Guía para el escalamiento de

fermentadores aeróbicos

Blgo. Luis Pollack Chinchay

Escalamiento
¿Por qué?
Baja
< 10 000L concentración
de producto

 Remoción de calor
 Transferencia de masa de
No es fácil
oxígeno
 Contaminación con
microbios externos

Guía: Ing. Químicos

Selección de una base
de diseño
 Tasa de crecimiento
O  Duración de la
2
fermentación
Mic
roorga
nismo

Título.
Expresión Producto
V diario

ració n:
de o pe
Modo
nti n uo.
Disco ntado
Lote
alime
Conti
nuo

Factores a tener en cuenta

Evaluación del equipo
Según las
CGMP:
Componentes estándar:
1.- Tanque de fermentación.
2.- El agitador e impulsor.
3.- Intercambiadores de calor.
4.- Cierres (sellos).
5.- Válvulas.

Otros:
1.-Sistemas clean-in-place
(CIP) (Limpieza local).

2.- Sistemas steam-in-place

(SIP) (vaporización local)

3.-Tanques auxiliares para el

control de pH y espuma.

4.- Tubos de ingreso.

5.-Sistemas de control e
instrumentación.
 FDA

Current Good
Manufacture
Practices
Mantenimiento
Instalaciones
Guías y requisitos
mínimos de diseño

Operación
Equipo

Documentación
 Estilo más usado

Diseño del
tanque de
fermentación

Factores a tener en cuenta:

 Operación monoséptica (18h-30 días,
según el tipo de fermentación).
 Operación confiable, repetible, estéril y
automatizada.
 H/D: 1,2-3
Razón de
apariencia
del tanque

Agitación
Un fermentador genérico debe ser:

Térmicamente resistente: soportar la

temperatura mínima de esterilización de 250 ºF
(121ºC)

Resistente a la presión: presión interna de 45-

psig y una presión al vacío total de -14.7 psig

Construidos con acero inoxidable 316L

presentan un acabado de pulimento mecánico
interno de 2B-mill o 25 Ra
 Componentes de limpieza

-Válvulas diafragma higiénicas para el drenaje de

fondo deben tener puertos CIP y SIP.

-Debe vaporizarse la línea de transferencia antes

de retirar el producto del fermentador.

-Las superficies húmedas deben tener un acabado

suave para facilitar la limpieza.

-Debe eliminarse las hendiduras o rajaduras.

Agitador e impulsor

DA = DT/3
DD = DA*2/3
AP = DT/10
HA = DT/12
HB = 1.2*DA

Mezcla bruta

Cizallamiento

HOMOGENEIDAD / DISPERSIÓN DE AIRE

 Requerimientos de energía
Capacidad de transferencia de oxígeno del impulsor.
-Cantidad de gas disuelto.- Al aumentar, disminuye la densidad del
líquido y por lo tanto la cantidad de potencia transferida al fluido.
-Aumento de potencia, espuma
-Espacio superior (gas retenido, espuma).- Entre20-30% del volumen total
del fermentador.
-Número de potencia.-

P.gc
Np 
 .N 3D 5

-El diámetro y la velocidad del impulsor son importantes consideraciones del

diseño de los sistemas de agitación. Comúnmente para fermentaciones
microbianas se especifica una razón diámetro del impulsor-diámetro
del tanque de 0,3-0,5. La razón es típicamente más baja en
biorreactores de cultivo celular, donde las células son mucho más
susceptibles al cizallamiento
 Intensidad y tiempo de mezcla

Dinámica
computacional de Tiempo de mezcla
fluidos

Configuración de impulsores
Geometrías de tanque
Grado de
homogeneidad
Intensidades de mezcla deseado
Patrones de fluido
Perfiles de velocidad
 Agitación y transferencia de
oxígeno

Tasa de Tasa de
ingesta de OUR ≈ OTR transferencia de
oxígeno oxígeno

 
OTR  K La C *  C L log mean

Kla = coeficiente de transferencia de masa h-1

C* = concentración de oxígeno en equilibrio con la presión parcial de

oxígeno en la fase gaseosa bruta, milimoles /L.

CL = Concentración del oxígeno disuelto en el caldo de fermentación, en

milimoles /L
 Estrategia para un
escalamiento exitoso
1º criterio: Igualar OUR a OTR (oxígeno no
debe ser limitante).
Formas de aumentar OTR: Potencia,
presión, inyección de oxígeno puro.

2º criterio: Usar KLa, el coeficiente de

transferencia de masa en la interface
líquido-aire (riesgo de
sobredimensionamiento)
 Aumentando accesibilidad.
Posición del
Posibilita uso de ejes más cortos
eje y del motor  Requiere estructuras de soporte físico más
del agitador simples
 Crea un espacio un espacio de cabecera
(sistema de cañerías y de captura de gases
Parte inferior retenidos en el líquido)
Reduce el requerimiento de altura vertical.

Posición del Distancia del impulsor más bajo:

Difusor 3/4 del diámetro del impulsor.
Formación de espuma.
Cubierta de aire
Sistema offgas (controlar la presión y reducir la espuma),
Antiespumantes
Disruptores mecánicos

Formación de vórtice : Deflectores –un (ancho : 1/10 DT)

Sello:

Mecánicos dobles, lubricados con

vapor o condensado.

