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Aula 6 Bioq.

Modelo tridimensional de uma enzima

I-

Introduo

Sacarose

O2

CO2+H2O +

Energia

Catlise
Catalisadores das reaes dos sistemas biolgicos:

ENZIMAS

1. Viso Geral:
unidades funcionais do metabolismo celular Especificidade e seletividade. Praticamente todas as reaes no corpo so mediadas por enzimas, protenas catalizadoras que aumentam a velocidade das reaes sem serem, elas prprias, alteradas neste processo. Entre as muitas reaes biolgicas que so energicamente possveis, as enzimas canalizam seletivamente os reatantes (denominado substrato) para rotas teis. Assim, as enzimas dirigem todos os eventos metablicos.

Enzimas
Catalisadores
Aumentam a velocidade das reaes

Atuam diminuindo a energia de ativao

2. Nomenclatura:
Existem 3 mtodos para nomenclatura enzimtica: Nome Recomendado: Mais curto e utilizado no dia a dia de quem trabalha com enzimas; Utiliza o sufixo "ase" para caracterizar a enzima. Exs: Urease, Hexoquinase, Peptidase, etc.

Nome Sistemtico:
Mais complexo, nos d informaes precisas sobre a funo metablica da enzima. Ex: ATP-Glicose-Fosfo-Transferase indica que ela catalisa a transferncia de um grupo fosfato do ATP para a glicose.

Ela est colocada na classe 2 da tabela 1 e seu nmero de classificao 2.7.1.1., onde o primeiro dgito (2) indica o nome da classe (transferase); o segundo dgito (7) indica a subclasse (fosfotransferase); o terceiro dgito (1) indica a sub-subclasse (fosfotransferase com um grupo hidroxila como aceptor) e o quarto dgito (1) indica a D-glicose como a substncia receptora do grupo fosfato.
O nome trivial hexocinase ou hexoquinase.

Nome Usual :
Consagrados pelo uso; Exs: Tripsina, Pepsina, Ptialina.

3. Classificao internacional:
N
1

Classe

Tipo de reao catalisada


ou tomos de H)

Oxiredutases Tranferncia de eltrons (ons hidretos Transferases Hidrolases


Reaes de transferncia de grupos
Reaes de hidrlise (transferncia de grupos funcionais da gua) Adio de grupos a ligaes duplas ou formao de duplas ligaes removendo grupos Transferncias de grupos intramolecular para Produzir formas isomricas Formao de ligaes C-C, C-S, C-O e C-N pelas Reaes de condensao acopladas clivagem do ATP

2 3

Liases
Isomerases

Ligases

4. Propriedades:
1. Stios Ativos/ Centro Cataltico
Regio da molcula enzimtica que participa da reao com o substrato Pode possuir componentes no proticos cofatores

Substrato

Stio Ativo

Enzima

Enzimas Ligao da enzima ao substrato

Modelo Chave-Fechadura

Componentes da Reao Enzimtica

Enzimas

E+S

ES

E+P

E - Enzima S - Substrato(s) ES - Complexo Enzima -Substrato P Produto(s)

Enzimas
Componentes da Reao Enzimtica

E+S

ES

P+E

Substrato se liga ao STIO ATIVO da enzima

Enzimas - Via Metablica

Substrato inicial

Enzimas
Substratos
Complexo ES (Enzima-Substrato) Ligao Stio Ativo Chave-fechadura Incaixe induzido Liberao do Produto + Enzima inalterada

Ligao da Enzima ao Substrato

Enzimas

2 modelos propostos: Chave-Fechadura


Encaixe Induzido

Modelo chave fechadura para a enzima

Modelo do Ajuste Induzido

2. Eficincia Cataltica
Produto

Enzima

Complexo Enzima-substrato

Nmero de renovao (Turnover)

Eficincia Cataltica
A maioria das reaes catalisadas pelas enzimas so altamente eficientes, ocorrendo 103 a 108 vezes mais rpido do que as no catalisadas. Cada molcula de enzima capaz de transformar 100 a 1000 molculas de substrato em produto por segundo. O nmero de molculas de substrato

convertidas em produto por segundo denominado nmero


de Turnover.

3. Especificidade

Substrato

Enzima

Especificidade
As enzimas so altamente especficas, interagindo com

alguns substratos especficos e catalisando um tipo de


reao qumica.

4. Co-fatores:
Produto

Enzima

Complexo Enzima-substrato

ons Metlicos: ZN2+ ou Fe2+


Coenzimas: Molculas Orgnicas (Vitaminas)

4) Cofatores
Muitas enzimas necessitam da associao com outras molculas ou

ons para exercer seu papel cataltico. Esses componentes da reao


enzimtica so genericamente chamados cofatores. Os cofatores podem ser on metlicos ou molculas orgnicas, no proticas, de complexidade variada, que recebem o nome de

coenzimas.
As coenzimas so derivadas de vitaminas. Algumas enzimas
requerem ambos.

a)

ons Metlicos

As enzimas que requerem ons metalicos so algumas vezes


denominadas Metaloenzimas.

b)

Coenzimas

5. Localizao intracelular:
Mitocndria
Ciclo do c. Ctrico Oxidao de c. Graxos Descarboxilao do piruvato

Ncleo Sntese de DNA e RNA

Citosol
Gliclise Ciclo das hexoses Sntese de c. Graxos

Lisossoma
Degradao de macromolculas complexas

6. Fatores que afetam a velocidade da reao qumica:

3. pH

2. Temperatura

1. Concentrao do substrato

1. Concentrao do substrato

Velocidade da reao(Vo)

Vmx

0 0 [Substrato]

Velocidade de uma reao (v) o n de Molculas de substrato convertidas em produto por unidade de tempo.
V= (Mol/min)

Concentrao do substrato

A velocidade de uma reao (v) o nmero de molcula de substrato convertidas em produto por unidade de tempo, e geralmente expresso como micromoles de produto formados por minuto. A velocidade de uma reao catalisada por enzimas aumenta conforme a concentrao do substrato at atingir uma velocidade mxima (Vmax.). A obteno de um plat na velocidade de reao em altas concentraes

de substrato reflete a saturao pelo substrato de todos os stios de


ligao disponveis na enzima.

