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Enzimas

1
Ao final deste bloco, o aluno terá
conhecimento sobre os seguintes assuntos:

 Principais características cinéticas das enzimas


 Características do sítio ativo
 Cofatores enzimáticos
 Inibição enzimática
 Atividade enzimática
 Cinética enzimática

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Enzimas

Enzimas são proteínas com atividade catalítica

Uma enzima geralmente


catalisa uma só reação
química ou um conjunto
de reações
intimamente relacionadas

Substratos: reagentes
3
Porque estudar Enzimas e Cinética Enzimática?

• Reatores biológicos
- Presença de células vivas
- Cinética de processos fermentativos
- Metabolismo de microrganismos
Reações enzimáticas

• Reatores enzimáticos
– Enzima + substrato

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Mercado de Enzimas Industriais
• Supõe-se que existam na natureza cerca de 7.000 diferentes enzimas
• Enzimas comercializadas para aplicação industrial: mais de 100 tipos
• Taxa anual de crescimento esperada entre 2018 e 2024 de 5,7%
• Expectativa de alcançar mercado de USD 19 bilhões em 2025

Principais segmentos:
1) Enzimas para aplicações técnicas:
- indústria têxtil
- de papel
- de detergentes
2) enzimas para alimentos (melhoria de digestibilidade e nutricional) e
bebidas
3) enzimas para a produção de nutracêuticos
4) enzimas para ração industrial: facilitar a digestão de rações de aves,
suínos e na aquacultura
5
5) enzimas para produção de cosméticos e higiene
Mercado Mundial de Enzimas

Mercado mundial de enzimas em 2018:


USD 10,48 bilhões

https://www.grandviewresearch.com/industry-analysis/enzymes-industry

Previsão de vendas globais em 2025:


USD 19 bilhões
https://www.grandviewresearch.com/press-release/global-enzymes-market
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Crescimento do Mercado de Enzimas
Industriais por Região: 2019-2024

https://www.mordorintelligence.com/industry-reports/industrial-enzymes-market
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Mercado Mundial de Enzimas:
Biocombustíveis
Vendas de enzimas em 2018: USD 903,77 milhões

Source: BCC Research


Global Markets and
Technologies for
Biofuel
Enzymes( EGY099A )
celulase Publish Date: January
2013    

Previsão de vendas globais em 2024:


USD 1,5 milhões 8
https://www.globenewswire.com/news-release/2019/04/04/1797207/0/en/Global-Biofuel-Enzymes-Market-Forecasts-to-2024-Market-is-Projected-to-
Grow-at-a-CAGR-of-9-05-to-Reach-US-1-519-725-Million.html
Mercado de Enzimas Industriais
Mercado de enzimas no Brasil em 2014: 6% do mundial

Importantes players do mercado:

•BASF SE (Alemanha) •AB Enzymes


•Dow Du Pont (EUA) •Advanced Enzymes
•Associated British Foods PLC (UK) •Biocatalysts
•Koninklijke DSM N.V (Holanda) •BioResource Int. Inc.
•Novozymes A/S (Alemanha) •DSM NV
•Company Adisseo France SaS (França) •Lesaffre
•Codexis Incorporated (EUA) •Abbott Nutrition
•Dyadic International Incorporated (EUA) •BioMereux
•CHRHansen Holding A/S (Dinamarca) •Danone
•Amano Enzyme Incorporated (EUA) •Nestlé

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Exemplos de Enzimas Industriais
Enzima Indústria Aplicação
Panificação Reduz a viscosidade do amido e acelera o
crescimento da massa
-amilase Cervejaria Liquefaz o amido
Têxtil Remoção de gomas de amido
Glicoamilase Açucareira Produção de xaropes de glicose
Lavanderia Incorporação em detergentes
Proteases Curtume Curtir e depilar o couro
Alimentícia Fabricação de queijos, amaciamento de carne
Pectinases Alimentícia Clarificação de sucos
Glicose isomerase Alimentícia Produção de xaropes de frutose
Papaína Alimentícia Evitar turbidez da cerveja
Penicilina-amidase Farmacêutica Produção de antibióticos
Farmacêutica Purificação de misturas racêmicas de
Amiloacilase
e alimentícia aminoácidos
Celulases e hemicelulases Papel Hidrólise de material contendo celulose
Lipases Lavanderia e Hidrólise de lipídios, desenvolvimento de
alimentícia aromas, incorporação em detergentes

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Tendências
Aumento da demanda prevista nas seguintes áreas:
• alimentos: produtos de panificação e queijos
• bebidas: sucos de frutas, cervejas, vinhos
• higiene, cuidados pessoais e cosméticos: cremes
para o reparo da pele, cremes dentais, enxaguantes
bucais, branqueadores de dentes.