Material: Según número de ciclos

térmicos de la esterilización
(carburo-tungsteno con base
estacionaria del mismo material, o
sellos de carbono con bases
rotatorias de carbono
Sistemas de servicio
Transferencia de calor.
Calor generado: Experimentalmente o con fórmula de Cooney et al:
Donde:
Q f  0.12  OUR
Qf = desarrollo del calor (kcal/L-h)
OUR = tasa de ingesta de oxígeno (milimol/L-h)

Medios para dispersar el calor:

Camisa. (puede resultar insuficiente)
 Serpentines. (de elección para
tanques a gran escala)
 Platos (demandas muy grandes de
calor)
 (Por pérdida de dimensionar al
tanque con un 10-20% de exceso
sobre el volumen “con gas”)
Intercambiadores de calor externos
Gases limpios.-
Sistema de entrada de gas :
-0.2 a 1.5 vvm a condiciones de gas estándar (0ºC, 14,7
psia).

Filtros con tamaño de poro controlable y esterilizables que

presentan bajas caídas de presión (filtros hidrofóbicos
de cartucho, tamaño de poro de 0.2-μm, esterilizados
con vapor.)

El sistema de venteo de gas contiene una válvula de retro-

presión que mantiene la presión positiva sobre el
fermentador, y está usualmente canalizado hacia un área
externa para la dispersión de olores molestos.
Seguridad y contención
Nivel de Bioseguridad Uso
Cepas bien definidas y
caracterizadas de
La contención a gran microorganismos viables (o
agentes recombinantes) que
escala de nivel de no están vinculados a
bioseguridad 1 (BL1-LS) enfermedades en humanos y
suponen sólo un riesgo
biológico mínimo para el
personal o el ambiente.
Agentes recombinantes de
riesgo moderado (ejemplo
Salmonella cholerasius) que
La contención a gran se dispersan principalmente
por ingestión, inoculación y
escala de nivel de posiblemente mediante
bioseguridad 2 (BL2-LS) aerosoles.
Evita la exposición de los
operadores a la fugas
microbianas en el ambiente.
Descripción
Requiere un sistema
cerrado.
Puede combinarse con la
inactivación del
microorganismo en una
tanque separado.
Requiere tanto un sistema
cerrado y contención
secundaria de los ejes de
bomba rotatorios, ejes
sellados al agitador, y
válvulas de muestreo
Puede combinarse también
con la inactivación en un
tanque separado.
Válvulas

 Válvula diafragma higiénica

 Válvula de bola (operación cíclica con fluidos SIP y CIP)
 Válvula de muestreo (dispositivo para ser sometida a
vapor)

 Flush-mounted diaphragm sampling valve, preferidas en

aplicaciones higiénicas porque eliminan las etapas
(espacios)muertas. Variación de diseño: abrazadera
sanitaria de 2in. en la base la válvula.

 Válvula de aguja (needle valve ): Aplicaciones de control

de flujo variable, especialmente donde están
involucradas altas velocidades de fluido. Una aplicación
típica podría ser el control de flujo o retro presión en
torrente estéril adicional. (sterile addition stream)
Agregados estériles
Los agregados estériles al medio, que incluyen nutrientes termolábiles tales como
vitaminas o enzimas, son usualmente realizados en el plato de cabecera usando una
válvula de bloque de doble aislamiento en-línea (inline double-isolation block valve).
La cual permite mantener al tanque fuente, la línea y el puerto asépticos, mientras
que se lleva a cabo el agregado. Esterilizar el puerto directamente y mantenerlo bajo
presión positiva. Los sistemas de inyección de vapor deberían emplear válvulas de
bloque (bloqueo) e incluir líneas separadas para la remoción de condensados.
Tubos de entrada.- Entradas no espumantes (NFI) o tubos sumergibles (diptubes), o
ambos, pueden ser necesarios para la adición de ciertos nutrientes o inóculos. Una FI
minimizará la formación de espuma de los fluidos proteínicos, tales como el suero
bovino fetal, y puede ser instalada en el plato de cabecera y dirigida hacia la pared
lateral del fermentador usando un codo en declive. Durante el diseño e instalación de
las NFIs y los tubos sumergidos, es necesario tener en cuenta la posibilidad de
descarga estática durante la adición del fluido. Un método preventivo es situar el tubo
a la misma altura que la línea tangente superior del tanque, y a una distancia de la
pared lateral que mida aproximadamente ¾ del diámetro del tubo. El tubo debe
apuntar hacia la pared lateral. El extremo superior del tubo debe estar diagonalmente
cortado, de modo que esté más lejos de la pared que del fondo del tubo. Esto reduce
la formación de espuma del líquido durante la adición. En una instalación detallada, el
tubo sumergido debe ser colocado verticalmente dentro del tanque, con una salida de
aproximadamente 6pulg o menos desde el fondo del tanque.
 Inoculación

1-10%
tamaño
del
tanque

Válvula positive shut-off