ANÁLISE DE ÁGUA

Amostra de água da Lagoa

da Pampulha
 Objetivos
• Verificar se há a presença de bactérias
heterotróficas e de coliformes totais e fecais
na amostra de água coletada
• Observar se o local da amostra pode servir
para a utilização geral e se a água está em
condições de consumo.
 Introdução
Importância da análise de água

• Adequar a legislação específica de cada uso

requerido

• Prevenir danos à saúde humana

• Prevenir danos ao meio ambiente.

 Lagos
Distribuição dos microrganismos no ambiente
aquático
• Zona litorânea
• Zona limnética
• Zona profunda
• Zona bêntica
 Coleta de amostra de água

• Frasco coletor de plástico

• Transporte da amostra: 4ºC a 10ºC
• Tempo ideal para início da análise: 6 horas
(máximo 24 horas)
 Normas técnicas e limites para
avaliação da qualidade da água
Definições:
• Água potável

• Sistema de abastecimento de água para

consumo humano

• Solução alternativa de abastecimento de

água para consumo humano
• Controle da qualidade da água para
consumo humano

• Coliformes totais

• Coliformes termotolerantes

• Escherichia coli

• Contagem de bactérias heterotróficas

 Padrão de Potabilidade
Padrão microbiológico de potabilidade da água para consumo humano
PARÂMETRO VMP(1)
Água para consumo humano(2)
Escherichia coli ou Ausência em 100ml
coliformes
termotolerantes(3)
Água na saída do tratamento
Coliformes totais Ausência em 100ml
Água tratada no sistema de distribuição (reservatórios e rede)
Escherichia coli ou Ausência em 100ml
coliformes
termotolerantes(3)
Coliformes totais Sistemas que analisam 40 ou mais amostras por mês:
Ausência em 100ml em 95% das amostras examinadas
no mês;
Sistemas que analisam menos de 40 amostras por mês:
Apenas uma amostra poderá apresentar mensalmente
Resultado positivo em 100ml
NOTAS: (1) valor máximo permitido.
(2) água para consumo humano em toda e qualquer situação, incluindo fontes individuais como poços, minas, nascentes,
dentre outras.
(3) a detecção de Escherichia coli deve ser preferencialmente adotada.
 Padrão de Balneabilidade
Balneabilidade é a qualidade das águas
destinadas à recreação de contato primário,
sendo este entendido como um contato
direto e prolongado com a água (natação,
mergulho, esqui-aquático, etc), onde a
possibilidade de ingerir quantidades
apreciáveis de água é elevada.
 Águas doces são classificadas em:

1. Classe especial
2. Classe 1
3. Classe 2
4. Classe 3
5. Classe 4
 Categorias de Balneabilidade
As águas, sejam doces, salobras ou salinas,
podem ser classificadas como: PRÓPRIAS e
IMPRÓPRIAS
- Próprias podem ser classificadas em:

• Excelente: Quando 80% ou mais de amostras,

coletadas em um mesmo ponto, em 5 semanas
consecutivas, apresentarem no máximo 200 bactérias
Escherichia Coli.
• Muito Boa: Quando 80% ou mais das amostras,
coletadas em um mesmo ponto, em 5 semanas
consecutivas, apresentarem no máximo 400 bactérias
escherichia coli.
• Satisfatória: Quando 80% ou mais das
amostras, coletadas em um mesmo
ponto, em 5 semanas consecutivas,
apresentarem no máximo 800 bactérias
escherichia coli.

• Imprópria: Quando não se enquadra

nas categorias acima ou o valor na
última amostragem for superior a 2.000
bactérias escherichia coli.
Metodologia
 Determinação de coliformes em
Água
Tubos Múltiplos