Desenvolvimentos de produtos para aplicações em:


• branqueamento, refinaria, remoção de tintas e de
adesivos.

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Principais Características Cinéticas das Enzimas

Potência Catalítica:

Especificidade

Controle da Potência Catalítica


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Principais Características Cinéticas das Enzimas

Potência Catalítica

Aumento da velocidade de reação


sem recorrer a aumentos de
temperatura

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Potência Catalítica

Sem catalisador
Eao

Com catalisador

Ea
Substrato 2 H2O2

G
Produtos
2 H2 O + O 2
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Dados quantitativos para a reação do
Peróxido de Hidrogênio

H2O2 H 2O + 1/2 O2 tetrâmero de 240 kDa

Catalisador Energia de ativação Velocidade ou


(kJ/mol) taxa relativa

Sem Catalisador 75,4 1


50,2 2 x 104
Platina 8,4 3 x 1011
Catalase*
* Catalase ou hidroperoxidase (EC 1.11.1.6) é uma oxidorredutase: enzima intracelular
encontrada na maioria dos organismos vivos, que catalisa a decomposição do peróxido
de hidrogênio segundo a reação:
H2O2 + Fe(III)-E → H2O + O=Fe(IV)-E 15

H O + O=Fe(IV)-E → H O + Fe(III)-E + O
Principais Características Cinéticas das Enzimas

Especificidade

Interação da enzima com um número limitado de


compostos devido à:
configuração complexa da proteína
localização do sítio ativo
configuração estrutural do substrato

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O Sítio Ativo das Enzimas

substrato

Resíduos não essenciais sobre a superfície da enzima


Resíduos estabilizadores da estrutura terciária
Resíduos de reconhecimento e ligação do substrato
Centros catalíticos atuando no substrato: grupos catalíticos
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Algumas Características dos Sítios Ativos

O sítio ativo ocupa uma parte relativamente pequena do


volume total da molécula da enzima.

O sítio tem conformação tridimensional.

O substrato é ligado à enzima através de


múltiplas forças fracas.
Enzima + substrato Complexo Enzimas + produtos
enzima-substrato

O sítio ativo é uma fenda ou fissura na


estrutura da molécula da enzima.

A especificidade da ligação depende do arranjo


precisamente definido dos átomos do sítio ativo. 18
Interações Enzima – Substrato:
Arranjo dos Átomos no Sítio Ativo

Modelo chave – fechadura: o sítio da enzima é sempre


Complementar ao substrato em tamanho, forma e natureza química
Proposto em 1894 por Emil Fisher

Substrato

Centro c
+ ativo a b
Enzima
a c
b
Enzima
19
Interações Enzima – Substrato: Arranjo
dos Átomos no Sítio Ativo

Modelo ajuste induzido


O sítio ativo tem a forma complementar ao
substrato somente após a ligação.

20
Modelo Ajuste Induzido

21
Complementaridade do Estado de Transição

Lehninger
Principios de Bioquímica
Nelson e Cox, 2008

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Especificidade:
Ponto de clivagem da cadeia polipeptídica

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Quimotripsina Tripsina
Mecanismo Proposto para a Ação da
Quimotripsina sobre um Dipeptídeo

https://www.chegg.com/homework-help/questions-and-
answers/diagram-enzyme-active-site-chymotrypsin-shown-
amino-acids-gly-193-ser-195-57-asp-102-form--q15653789
Mecanismo Proposto para a Ação da
Quimotripsina sobre um Dipeptídeo

