 2 y 3.
RESOLUCIÓN DEL MONOCROMADOR
 Definición :
 Es la propiedad del monocromador de poder
distinguir, como entidades separadas, aspectos
espectrales adyacentes.
 R = l / d l
 PRISMAS
 R = t d / d l t = base del prisma
 REJILLAS
 R = nN n = orden de radiación
N = n° total de surcos
EJERCICIO 3
 Una rejilla de difracción que contiene 1500 líneas

por mm se irradia con un haz de luz policromática
bajo un ángulo de incidencia de 46°.¿Qué longitud
debe tener la rejilla para resolver las dos líneas de
emisión del Na a 589,0 y 589,6 ?
 Resolución:
 calcular N para n = 1
 calcular longitud de la rejilla: dividir el número de
líneas por el número de líneas por mm, y
transformar a cm
EJERCICIO 4
 Calcular el mínimo necesario de líneas en una

rejilla para resolver el doblete de sodio, 589,0
y 589,6 nm en el espectro de segundo orden.
R = l/dl
 R = nN
 Igualando: N = l / d l *n
RENDIJAS, RANURAS O SLITS
 Slit de entrada
 selecciona una porción de radiación, de haces lo más
paralelos posible, que ingresa al monocromador
 Slit de salida
 selecciona la longitud de onda que incidirá sobre la
muestra y el detector
 Parte importante del monocromador, su

función es permitir:
 el ingreso de una porción de la radiación
incidente, que será dispersada,
 y la salida del haz de radiación monocromática
que irá hacia la muestra y al detector.
 Requisitos:
 Las ranuras deben tener los bordes agudos,
paralelos entre sí y que estén en el mismo plano.
 Las ranuras de entrada y de salida pueden tener
anchos similares o distintos entre sí, ajustables
mediante un sistema micrométrico.
 Anchura mecánica del slit

 separación entre los bordes de la ranura
 Anchura espectral o anchura de banda

espectral
 es igual a la amplitud del slit, W, por la dispersión
lineal recíproca, D-1 .
Anchura de banda = W * D-1
Espejos y Lentes
 Funciones:
 colimar y focalizar la radiación que
ingresa y sale del monocromador.
 evitar aberraciones cromáticas propias de
las lentes, que provocan pérdidas de
radiación, uso de espejos de superficie
frontal
Espejos
Espejos cóncavos
Lentes
diafragma
Espejos y Lentes
2
2 - 1
 Pérdida por reflexión =
2 + 1
 1aire = 1
2 =  de la lente ; 2vidrio = 1,52
2
1,52 - 1.00
 pérdida por reflexión = * 100 = 4 %
1,52 + 1.00
CELDAS ESPECTROFOTOMÉTRICAS
 Requisitos:
 fabricadas de material transparente a la región
espectral de interés
 con ventanas perfectamente perpendiculares a la
dirección del haz, en caso de las celdas
cilíndricas debe cuidarse la posición de ésta
respecto al haz para que sea reproducible
 de fácil limpieza y mantención
 COMUNES : Rectángulares y cilíndricas
 w w d
l l
h
 h h
 w 5 - 10 w 20 - 30 d 8 - 40
 l 5 - 50 l 5 - 100 h 50 - 120
 h 30 - 80 h 25 - 50
 ESPECIALES :
 microceldas de flujo con tapa
Detectores Espectrofotométricos
 Es un transductor que convierte la radiación
electromagnética en un flujo de corriente de
electrones y, posteriormente, en una corriente o
voltaje en el circuito de lectura.
 En muchos casos la fotocorriente requiere
amplificación, sobretodo cuando se miden bajos
niveles de energía radiante.
TRANSDUCTORES O DETECTORES
ESPECTROFOTOMÉTRICOS
 El propósito fundamental de los detectores

es convertir el poder radiante en una señal
eléctrica o en otra medida física, ej. calor o
resistencia, que pueda ser fácilmente
convertida en una señal eléctrica.
Detectores Espectrofométricos
 Propiedades de los detectores ideales
 sensibilidad espectral elevada
 respuesta constante en un amplio intervalo de l
 ganancia, o respuesta amplificable
 tiempo de respuesta rápido
 nula respuesta en ausencia de luz, o nula o baja

