Disciplina de Genética 2018.

REGULAÇÃO DA EXPRESSÃO GÊNICA

EM PROCARIOTOS

Letícia de Paula Scalioni, PhD

Natal, 2018
 bidirecional

O GENOMA PROCARIÓTICO
início
• Cromossomo único - nucleoide

• Molécula de DNA dupla fita (dsDNA) covalentemente fechada

• ≠ eucariotos: vários DNAs

• Organismos haploides

• Consequência da haploidia: 1 cromossomo – mutacação – expressão fenotípica – seleção

natural

• Cromossomo tem capacidade de se replicar: Replicon

• Genoma varia de ~0,6 x 106 pb a 9,5 x 106 pb

• Praticamente todo o genoma é funcional

 NUCLEOIDE E CROMATINA DE BACTÉRIAS

• Nucleoide não tem forma fixa: cilíndrica

• ¼ volume celular total
• Não tem envoltório
• Estrutura dependente da interação com nucleoproteínas
 E. coli
• 1997 teve seus 4.639.675 pb sequenciados.
• O genoma de E . c o l i K-12 MG16550 apresenta 4.493 genes
• 4.149 codificam cadeias polipeptídicas
• 172 correspondem a RNAs estruturais (incluindo os 87 sRNAs – s m a l l R N A s )
• 174 foram identificados como pseudogenes.
• A expressão dos genes dependerá de condições como: disponibilidade de nutrientes, temperatura e tempo.
• A célula é capaz de bloquear ou ativar a expressão de diferentes genes, como resultado de resposta aos
estímulos internos e externos.
• Os mecanismos que regulam o processo de transcrição do DNA para sintetizar RNA, e, posteriormente, a sua
tradução para gerar proteínas, são conhecidos como regulação da expressão gênica.
Comportamento de suas enzimas
Em bactérias, duas classes genéricas de enzimas, podem ser categorizadas: as enzimas constitutivas e
as induzíveis.

Enzimas constitutivas: são produzidas a velocidades e quantidades constantes, independentemente do

estado metabólico do organismo. Os exemplos mais comuns de enzimas constitutivas são algumas
daquelas envolvidas com a via glicolítica, rota essencial para o metabolismo celular.

Enzimas induzíveis: estão presentes em quantidades diminutas em um determinado momento, podendo

aumentar sua concentração em até 1000 vezes quando seu substrato encontra-se no meio de
cultivo, principalmente se esse substrato for uma fonte energética para a célula.
Ex.: enzimas é a β-galactosidase de E . c o l i , que catalisa a hidrólise da lactose para formar glicose e
galactose, sendo sintetizada em resposta à presença de lactose no meio de cultivo.
 Controle do início da transcrição
Reguladores gerais de Transcrição
As principais moléculas responsáveis por esses mecanismos regulatórios são denominadas fatores de transcrição

Fatores de Transcrição (1) reconhecem e ligam-se à sequências

específicas do DNA;
Ativam Reprimem (2) não apresentam capacidade de ligação
ao DNA, mas realizam sua ação por

Expressão de um gene meio da interação com outras

proteínas;

Ligação com seq (3) atuam pela combinação dos 2

especifica: região mecanismos: capacidade de se ligar ao
regulatória
DNA e de interagir com outras
próximas à região promotora
proteínas.
 Controle do início da transcrição
Fatores de Transcrição CAP – proteína ativadora de catabólito, que
regula mais de cem operons diferentes, entre
Específicos para um Reguladores gerais de
determinado promotor transcrição eles os responsáveis pela utilização de fontes
alternativas de açúcares como lactose,
arabinose, galactose e outros. CAP realiza a
Maioria dos FT Regulação de vários
genes ativação destes diferentes óperons, quando a
célula bacteriana está em deficiência de
1 FT regula a
Regulação em cascata
expressão de 1 gene glicose, por meio de sua ligação a uma
sequência específica localizada na região
E. coli 7 FT geral –
regula 50% expressão regulatória dos óperons
gênica
Tipos de reguladores da transcrição
Dois tipos principais de controle transcricional
O processo em que a regulação
ocorre por meio de uma proteína
repressora que se une ao DNA, é
chamado de regulação negativa.
Os genes sujeitos ao controle
negativo são expressos, a menos
que a transcrição seja impedida
pela ligação da proteína
repressora ao DNA
Diminui afinidade da RNA pol
Negativo Positivo
Subdivididos
A regulação positiva é
mediada por ativadores.
Indução ou Repressão No caso dos genes sujeitos
ao controle positivo, a
expressão depende da
presença de proteínas
reguladoras ativadoras,
que são o contraposto
molecular dos repressores.
Aumenta afinidade da RNA pol
Proteínas reguladoras da transcrição
(ativadores, repressores)
Proteínas reguladoras geralmente ligam-se a sequências específicas
do DNA. A afinidade para essas sequências alvo é de 104 a 106 vezes
maior do que para outras regiões do DNA.