 O próton é transferido muito rapidamente da Ser


 O grupo hidroxílico da Ser 195 195 para o nitrogênio do anel imidazol da His 57

está ligado ao nitrogênio do  Uma ligação de hidrogênio é formada entre o


imidazol e o substrato
imidazol da His 57 por ligação
 O dipeptídeo se torna disponível para o ataque
de hidrogênio.
nucleofílico do oxigênio da Ser sobre o carbono
da carboxila do substrato 24
H20

 O grupo aminoacil é deslocado


do dipeptídeo: o grupo que  O grupo acila é deslocado da
deixa o complexo é o Ser 195 pela água,
aminoácido C-terminal do regenerando, assim, a enzima
substrato livre
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Principais Características Cinéticas das Enzimas

Para atingir a máxima eficiência e economia, as células


regulam suas reações metabólicas e a síntese de suas
enzimas.

Controladores: pH, concentração do substrato,


concentração de inibidores, cofatores, enzimas.

Controle da Potência Catalítica

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Cofatores Enzimáticos

Cofatores são componentes não protéicos

O cofator pode ser um íon metálico ou


uma molécula orgânica chamada coenzima

Enzima + substrato Complexo Enzimas + produtos


enzima-substrato

Complexo cataliticamente ativo


enzima - cofator: holoenzima

Espécie cataliticamente inativa: apoenzima

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Mecanismo para a catálise enzimática
requerendo uma coenzima ou cofator

S Substrato
Coenzima +
ou íon metálico
C
+ C A
A
Enzima
Apoenzima
S
Complexo Produtos +
Enzima-substrato C
A enzima livre

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Exemplo de Coenzima: NADH

NAD: nicotinamida-adenina-dinucleotídeo

29
Exemplo: Lactato desidrogenase (EC 1.1.1.27)

piruvato + NADH + H+ Lactato + NAD+

O OH

H3C – C – COO- + NADH + H+ CH3 – C – COO- + NAD+

H
Piruvato Lactato

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Efeito do Meio sobre a Atividade Enzimática

 Efeito do pH

31
Por que o pH ótimo da
Quimotripsina é em
torno de 8,0?

32
Efeito do Meio sobre a Atividade Enzimática
 Influência da Temperatura

33
O que é
atividade
enzimática?

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Atividade Enzimática
Atividade

Avaliada pela velocidade da reação que a


enzima catalisa. Dada a especificidade das
enzimas, essa medida é possível, mesmo
em presença de outras proteínas.

Uma Unidade Internacional (1U) é a


quantidade de enzima que catalisa a
formação de 1 mmol de produto por
minuto sob condições definidas.
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Unidades de Enzimas e Atividades Específicas

Atividade Específica

Número de Unidades de enzima por


miligrama de proteína

A concentração de enzima de uma


preparação impura é expressa em
termos de unidades/mL

A atividade específica da preparação


é dada em unidades/mg de proteína
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Exemplo: Efeito da purificação de uma
enzima em sua atividade
 Macerado de células  extrato celular

 Atividade enzimática do extrato: 2,5 U/mL


 Volume de extrato: 200 mL
 Atividade enzimática total na amostra: 500 U

À medida em que se elimina proteínas contaminantes, mantendo-


se a enzima em solução, a atividade específica aumenta.
Por quê?
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Atividade Específica

Número de Unidades de enzima por miligrama de proteína,


considerando a perda entre etapas nula.

 Ex: atividade específica da


enzima purificada:
Pureza

500 U/5 mg  100 U/mg


 atividade específica na etapa
intermediária de purificação:
500 U/100 mg  5 U/mg

 atividade específica no extrato celular:


500 U/200 mg  2,5 U/mg

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Classificação e Nomenclatura

Classificação e nomenclatura produzida pela


International Commission on Enzymes (EC) e adotada
pela International Union of Biochemistry (IUB)

Especificidade a qual distingue uma enzima


da outra na reação química catalisada.

