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CROMATOGRAFIA E ESPECTOMETRIA

DE MASSA
Estudo de tcnicas para o mestrado.

Por Flvia Lage

CROMATOGRAFIA

CCD: cromatografia em camada delgada CP: cromatografia em papel CSC: cromatografia supercrtica. (um vapor pressurizado, acima de sua temperatura crtica.) Clssica: a fase mvel arrastada atravs da coluna apenas pela fora da gravidade. CLAE:a cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE), na qual se utilizam fases estacionrias de partculas menores, sendo necessrio o uso de uma bomba de alta presso para a eluio da fase mvel. CG: cromatografia gasosa. A CG utiliza colunas de maior dimetro empacotadas com a fase estacionria CGAR: cromatografia gasosa de alta resoluo. So utilizadas colunas capilares, nas quais a fase estacionria um filme depositado na mesma.

Imagem extrada do artigo de Ana Luiza G. Degani; Quezia B. Cass; Paulo C. Vieira. Qumica nova na escola. 1998. n 7 . Cromatografia um breve ensaio.

Imagem: Lehninger Principios de bioqumica- Terceira Edio- 2002- pgina 101.

CROMATOGRAFIA EM COLUNAS

FINALIDADES DA CROMATOGRAFIA

Purificao de compostos; Fracionamento protico;

Separao dos componentes de uma mistura.

Imagem: Google

TIPOS DE CROMATOGRAFIA EM COLUNA

Cromatografia de troca inica;


Cromatografia de gel filtrao ( tamanho); Cromatografia de afinidade; Cromatografia hidrofbica; HPLC.

CROMATOGRAFIA DE TROCA INICA

Imagem: Lehninger Principios de bioqumica- Terceira Edio- 2002- pgina 101.

Biologia Molecular da Clula. Alberts. Editora Artmed. Quarta Edio. pg 483.

Imagem: Lehninger Principios de bioqumica- Terceira Edio- 2002- pgina 101.

CROMATOGRAFIA DE GEL FILTRAO TAMANHO) (

Biologia Molecular da Clula. Alberts. Editora Artmed. Quarta Edio. pg 483

Imagem: Lehninger Principios de bioqumica- Terceira Edio- 2002- pgina 101.

CROMATOGRAFIA DE AFINIDADE

Biologia Molecular da Clula. Alberts. Editora Artmed. Quarta Edio. pg 483

LIMITAES DAS CROMATOGRAFIAS


CONVENCIONAIS

Heterogenicidade das matrizes ( como a celulose) que propicia um fluxo irregular do solvente pela coluna;

Biologia Molecular da Clula. Alberts. Editora Artmed. Quarta Edio. pg 482

HPLC CROMATOGRAFIA LQUIDA DE ALTA


PERFORMANCE
-

Fase mvel: um solvente (gua, metanol e acetonitrila). Deve dissolver a amostra sem qualquer interao qumica entre ambas. Deve ser pouco viscosa. Deve ter alto grau de pureza para que se possam fazer anlises de alta sensibilidade, pois as impurezas podem interferir na deteco do analito por ultravioleta (UV).

Fase estacionria: - Resinas na forma de esferas pequenas (3 a 10 micrometros de dimetro) - Muito empacotadas . -O fluxo pelas colunas muito lento, a menos que sejam aplicadas altas presses.

As colunas so constitudas de um pedao de tubo em ao inoxidvel normalmente. Slidos rgidos a base de slica so os recheios mais usados atualmente.

A capacidade da coluna determinada comprimento, dimetro e material de recheio.

pelo

seu

Um volume de coluna por minuto ( convencional um volume de coluna por hora). Aps a separao utiliza-se um detector para diferenciar e quantificar as inmeras substncias contidas na amostra analisada.

Imagem: google

Detectores:
Detectores espectrofotomtricos: o seu funcionamento baseia-se na absorbncia de luz por parte da amostra ao passar atravs dela qualquer radiao eletromagntica; normalmente isto ocorre no ultravioleta at o infravermelho, em um dado comprimento de onda. Detectores por ndice de refrao: o segundo detector mais usado na CLAE. Este detector acompanha continuamente a diferena de ndice de refrao entre a fase mvel pura e o efluente que sai da coluna contendo os componentes da amostra. Detectores eletroqumicos: detectam somente as espcies que se oxidam (ou reduzem). Detectores de radioatividade projetados especificamente para detectar solutos radiomarcados conforme so eludos da coluna.

ESPECTOMETRIA DE MASSA

FINALIDADES DA ESPECTOMETRIA DE MASSA

Permite determinar a massa precisa de protenas intactas e de peptdeos derivados de sua clivagem enzimtica ou qumica. Pode ser usada para medir as protenas intactas de um polipeptdio de at dois mil aminocidos.

Biologia Molecular da Clula. Alberts. Editora Artmed. Quarta Edio.

MALDI-TOF ( MATRIX ASSISTED LASER DESORPTION IONIZATION TIME OF FLIGHT SPECTOMETRY)

MALDI-TOF ( MATRIX ASSISTED LASER DESORPTION IONIZATION TIME OF FLIGHT SPECTOMETRY

Breve Reviso de Espectrometria de Massa e da Tcnica PDMS Puc-RJ

COMPONENTES

Na fonte de ons, os componentes de uma amostra so convertidos em ons, pela ao de um agente ionizante, os ons positivos ou negativos so imediatamente acelerados em direo ao analisador de massa. A funo do analisador de massa separar tais ons de acordo com a sua relao massa-carga (m/z). O detector recebe os ons que foram separados pelo analisador, transformando a corrente de ons em sinais eltricos que so processados, armazenados na memria de um computador e mostrados em uma tela.

Breve Reviso de Espectrometria de Massa e da Tcnica PDMS Puc-RJ

FINALIDADES DA ESPECTOMETRIA DE MASSA

Pode ser usada para determinar a seqncia de aminocidos de fragmentos de peptdeos individuais. - Genoma do organismo em questo ainda no foi totalmente seqenciado. -Tambm importante quando as protenas contm modificaes como carboidratos, fosfatos ou grupos metil anexados. Nesse caso os aminocidos precisos que so os stios das modificaes podem ser determinados.

Biologia Molecular da Clula. Alberts. Editora Artmed. Quarta Edio

BIBLIOGRAFIA Ana Luiza G. Degani; Quezia B. Cass; Paulo C. Vieira. Qumica nova na escola. 1998. n 7 . Cromatografia um breve ensaio. Breve Reviso de Espectrometria de Massa e da Tcnica PDMS Puc-RJ http://pfarma.com.br/farmaceutico-industrial/130cromatografia-liquida-de-alta-eficiencia-.html Principios de Bioqumica Lehninger- Terceira Edico. 2002. Biologia Molecular da Clula. Alberts. Editora Artmed. Quarta Edio.