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PARASITOLOGIA CLNICA HUMANA

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Tcnicas de exame

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EXAME PARASITOLGICO DE FEZES

1) Introduo:


Coproscopia parasitria:

Evidenciar e identificar os parasitos que vivem no tubo digestivo do homem ou os parasitos em que fezes constituem o veculo normal para a disseminao de suas formas para o meio externo.
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No existe mtodo de exame de fezes capaz de evidenciar todos os ovos, larvas de helmintos ou cistos e trofozotos de protozorios intestinais. Alguns mtodos, entretanto, so mais usados rotineiramente. So capazes de evidenciar maior nmero de formas, alm de serem de execuo fcil e barata.

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Mtodos mais utilizados:

Sedimentao espontnea (mtodo de Lutz ou Hoffman, Pons e Janer). Sedimentao e centrifugao (mtodo de Ritchie formol ter ou mtodo de Blagg MIFC ).

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Para preciso do exame coproscpico: 1) Algumas espcies de parasitos so evidenciados por tcnicas especiais. 2) Um exame isolado, negativo, no tem valor diagnstico. 3) Material deve ser examinado rapidamente.

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importante que o clnico ao examinar o paciente obtenha elementos bsicos de orientao para a escolha de determinada tcnica. Esses elementos so: 1) Origem geogrfica do doente. 2) Histria clnica (anamnese). 3) Resultados de outros exames laboratoriais. 4) Uso de medicamentos pelo paciente (resultados falsos).
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Produo de cistos, ovos ou larvas no uniforme. recomendvel que a coleta do material siga as seguintes orientaes bsicas: 1) Quando h suspeita de alguma parasitose deve-se devecoletar uma amostra de fezes por dia, durante trs a seis dias alternados, acumulando as amostras em um vidro com conservante.

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2) Para exame de rotina, sem suspeita clnica inicial, pode-se colher apenas uma amostra de podefezes e encaminhar ao laboratrio. 3) Devido a SIDA, alguns parasitos intestinais, at ento esquecidos, vm sendo observados com maior freqncia na rotina. Nos casos de imunocomprometidos, a rotina dever incluir a pesquisa de Cryptosporidium sp.
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Freqentemente as fezes so slidas ou pastosas. Pesquisa de trofozotos de protozorios. Paciente deve tomar purgativo salino na noite anterior. Um indicado o Na2SO4, o sal de Glauber.

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Outros cuidados para qualidade do exame: 1) Recipiente para transporte. 2) Rotulagem do material. 3)Entrega do material em laboratrio.

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2) Mtodos para conservao de fezes:




Devem ser remetidas rapidamente para o laboratrio. Quando no for possvel, alguns mtodos de conservao so recomendados. FRIO Recipiente com as fezes em geladeira ou caixas contendo gelo e serragem.
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FORMOL 5% Fezes em recipiente mais dobro de volume de formol a 5%. Homogeneizar. Assim feito, os cistos, ovos ou larvas permanecem conservados por mais de um ms. MIF Conservador difundido. Mertiolato (ou mercuriocromo), iodo e formol.

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MIF: gua destilada 250 ml. Sol. de mercuriocromo 1.500 250 ml. Formol 25 ml. Glicerina 5 ml. UsaUsa-se como formol a 5%. Na microscopia colocar gotas de lugol para corar cistos.

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SAF Muito til para fezes diarricas, conservando bem cistos e trofozotos. Acetato de sdio 1,5g. cido actico 2,9 ml. Formol 40% 4,0 ml. gua destilada 92,5 ml.

   

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3) Mtodos de exame:


Nem sempre o nmero de formas encontradas nas fezes suficiente para serem vistas num simples exame direto. Na maioria das vezes h necessidade de examinar maior volume fecal, fazendo-se a fazendoconcentrao ou enriquecimento das mesmas para evidenciao de formas.
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Mtodos qualitativos:

So aqueles que acusam a presena de parasitos intestinais, mas no o seu nmero provvel.


Mtodos quantitativos:

So os mtodos que permitem a contagem dos ovos nas fezes e indicam a quantidade provvel de vermes no paciente.