O sistema divide as enzimas em seis classes


principais e conjuntos de subclasses, de
acordo com o tipo de reação catalisada.
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Classes Tipo de Reação Principais sub-classes
= equivalentes redutores
1. Oxidor- Desidrogenases
+ + oxidases, peroxidases,
redutases dioxigenases
Ared Box Aox Bred

C1-transferases
2. Transferases + + glicosil- transferases
aminotransferases
A-B C A B-C fosfo- transferases
esterases
+ + glicosidases
3. Hidrolases peptidases
A-B H2O A-H B-OH amidases

C-C-liases
4. Liases + C-O-liases
C-N-liases
A B A-B C-S-liases

epimerases
5. Isomerases cis-trans-isomerases
transferases intra-
A Iso-A
moleculares

B X=A,G,U,C XDP C-C-ligases


x x C-O-ligases
6. Ligases + ppp + pp
C-N-ligases
A XTP p C-S-ligases
A-B 40
Base Sistemática para Classificação
O nome sistemático da enzima deve identificar:

substrato (s) envolvidos e tipo de reação catalisada


mais o sufixo ase

1 s: substrato + tipo de reação + ase


2 s: substrato A + substrato B + tipo de reação + ase
Número de Classificação 4 algarismos separados por pontos:

1°. dígito - classe


2°. dígito - subclasse
3°. dígito - sub-subclasse
4°. dígito - indica o substrato
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Exemplo: Lactato desidrogenase (EC 1.1.1.27)

1. Classe: Oxirredutase

1. Subclasse: presença de um
grupo C-OH como doador de elétron

1.Sub-subclasse: o aceptor de
eletrons é o NAD+
27. Substrato: lactato
42
Exemplo: lactato desidrogenase (EC 1.1.1.27)
1. Classe: Oxirredutase
1. Subclasse: presença de um grupo C-OH como doador de é
1. Sub-subclasse: o aceptor de eletrons é o NAD+
27. Substrato: lactato

Lactato + NAD+ piruvato + NADH + H+

OH O

CH3 – C – COO- + NAD+ H3C – C – COO- + NADH + H+

H
Lactato Piruvato

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Cinética Enzimática

Ramo da enzimologia que lida com


os fatores que afetam a velocidade
das reações catalisadas.

Concentração da Enzima

pH

Fatores Concentração de ligantes


importantes ( (substrato, inibidores e ativadores)

Força iônica

Temperatura
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Objetivos da Cinética Enzimática

Propor mecanismo cinético da reação

Conhecer o modo pela qual a enzima é


regulada in vivo

Conhecer a identidade dos grupamentos


R dos aminoácidos do sítio ativo
Enzima + substrato Complexo Enzimas + produtos
enzima-substrato
Propor modelo para a reação enzimática

Escrever o modelo proposto e testá-lo


experimentalmente
Fornecer dados para o projeto e operação
otimizada de biorreatores industriais
45
Cinética Enzimática

Aspecto característico das reações enzimáticas:

Saturação com o substrato

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Resumo das ligações que mantêm o enovelamento das proteínas

Leitura recomendada …

NELSON, D.L.; COX, M.M. – Lehninger Principles of Biochemistry,


Fifth edition, W.H. FREEMAN AND COMPANY, NY, 2008

BAILEY, J. E. E OLLIS, D. F. - Biochemical Engineering Fundamentals,


2a edição, Editora McGraw-Hill, New York, 1986 – capítulo 3 (3.2)

SHULER, M. L. E KARGI, F. - Bioprocess Engineering Basic Concepts,


Editora Prentice- Hall International Inc., Englewood Cliffs, 1992 – capítulo 3

SEGEL, I. H. - Biochemical calculations : how to solve mathematical problems


in general biochemistry - J. Wiley, New York, 1976 – capítulo 4

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Potato Quizz

Uma batata crua foi descascada e dividida em 3 partes na forma de


cubos, cada um com 27 g cada, A, B e C.
 A primeira parte, A, foi reservada.
 A segunda, B, foi subdividida em pedaços menores, com 1 g cada.
 A terceira, C, foi cozida em água fervendo por 6 min e depois foi
resfriada à temperatura ambiente.

Cada uma das amostras foi colocada em contato com 30 mL de


solução aquosa de água oxigenada por 30 s, em uma proveta
graduada. Após este período, analisou-se se ocorria a formação de
espuma.
 A amostra A produziu 4 mm de espuma.
 A amostra B produziu 12 mm de espuma.
 A amostra C produziu 0,5 mm de espuma.

O que pode ter ocorrido em cada caso?


Por que são observadas estas diferenças?

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