producción de corriente oscura
 respuesta directamente proporcional a la potencia
radiante incidente
 baja o nula producción de ruido
DETECTORES ESPECTROFOTOMÉTRICOS
 Las características principales de los

detectores espectrofotométricos:
 sensibilidad, linealidad, rango dinámico,
relación señal-ruido.
 Ellas juegan un rol importante en la
exactitud y precisión obtenida en un método
espectrofotométrico.
 La radiación transducida varía ampliamente en

su sensibilidad Q, linealidad, respuesta
espectral, velocidad de respuesta, rango de la
señal eléctrica, y tipo de ruido.
 La evaluación de un detector dependen de estas
características.

Sensibilidad del detector
 Sensibilidad = Q ( l  = dX  d
La sensibilidad es la pendiente del gráfico
señal eléctrica de salida del detector o
respuesta eléctrica X versus poder radiante
incidente .
 l gráfico sensibilidad versus l corresponde
a la respuesta espectral del transductor
Función transferencia
 La relación entre la cantidad de radiación

de salida y la cantidad de radiación de
entrada es conocida como la función
transferencia.
 Si se grafica y se obtiene una línea recta,
el detector exhibe linealidad y la
pendiente es la sensibilidad.
Linealidad del detector
 Generalmente, el detector exhibe linealidad en un rango
limitado de poder radiante incidente.
 La sensibilidad de un transductor no sólo es
función de la longitud de onda y de la potencia
radiante incidente, sino que también depende de
variables como temperatura, variaciones de voltaje
y componentes.
Estabilidad del transductor
 La constancia del valor de sensibilidad con el

tiempo corresponde a la estabilidad del
transductor. Es importante el mantener las
variables lo más constantes durante la medición
para asegurar constancia en la sensibilidad, y así
estabilidad y repetibilidad en la lectura.
CORRIENTE OSCURA
 La señal eléctrica de un transductor en

ausencia de radiación es conocida como
corriente oscura.
 Los detectores fotoemisivos, exhiben
corriente oscura debido a la emisión térmica
de electrones.
CORRIENTE OSCURA
 Aunque la señal de la corriente oscura puede

sustraerse de la señal total, puede ser una gran
fuente de error en la medida.
 Los instrumentos con detectores que
producen una corriente oscura llevan un
circuito compensador de corriente con el fin
de anularla.
 Los transductores ópticos pueden clasificarse en

tres categorías:
 detectores térmicos
 detectores de fotones
 detectores multicanal
Detectores térmicos
 Los detectores térmicos son sensibles a

los cambios de temperatura producida
por la absorción de la radiación incidente.
 Son ampliamente usados en la región IR
del espectro.
Detectores térmicos
 El cambio de temperatura es convertido
en una señal eléctrica por métodos que
dependen del transductor específico.
 El detector térmico tiene una respuesta
espectral casi uniforme que está
determinada por las características de
absorción de su cubierta y el material de
su ventana.
Detectores Térmicos
Detector Rango Señal

Espectral transducida
m
Neumático 0,8 - 1000 Capacitancia

Termocupla 0,8 - 40 Voltaje
Bolómetro 0,8 - 40 Resistencia
Piroeleléctrico 0,3 - 1000 Corriente
FOTÓNICOS
 Los detectores de fotones tienen una

superficie activa que absorbe la radiación,
causando:
 una emisión de electrones generando una
corriente eléctrica, que se mide.
 o proporcionando electrones a bandas de
conducción, midiéndose el aumento de la
conductividad resultante
TRANSDUCTORES O DETECTORES FOTÓNICOS
 Una de las grandes ventajas de los detectores

fotónicos es su rápido tiempo de respuesta,
menores a los microsegundos, mientras que los
térmicos responden en el orden de los
milisegundos.
 Estos detectores con frecuencia entregan una
respuesta que varía con la longitud de onda.
MULTICANALES
 Detectores multicanales son emulsiones

fotográficas, arreglo de múltiples detectores
semiconductores, o arreglo de detectores
térmicos. Los elementos en los arreglos de
detectores son ordenados linealmente o en dos
dimensiones
Detectores Espectrofotométricos
 Detectores de un solo elemento:
 celdas fotovoltaicas
 fototubos o tubos fotoemisores
 tubos fotomultiplicadores
 fotodiodos de Silicio
 fotoconductores
 de transferencia de carga
Detectores fotónicos
 Detectores multicanal:
 placas fotográficas o películas
 arreglo de diodos o serie de fotodiodos
 dispositivos de transferencia de carga

