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Ciências Farmacêuticas
Imunologia
Discentes:
Catarina Oliveira......................n.º 17182
Elisabete Ramos......................n.º 13067
Isabel Cardeal .........................n.º 14133
Maria Sofia Bucho …….………nº 16543
Imunocitoquímica
Localização de proteínas numa célula ( ou população de células)
Neste trabalho
identificar e detectar linfócitos T em sangue periférico
Dois métodos
- Directo (anticorpo primário marcado)
Coloração castanha
(quando ocorre degradação do substrato
pela enzima)
Procedimento
Material e Reagentes
Material Reagentes
•Algodão •Álcool
•Lanceta •Solução metanol/acetona (50/50)
•Lâmina •Solução PBS
•Pipeta de Pasteur •Bloqueador das peroxidases endógenas
•Gobelé •Soro proteico (UV protein block)
•Micropipeta de 50 µl, 100 µl, 200 µl, 400 µl •Anticorpo primário (anti-CD3) Santa Cruz
e respectivas pontas Biotechnology – diluição 1 /10000
•Recipiente para despejos bio-perigosos •Anticorpo secundário biotinilado
(biotinylated secondary antibody)
•Microscópio •Streptavidina Peroxidase (HRP)
•Tubo Falcon •Solução de DAB (DAB
Chromogen/substract kit high contrast –
Scytek Laboratorics)
•Estufa •H2O2 a 3% (Lote 09216)
•Eppendorfs
Procedimento
Lavar em PBS 2x
• Para retirar o excesso de anticorpo secundário.
Observar ao MOC
Avidina Peroxidase DAB
Cor castanha
Biotina
1º anticorpo (anti-CD3)