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3.1) Mtodos qualitativos:


   

     

y Mtodo da fita gomada. y Mtodo a fresco. y Mtodo de Faust. y Mtodo de Lutz, tambm conhecido como Hoffman, Pons e Janer (HPJ). y Sedimentao por centrifugao. y Mtodo de Willis. y Mtodo de Baermann Moraes . y Mtodo de Rugai. y Mtodo de Sheather s. y Mtodo de Vercamemen Grandjean.
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Mtodo da fita gomada:


 

Face adesiva voltada para fora da lmina. Colocar um lpis, tubo de ensaio na face interna. Encostar rpida e firmemente a fita adesiva sobre o nus. Colocar fita sobre lmina, procurando evitar dobras e formao de bolhas de ar. Enterobius vermicularis, Ascaris lumbricoides e vermicularis, Trichiuris trichiura. trichiura.
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Mtodo a fresco:


Exame direto. ColocaColoca-se uma gota de soluo fisiolgica previamente aquecida a 37oC sobre uma lmina. Emulsionar uma pequena quantidade de fezes do tamanho de um gro de arroz cru. Cobrir preparado com lamnula. Examinar 10X e 40X.
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Mtodo de Faust:
       

 

Centrfugo flutuao. Diluir 10g de fezes em 20 ml de gua filtrada. Homogeneizar. Filtrar atravs de gaze, dobrada em quatro, num tubo. Centrifugar por um minuto a 2.500rpm. Desprezar lquido sobrenadante. Repetir operao 2 a 3 vezes. gua sobrenadante desprezada e o tubo cheio com 2ml de soluo de sulfato de zinco a 33% com densidade 1,180. Centrifugar por 1 minuto. Os cistos (ovos) estaro em pelcula flutuante, coletada com ala de platina. 11/6/2011 22

Mtodo HPJ:
    

 

Sedimentao espontnea. Colocar 2 g de fezes em frasco com 5 ml de gua. Triturar bem com basto de vidro. Acrescentar 20 ml de gua. Filtrar suspenso com gaze dobrada para clice cnico de 200 ml de capacidade. Gaze lavada com mais 20 ml de gua. Suspenso de fezes deixada em repouso por 2 a 24 horas. Aps esse perodo observar o aspecto do lquido sobrenadante:
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Lquido turvo Desprezar cuidadosamente sem levantar ou perder o sedimento. Colocar mais gua at o volume anterior e deixar por mais 60 minutos em repouso. Lquido claro Proceder exame.

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Exame em duas tcnicas:

Introduzir uma pipeta at o fundo e colher uma gota do sedimento. y Desprezar o lquido cuidadosamente, homogeneizar o sedimento e colher uma gota do mesmo (processo mais representativo). Ambos os mtodos so aplicados sobre lmina, uma gota de lugol e examinar com aumentos de 10X e 40X.
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Mtodo sedimentao por centrifugao:




Em fezes conservadas por formol a 10% a tcnica tem o nome de Ritchie ou formol ter . Em fezes conservadas em MIF o nome mtodo de Blagg ou MIFC .

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Colher fezes recm emitidas em lquido conservador. Homogeneizar. Filtrar 2 ml da suspenso (gaze cirrgica dobrada em quatro) para tubo cnico para centrifugao. Acrescentar 4 a 5 ml de ter sulfrico e agitar. Centrifugar por 1 minuto a 1.500rpm. Desprezar o lquido. Acrescentar gotas de lugol ou salina ao sedimento, com pipeta recolher uma gota e levar ao microscpio, 11/6/2011 28 examinar 10X e 40X.