Essas proteínas possuem domínios (regiões pequenas e delimitadas)

de ligação ao DNA que interagem com as sequências alvo.

A maioria dos contatos que permitem especificidade incluem grupos

químicos das bases do DNA expostos no sulco principal do DNA.
Interações entre proteínas-DNA

sulco
 Operon como unidade transcricional e de
controle da expressão gênica
Os estudos pioneiros da regulação gênica em E . c o l i foram feitos por François Jacob e Jaques Monod, na
década de 1950. Esses pesquisadores analisaram a expressão de enzimas envolvidas no metabolismo da
lactose, que pode ser usada como fonte de carbono e energia por meio de sua clivagem em glicose e
galactose.
Β-galactosidase Metabolismo da lactose
genes relacionados:
GLICOSE lactose-permease, que transporta a
Lactose Lactose
GALACTOSE lactose para dentro da célula;
transacetilase, cuja função no
metabolismo da lactose ainda não é
completamente conhecida.
é expressa somente
quando lactose está
disponível para a Com base em experimentos genéticos, Jacob e Monod
bactéria deduziram o mecanismo pelo qual a expressão destes genes é
regulada, formulando o modelo do óperon
 O GENE PROCARIÓTICO
Ligação RNA pol Proteína ou RNA estável Desligamento RNA pol

• FUNÇÕES RELACIONADAS
• ECONOMIA ESPAÇO
• n CISTRONS VARIÁVEL
• REGIÃO INTERCISTRONICA
(1 a 30 pb)
Unidade funcional do genoma
Operon lac de E. coli
Controle Negativo Os genes codificando a B-galactosidase, a permease e a transacetilase são
expressos como uma única unidade.

Repressor lacI constantemente produzido

 Hélice-volta-hélice
Este motivo de ligação ao DNA é crucial para a interação de muitas
proteínas reguladoras procarióticas. Este motivo engloba cerca de 20 aa
em dois segmentos -helicoidais separados por uma volta do tipo .

Este é o domínio do repressor

do Operon da Lactose,
denominado de repressor Lac
Controle Positivo

CAP – proteína ativadora de catabólito

Em bactérias, o AMPc liga-se ao CAP ou
CRP (catabolite gene activator protein -
proteína ativadora de genes por
catabólitos; codificada pelo gene crp),
uma proteína dimérica com 2
subunidades idênticas de 22Kd. Cada
subunidade possui um domínio de
ligação ao DNA e ao AMPc. Somente o
complexo CAP-AMPc é capaz de
estimular a transcrição e se ligar a
determinados promotores.
No operon lac, CAP se liga próximo a
região que se liga a RNA polimerase e
interage com a RNA polimerase.
 Mecanismos de controle pós-transcricional

• Muita ênfase sempre foi atribuída (em procariotos) aos mecanismos reguladores de controle em nível
de transcrição

• No entanto, vários mecanismos de controle da expressão gênica foram identificados regulando o início
da tradução.

• Bloqueio do acesso do ribossomo ao mRNA, que pode ocorrer pela presença de estruturas
secundárias na região 5' dos mRNAs ou pela ligação de proteínas ao mRNA impedindo a
ligação da subunidade 3s
Regulação por sRNAs
Obrigada!