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ENZIMAS

 Praticamente todas as reaes no corpo so mediadas por enzimas.  Enzimas so protenas catalisadoras que aumentam a velocidade das reaes sem serem, elas prprias, alteradas neste processo.  Entre as muitas reaes biolgicas que so energeticamente possveis, as enzimas canalizam seletivamente os reatantes (denominados substratos) para rotas teis.

ENZIMAS - NOMENCLATURA
Cada enzima recebe dois nomes:
 Nome recomendado = curto e conveniente para o uso no dia-a-dia. Tem sufixo ase unido ao nome do substrato na reao. Ex.: sacarase, urease. Ou uma descrio da ao realizada. Ex.: lactato desidrogenase, adenilato ciclase.  Nome sistemtico = mais completo, identificao da enzima sem ambiguidade. (IUBMB) Unio Internacional de Bioqumica e Biologia Molecular desenvolveu a nomenclatura.

ENZIMAS - PROPRIEDADES
 Stios ativos
 fenda especial

 contm aa cujas cadeias laterais criam uma superfcie tridimensional complementar ao subtrato.  liga-se ao substrato formando um complexo enzima-substrato (ES).  ES convertido em enzima-produto (EP) que depois se dissociase em enzima e produto.

 Eficincia Cintica
 mais de 100 vezes mais rpidas que as reaes no catalisadas.

 capaz de transformar de 100 a 1000 molculas por segundo.  o nmero de molculas de substrato convertidas em produto por molcula de enzima por segundo denominado de turnover.

ENZIMAS - PROPRIEDADES
 Especificidade
 altamente especficas, interagindo com um ou alguns substratos especficos e catalisando somente um tipo de reao qumica.

 Cofatores
 algumas enzimas se associam a um cofator no-protico que necessrio para a atividade enzimtica.  pode ser: ons metlicos (Zn2+, Fe2+); molculas orgnicas (coenzimas) que so frequentemente derivadas de vitaminas.  Holoenzima: refere-se a enzima com seu cofator  Apoenzima: refere-se a poro protica da holoenzima.  na ausncia do cofator apropriado, a apoenzima tipicamente no mostra atividade biolgica.  Grupo Prosttico: uma coenzima fortemente ligada que no se dissocia da enzima (ex.: biotina das carboxilase).

ENZIMAS - PROPRIEDADES
 Regulao
 ativao e inibio de modo que a velocidade de formao do
produto responda s necessidades da clula.

 Localizao dentro da clula


 muitas enzimas esto localizadas em organelas especficas dentro da clula. Esta compartimentalizao serve para isolar o substrato da reao ou produto de outras reaes competitivas, para fornecer um ambiente favorvel para reao e para organizar as milhares de enzimas presentes na clula em rotas teis.

ENZIMAS COMO FUNCIONAM


 Duas perspectivas
 catlise em termos de alteraes de energia que ocorrem durante a reao  descreve como o stio ativo facilita quimicamente a catlise.

 Alteraes de energia que ocorrem durante a reao


 energia livre de ativao: a diferena entre a energia dos reatantes e um intermedirio de alta energia que ocorre durante formao do produto.
intermedirio

ENZIMAS COMO FUNCIONAM


Energia livre de ativao: representa o estado de transio no qual um intermedirio de alta energia formado durante a converso do reatante ao produto. II. Velocidade da reao: para as molculas reagirem, devem conter energia suficiente para superar a barreira de energia do estado de transio. Em geral, quanto menor a energia livre de ativao, mais molculas tm energia suficiente para superar o estado de transio e, assim, mais rpida a velocidade de reao. III. Rota Alternativa de reao: uma enzima permite que uma reao ocorra rapidamente sob condies normais na clula ao oferecer uma rota de reao alternativa com uma menor energia livre de ativao. A enzima no altera as energias livres dos reatantes ou produtos e, assim, no altera o equilbrio da reao. I.

ENZIMAS COMO FUNCIONAM


Qumica do stio ativo:
1. Estabilizao do estado de transio: sitio ativo se liga ao
substrato em uma geometria estruturalmente semelhante ao estado de transio ativado da molcula. Estabilizando o substrato em seu estado de transio, a enzima aumenta grandemente a concentrao do intermedirio reativo que pode ser convertido em produto, e assim acelera a reao.

2.

Visualizao do estado de transio

ENZIMAS COMO FUNCIONAM

Figura: Efeito da Concentrao do substrato na velocidade de reao.

ENZIMAS FATORES QUE AFETAM A VELOCIDADE DE REAO


I. Concentrao do Substrato
  Velocidade mxima Formato hiperblico da curva velocidade vs [substrato].

II. Temperatura
  Aumento da velocidade com a temperatura Diminuio da velocidade com a temperatura

III. pH
   Efeito do pH sobre a ionizao do stio ativo Efeito do pH na desnaturao da enzima O pH timo varia para diferentes enzimas.

ENZIMAS FATORES QUE AFETAM A VELOCIDADE DE REAO


Concentrao do Substrato
 Velocidade mxima (Vmax): o nmero de molculas de substrato convertidas em produto por unidade de tempo. Vmax = saturao pelo substrato de todos os stios de ligao disponveis na enzima. Formato hiperblico da curva velocidade vs [substrato]: maioria das enzimas mostram cinticas de Michaelis-Mentem e uma curva de velocidade de reao, Vo, versus concentrao do substrato [S].