Presuntivos
•10 mL da amostra em 10 mL de caldo
lactosado duplo, 5 tubos.
•Diluições consecutivas em caldo
lactosado simples a partir de 1 mL da
amostra para 9 do caldo, 1 mL da
primeira diluição para 9 do caldo, etc.
•Inoculação em estufa a 35°C+/- 0,5°C
de 24 a 48 horas. Indica coliforme
quando apresenta crescimento e
fermentação.
Confirmativos
•Transferência de alíquotas dos testes
que deram indicação de coliformes
anteriormente para caldo lactosado
verde brilhante bile.
•Inoculação em estufa a 35°C+/- 0,5°C
de 24 a 48 horas. Positivo para
coliformes totais quando apresenta
crescimento e fermentação.
 Diferenciação de coliformes fecais
(termotolerantes)
• São inoculados em caldo EC (E. coli) alíquotas
dos testes positivos para coliformes totais, que
fermentarão a lactose presente neste caldo.
• A temperatura de incubação é de 44,5°C +/- 0,2°C
em banho-maria, com agitação e temperatura
constantes. Devem ficar em incubação de 24 a 48
horas.
 Técnica do substrato definido
• Utilização do MUG e do ONPG.
• Diferenciação través da enzima beta
glicoronidase.
• Amarelo: Apenas Coliformes.
• Quando positivo para E. coli, é produzido
um composto fosforecente de brilho azul
quiando iluminado com luz ultra-violeta.
 Contagem padronizada de bactérias
heterotróficas em água
• Utilização do meio de cultura PCA (ágar para
contagem de colônias) com técnica de semeadura
pour-plate. Diluições seriadas em água peptonada
são feitas anteriormente e 1 mL de cada diluição é
inoculado na placa.
• Incubar as placas a 35°C +/- 0,5°C por 48 horas.
• Fazer o cálculo das densidades das bactérias.
 Ensaio completo
• Inocular em placas E.A.M (eosina azul de metileno) os
resultados positivos obtidos em caldo E.C. Incubar a 35°C
+/- 0,5°C de 24 a 48 horas.
• Utilizar o método de estrias.
• Resultados positivos Típicos: nucleadas, pequenas, com ou
sem brilho metálico esverdeado.
• Resultados positivos Atípicos: rosas, grandes, tendendo à
união, mucóides opacas e sem núcleo
• Resultados negativos: quaisquer outros crescimentos.
 Confirmação, Ensaio IMVC
• Inocular colônias isoladas em: VM/VP para
teste de vermelho de metila. VM/VP para
teste de voges proskauer. SIM semi sólido
para teste de sulfeto, indol e motilidade.
CITRATO, para confirmar a utilização de
citrato como única fonte de carbono.
Resultados e discussão
 Contagem Padronizada de Bactérias
Heterotróficas em água
Placa Volume Número de Caracterís- UFC/ml Média
/Diluição de colônias ticas
amostra
Placa 1 1 mL 2 Difusas 2 x 10-6
(Spreader) –
10-6 cremosas e
2 x 10-6
leitosas

Placa 2 1 mL 2 1 colônia difusa 2 x 10-6

(spreader) –
10-6 cremosas e
leitosas

Placa 3 1 mL 2 Cremosas e 2 x 10-5

leitosas
10-5 2 x 10-5
Placa 4 1 mL 2 Amarelas, 2 x 10-5
cremosas e
10-5 regulares

Controle _ 1 Amarela, cremosa _ _

e regular
negativo
Cálculos
 Determinação de coliformes em água
- Teste presuntivo -
• Técnica dos tubos múltiplos (NMP) Número de tubos
positivos
10 mL de
5 tubos de CLD amostra em 5
(caldo lactosado duplo) cada tubo

5 tubos de CLS 1 mL de
amostra em 5
(caldo lactosado simples)
cada tubo

5 tubos de CLS 0,1 mL de

(caldo lactosado simples) amostra em 5
cada tubo

NMP/100 mL = ≥ 1600 (5-5-5)

 Determinação da presença do grupo
coliforme total em água
– Teste confirmativo –
Série Volume inóculo Leitura

1 CVBBS 10 mL 4*

2 CVBBS 1 mL 5

3 CVBBS 0,1 mL 5

NOTA: *Como observou-se que para os demais volume inóculos os 5 tubos foram positivos, pode-
se concluir que houve erro do operador e um tubo de CVBBS de volume inóculo de 10 mL não foi
inoculado, pressupondo, então que se obteria 5 tubos positivos também para esse volume.

NMP/100 mL = ≥ 1600 (5-5-5)

 Enumeração de Coliforme
termotolerante (fecal) na amostra de
água
Série Volume inóculo Leitura

1 CEC 10 mL 3 (em 4)*

2 CEC 1 mL 3

3 CEC 0,1 mL 0

NOTA: Em decorrência do erro de operação mencionado anteriormente

NMP/100 mL = 27 (4-3-0, pois não havia a sequência 3-3-0 e notou-se um erro no preparo do CVBBS)
 Método enzimático Sistema
Cromogênico: Técnica do Substrato
definido
• A amostra adquiriu uma cor amarelada e
quando houve emissão de luz UV,
observou-se fluorescência azul,
confirmando a presença de E. coli.

MUG – Confirma E. coli

Ensaio Completo
 Conclusão
• Pequeno número de bactérias
heterotróficas;
• Número enorme de E. coli na água
(1600/100mL)
• Número relativamente pequeno de
coliformes fecais (27/100mL)
• A água da Lagoa da Pampulha possui
contaminação de origem fecal;
• De acordo com a lei, é imprópria para
ingestão humana e é própria (satisfatória)
para a utilização geral.
 Referências Bibliográficas:
• Balneabilidade. Acessado em: 26/09/10. Disponível em:
http://www.jurere.com.br/sae/balneabilidade.htm
• Potabilidade. Acessado em: 26/09/10. Disponível em:
http://www.jurere.com.br/sae/potabilidade.htm
• PELCZAR, Michael Joseph e outros. Microbiologia: Conceitos e aplicações, vol
2, 2. ed. Traduzido por Sueli Fumie Yamada. São Paulo: Pearson Education do
Brasil, 1997.
• Água. Acessado em 28/09/10. Disponível em: http://www.aquanalise.com.br/agua.
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