Celda fotovoltaicas o capa-barrera
hn
vidrio Capa delgada de Ag
Selenio Caja de
plástico
Hierro
+ -
Uso en el visible
Fotodiodo de Silicio
Detector fotodiodo
Tubo Fotoeléctrico
Cátodo
Ánodo
Ánodo
Cátodo
Fotomultiplicadores
 Tubo fotomultiplicador
Arreglo de fotodiodos
silicon wafer
Depletion region
SISTEMA LECTOR
Procesador de Lector
Transductor
señal analógico
Transductor Procesador de Convertidor

señal analógico analogíco-digital
Procesador
de señal digital
Lector
Sistema de Conteo de Fotones
Amplificador Discriminador de
PMT rápido altura de pulsos
1257 Puerto de conteo

Contadorr abierta cerrada
Clock

Ley de Beer e Instrumentación

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RADIACIÓN

 Las ondas de luz viajan a diferentes

(147 nm) (10-9 m/nm)

 El porcentaje de transmitancia es simplemente 100 T y

 Relación entre transmitancia

 Si solamente se transmite el 1 % de luz,

 Parte de la radiación incidente puede ser

 Como vemos es necesario usar:

 Las potencias incidente y transmitida pueden ser

 “La intensidad o potencia de luz

 b = espesor del medio absorbente

 “Cuando una radiación monocromática

 “Laintensidad o potencia de un haz de

 definiendo una constante a

 A mayor ε mayor nivel de absorción

 Esta ecuación demuestra la

 Por lo que manteniéndose

 Absorción radiación UV-VIS por

 Medición directa de la muestra y un patrón

 Mediante Curvas de Calibración

 Curva del Patrón Interno

 Obtención de cM por interpolación en la

 Puntos distribuidos no linealmente

 ecuación de los mínimos cuadrados

 residuos cuyo error corresponde a errores

 Sumatoria de los cuadrados de los residuales de x

Sumatoria de los cuadrados de los residuales

• xi e yi son las coordenadas de los puntos

Se utiliza para muestras complejas

 Adicionar diferentes volúmenes de disolución

 Preparación de la serie de disoluciones:

 La concentración de la muestra viene dada por:

 Se extraen alícuotas de 10 mL de una muestra

 Representar los datos en la gráfica

 Se basa en la medida de la respuesta del

 Para construir la curva de

 A continuación se le agrega una cantidad

 Requisitos para la sustancia

 Para una mezcla de dos componentes

 a11bc1 + a21bc2 = A T l l1 para c1

 a12bc1 + a22bc2 = A T l l2 para c2

 Mezcla de tres componentes absorbentes:

 A1 = 11c1 + 21c2 + 31c3 para l1

 Mezcla de tres componentes absorbentes:

c2 = A2 12 22 32

c3 A3 13 23 33

 Absorción radiación UV-VIS por compuestos

 Absorción UVvacío : uniones C-C, C-H

 Absorción radiación UV-VIS por compuestos

 Cambios de Absorción de complejos orgánicos e

 Determinada por el ruido instrumental.

 Factores experimentales que afectan la precisión:

 La medida espectrofotométrica depende:

 De acuerdo con la ley de Beer:

 Existe una relación entre la concentración y la

 Para calcular el error en la concentración es

 Si diferenciamos con respecto a T :

 Para obtener el error relativo de la A es

 De acuerdo con la Ley de Beer A = abc :

 La ecuación se puede representar :

Muestras muy diluidas

 Método de Alta Absorbancia

 Método de Baja Absorbancia

 Método de Máxima Precisión