Mtodo de Willis:
 

 

 

Colocar 10g de fezes num frasco. Diluir a mesma em soluo saturada de acar ou sal (NaCl). Completar volume at a borda do frasco. Colocar na boca do frasco uma lmina, que dever estar em contato com o lquido. Deixar em repouso por 5 minutos. Retirar rapidamente a lmina voltando para cima a parte molhada. 11/6/2011 Cobrir com lamnula levar ao microscpio. 29

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Mtodo de Baermann
  

Moraes:

 

Tomar 8 a 10 gramas de fezes sem conservante. Colocar em gaze dobrada em quatro. Colocar o material assim preparado num funil de vidro, previamente cheio at quase a borda com gua a 45oC. Deixar em repouso por uma hora. Colher 5 a 7 ml de gua abrindo-se a pina que abrindooblitera o tubo de borracha colocado na haste do funil. A gua pode ser coletada em vidro de relgio ou em tubo para centrifugao (1 minuto a 1.000rpm) examinar ao microscpio. 11/6/2011 31

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Mtodo de Rugai:


 

 

Semelhante ao anterior e baseado no mesmo princpio do hidro e termotropismo. Tomar 8 a 10g de fezes ou terra. Colocar em gaze dobrada por 4 vezes e fazer pequena trouxa . Colocar material assim preparado num clice de sedimentao cheio de gua morna (45oC) at o meio. Deixar em repouso. Colher material no fundo do tubo e examinar em microscpio. 11/6/2011 33

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Mtodo Vercammen


Grandjean:

 

   

TrataTrata-se de um mtodo descrito para pesquisa de ovos de Schistosoma mansoni nas fezes. Em tubo colocar 3 a 4 g de fezes. Acrescentar soluo fisiolgica at que o lquido fique a 2 cm da borda do tubo. Juntar 6 a 8 perolas de vidro de 3 mm de dimetro. Tapar o tubo com rolha de boracha. Agitar energeticamente por 1 minuto. Deixar em repouso por 10 minutos.

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Decantar o sobrenadante por inverso rpida. Sedimento de 3 mL deve restar no tubo. Repetir operao algumas vezes at clarear sobrenadante deixando restar sempre os 3 ml de sedimento. Na ltima lavagem deixar sedimento final sendo vertido sobre lmina ou vidro de relgio atravs de gaze dobrada duas vezes para anlise em microscpio. Poder detectar outros ovos ou larvas.
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3.2) Mtodos quantitativos:




y Mtodo de Kato modificado por Katz e cols. y Mtodo de Stoll Hausheer.

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Mtodo de Kato modificado por Katz e cols.




muito usado para o diagnstico e contagem de ovos de S. mansoni, A. lumbricoides, T. mansoni, lumbricoides, trichiura e Ancylostomatidae (neste ltimo, o diagnstico possvel quando as Lminas so examinadas no mximo at duas horas aps sua preparao, pois se tornaro pouco visveis aps esse tempo).

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Pode ser feito a partir de fezes frescas ou conservadas em MIF ou formol, mas no a partir de fezes diarricas. Para se executar a tcnica a partir de fezes conservadas, as mesmas no devem estar liquefeitas e o conservador deve ser desprezado no momento do exame.

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Preparar uma soluo de verde malaquita (conservar e clarear as fezes a serem examinadas): Glicerina 100 ml.  gua destilada 100 ml. Verde malaquita a 3% 1 ml.


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Cortar papel celofane semipermevel (molhvel) em pedaos de 0,24 mm por 30 mm. Mergulhar o papel na soluo de verde malaquita por 24 horas. Colocar sobre um pedao de papel higinico a amostra de fezes a ser examinada. Comprimir a parte superior com um pedao de tela metlica (0,9mm e trama: 0,09 mm).
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Retirar as fezes que passaram para a parte superior da tela. TransferiTransferi-las, com auxlio do palito, para um carto retangular. Orifcio de 6 mm de dimetro (as fezes so colocadas nesse orifcio). Aps encher completamente o orifcio, retirar o carto, cuidadosamente, deixando as fezes sobre a lmina de vidro.
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Cobrir as fezes com a lamnula de papel celofane. Aguardar uma a duas horas e examinar ao microscpio (todos os campos). O nmero de ovos encontrados no esfregao fecal, multiplicado por 23, corresponder ao nmero de ovos por grama de fezes.