ENZIMAS FATORES QUE AFETAM A VELOCIDADE DE REAO


Temperatura
 Aumento da velocidade com a temperatura: a velocidade de reao aumenta com a temperatura at uma pico de velocidade ser atingido. Diminuio da velocidade com a temperatura: uma elevao adicional da temperatura resulta em uma reduo na velocidade de reao, como resultado da desnaturao da enzima induzida pela temperatura.

ENZIMAS FATORES QUE AFETAM A VELOCIDADE DE REAO


pH
 Efeito do pH sobre a ionizao do stio ativo: a [H+] afeta a V de reao de vrias formas. O processo cataltico geralmente requer que a enzima e o substrato tenham grupos qumicos especficos em um estado ionizado ou no-ionizado, de modo a interagir. Efeito do pH na desnaturao da enzima: extremos de pH tambm podem levar a desnaturao da enzima, pois a estrutura da molcula de protena cataliticamente ativa depende do carter inico das cadeias de aminocidos. O pH timo varia para diferentes enzimas: Ex.: pepsina = pH 2.

ENZIMAS EQUAO DE MICHAELIS-MENTEM


Modelo de reao:


Descreve como a velocidade de reao varia com a concentrao do substrato:

V = velocidade inicial de reao Vmax = Velocidade mxima Km = constante de Michaelis = (K1 + K2)/ K1. [S] = concentrao do substrato

ENZIMAS EQUAO DE MICHAELIS-MENTEM


Consideraes: 1. A [S] muito maior que a concentrao de enzima [E] de modo que a quantidade de substrato ligado enzima em qualquer momento pequena. 2. A [ES] no se altera com o tempo (estado d equilbrio), isto , a velocidade de formao de ES igual a degradao de ES (para E + S e para E + P). 3. Somente as velocidades iniciais de reao so usadas na anlise das reaes enzimticas, isto , a velocidade de reao medida assim que a enzima e substrato so misturados.

ENZIMAS EQUAO DE MICHAELIS-MENTEM

 

A Km caracterstica de uma enzima e um substrato especfico, e reflete a afinidade da enzima para aquele substrato. Km igual a [S] na qual a velocidade de reao igual a metade da Vmax. O Km no varia com a [E]. Km pequeno = afinidade elevada. Km grande = baixa afinidade.

ENZIMAS INIBIO DA ATIVIDADE.




Inibio competitiva:
 ocorre quando o inibidor liga-se REVERSIVELMENTE ao mesmo stio que o substrato normalmente ocuparia e, assim, compete com o substrato por aquele stio ativo. Efeito sobre Vmax: o efeito de um inibidor competitivo revertido aumentando-se [S]. Em uma [S] suficientemente elevada, a velocidade de reao atinge a Vmax observada na ausncia de inibidor. Efeito sobre Km: um inibidor competitivo aumenta o Km. Isso significa que em presena de um inibidor competitivo, mais substrato necessrio para atingir a metade da Vmax.

Exemplo de inibidor competitivo: a succinato desidrogenase catalisa a oxidao do succinato em fumarato. O malonato estruturalmente similar ao substrato, e compete pela ligao no stio ativo da enzima.

ENZIMAS INIBIO DA ATIVIDADE.




Inibio no-competitiva:
 Ocorre quando o inibidor e substrato ligam-se em diferentes stios na enzima. O inibidor no-competitivo pode ligar-se enzima livre ou ao complexo ES, impedindo assim a ocorrncia da reao. Efeito sobre a Vmax: a inibio no-competitiva no pode ser superada pelo aumento da [S]. Assim, estes inibidores diminuem a Vmax da reao. Efeito sobre Km: os inibidores no-competitivos no interferem com a ligao do substrato enzima. Logo, o Km ser o mesmo.

Exemplo de inibidor no-competitivo: o chumbo forma ligaes covalentes com as cadeias laterais sulfidrila da cistena em protenas. A ligao do metal irreversvel e mostra inibio nocompetitiva.

ENZIMAS NO DIAGNSTICO CLNICO.


  

TGP ou ALT e AST ou TGO: abundante no fgado, aumento pode assinalar leso no tecido heptico. CPK, LDH e TGO: so comumente determinadas no diagnstico do infarto do miocrdio. CKMB: aps um infarto agudo do miocrdio, esta isoenzima surge aproximadamente 4 a 8 horas do incio da dor torcica e atinge um pico de atividade aproximadamente 24 horas. BNP: O peptdeo cerebral natriurtico do tipo-B (BNP) um
hormnio produzido no miocrdio (msculo cardaco). um indicador de um aumento nas presses intracardacas, ou seja, dentro das cmaras do corao . A dosagem ideal do BNP dever ser feita aps um jejum de 8 horas. A dosagem do BNP estar aumentada devido a uma variedade de doenas cardacas, como a insuficincia cardaca com disfuno sistlica (diminuio da contrao do corao ) e/ou diastlica (diminuio do relaxamento do corao), fibrilao atrial (arritmia cardaca), doena coronariana aguda (angina instvel ou infarto do miocrdio) ou nas doenas das vlvulas do corao que sejam significativas.