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Mtodo de Stoll


Hausheer:

Utilizar frascos tipo Erlenmeyer. Indicados os nveis correspondentes a 56 e 60 milmetros cbicos. Colocar no frasco soluo decinormal de soda at a marca inferior, correspondente a 56 cm3. Juntar fezes at que o nvel do lquido atinja a marca superior correspondente a 60 cm3.
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Introduzir no frasco prolas de vidro. Fechar o recipiente com rolha, de preferncia de borracha, parafinada ou envolta em papel alumnio. Agitar fortemente. Retirar 0,15 cm3 da suspenso, usando pipeta de um centmetro, graduada em centsimos.
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Depositar essa quantidade de material em lmina. Cobrir com lamnula de 22 x 44 mm. Contar nmero de ovos na preparao toda em objetiva de fraco aumento. Calcular o nmero de ovos por grama de fezes, multiplicando por 100 o valor encontrado.

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4) Famlia Endamoebidae: Endamoebidae:




Esta famlia compreende parasitas do aparelho digestivo dos vertebrados e formas livres. Trs gneros com importncia mdica: Gnero Entamoeba. Entamoeba.  Gnero Endolimax. Endolimax.  Gnero Iodamoeba. Iodamoeba.

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Gnero Entamoeba: Entamoeba:


 

Os ncleos so esfricos e de aspecto vesiculoso. A cromatina pode ser perifrica. Pode se aglutinar na regio central, formando estrutura chamada carissomo. Freqentes no homem:  Entamoeba histolytica.  Entamoeba coli. coli. 11/6/2011

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E. coli : Cisto em salina

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E. coli: Cisto em salina coli:

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E. coli: Cisto em lugol coli:

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E. coli: Cisto em lugol coli:

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E. coli: Trofozoto hematoxilina frrica coli:

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E. histolytica: Cisto em salina histolytica:

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E. histolytica: Trofozoto em salina histolytica:

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Gnero Endolimax: Endolimax:




Amebas com ncleos pequenos. A membrana nuclear delicada e sem cromatina perifrica. Carissomo relativamente volumoso, compactado e irregular. Espcie Endolimax nana. nana. 11/6/2011

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Endolimax nana: Cisto em lugol nana:

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Gnero Iodamoeba: Iodamoeba:




As amebas deste gnero possuem ncleo com espessa membrana e sem cromatina perifrica. O carissomo grande e central. Espcie Iodamoeba butschlii. butschlii.

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Iodamoeba butschlii tm citoplasma com mltiplos vacolos. Dentro destes esto bactrias e detritos fagocitados. A forma cstica tem um s ncleo. Quando coradas pelo lugol, seus cistos mostram uma ou duas reas compactas de glicognio.
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Iodamoeba butschlii: Cisto em lugol butschlii:

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5) Famlia Hexamitidae: Hexamitidae:


  

 

Gnero Giardia. Giardia. Espcie Giardia lamblia. lamblia. Protozorio flagelado, que parasita o duodeno e tero superior do jejuno. ApresentaApresenta-se como trofozoto ou na forma cstica. Formato piriforme. Mede entre 10 20 Qm em seu maior dimetro. Tem dois a quatro ncleos no visveis ao 11/6/2011 69 exame direto.

Giardia lamblia: Cisto em lugol lamblia:

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Giardia lamblia: Cistos em lugol lamblia:

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Giardia lamblia: Trofozoto em lamblia: hematoxilina frrica

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Ovos de Helmintos:

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4) Referncias bibliogrficas:


LIMA, A.O. Mtodos de laboratrios aplicados clnica: tcnica e interpretao. 7 clnica: interpretao. ed. ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2001. Janeiro: 2001. NEVES, D.P. Parasitologia humana. 10a ed. humana. ed. So Paulo: Atheneu, 2000. Paulo: 2000. CARVALHO, P. Boas prticas qumicas em biossegurana. biossegurana. So Paulo: Intercincia, 1999. Paulo: 1999. VALLADA E.P. Manual de exame de fezes. fezes. So Paulo: Atheneu, 1998. Paulo: 1998. 11/6/2011 78