2. Temperatura
Inativao Trmica da enzima

Velocidade da reao(Vo)

Aumento do n de molculas com energia para atravessar barreira de energia e formar os produtos da reao.

10

20

30

40

50

60

Temperatura (C)

pH
Pepsina Velocidade da reao(Vo) Tripsina

10

12

14

pH

7.Cintica Enzimtica:

Modelo de reao
Constante de Michaelis

Michaelis e Menten

Km= (K-1+K2)/K1

Modelo Simples
K1 E+S K-1 K2 ES E + P

A enzima combina-se reversivelmente a seu substrato para formar o complexo ES que subseqentemente degradase em produto, regenerando a enzima livre.

Cintica Enzimtica
E+S ES E+P

A velocidade de uma reao depende das concentraes de E e S.

Efeito da concentrao do substrato

Equao de Michaelis-Menten

Catlise com mecanismo de Michaelis-Mentem


2,0

Vo (Velocidade Inicial)

1,5 1,0 0,5 0,0 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 Vmx = 2 Km = 1,5

[S] (Concentrao de Substrato)

Km: corresponde a concentrao do substrato, quando a


Km medida da afinidade da enzima pelo substrato Quanto < Km, > a afinidade enzima/substrato V0 = 1 V mx 2

Equao de Michaelis-Menten

V0 = Vmax[S] / Km + [S]
Velocidade da reao(Vo) Vmx

Vmx
2

0
0 [Substrato]

Km

Caractersticas da cintica de Michaelis Menten

Caractersticas do Km (constantes de velocidade)


A constante de Michaelis (Km) caracterstica de uma enzima e um substrato especfico e reflete a afinidade que a enzima tem pelo substrato. O Km no varia com a concentrao da enzima.
Km pequeno:

Afinidade da enzima pelo substrato Baixa [substrato] capaz de saturar a enzima em 50% Atinge vmx Afinidade da enzima pelo substrato Alta [substrato] para saturar a enzima em 50%

Km grande:

8. Inibio Enzimtica:
Quanto ao Tipo:
Inespecfica - Inibidor a atividade de todas as enzimas
Ex. agentes desnaturantes

Especfica - Inibidor a atividade de uma nica enzima ou de um grupo restrito de enzimas


Irreversvel Reversvel

Competitivo
No-Competitivo

a- Inibio enzimtica irreversvel


Inibidor se combina com um grupo funcional
(stio ativo) da enzima Inibidor se liga a enzima formando um complexo ESTVEL Forma-se uma ligao COVALENTE entre a enzima e o substrato

Inibio Enzimtica Irreversvel


Aspirina Acetilsalicilato Ativa
Inibida

O COO- C O CH3

Salicilato

C
O H

COOCH3 +

OH

Ciclo Oxigenase

Ciclo Oxigenase

Ciclo-oxigenase

cido Araquidnico

Prostaglandinas
Processos Fisiolgicos Ex.:sensao de dor

Inibidores Reversveis
Os inibidores reversveis se dividem em dois grupos: os competitivos e no competitivos Os competitivos ocorrem quando o inibidor liga-se irreversvelmente ao mesmo stio que o substrato normalmente ocuparia e, assim, compete com o substrato

por aquele stio.


Os no competitivos ocorrem quando o inibidor e o substrato ligam-se em diferentes stios na enzima.

1- Inibio enzimtica reversvel competitiva

Ocorre quando o inibidor liga-se reversivelmente ao mesmo stio ativo que o substrato.

Inibio enzimtica reversvel competitiva


EFEITOS DO INIBIDOR COMPETITIVO:
Sobre a Vmax: o efeito revertido pelo aumento na concentrao do substrato. Sobre Km: aumenta o Km, pois mais substrato necessrio para atingir a Vmax. Sobre a curva de Lineweaver-Burke: Vmax no alterada e Km aumentado.

Inibio Competitiva
Exemplo Antibacteriano

NH2
H2N
Sulfanilamide

SO2

H2N

COOH
P aminobenzoic acid

Sulfanilamide

PABA
Diidropteroato Sintetase bacteriano

cido Flico
Essencial para o crescimento Bacteriano.

Inibio Competitiva
Intoxicao por metanol

URINA

Metanol

lcool Desidrogenase

Formaldedo

Administrao de Etanol

2- Inibio enzimtica reversvel no-competitiva

Ocorre quando o substrato e o inibidos se ligam em locais diferentes sobre a enzima. O inibidor pode ligar-se tanto enzima livre quanto ao complexo ES.

Inibio enzimtica reversvel no competitiva


EFEITOS DO INIBIDOR NO-COMPETITIVO:

Sobre a Vmax: o efeito no pode ser revertido pelo aumento na concentrao do substrato e assim, diminuem a Vmax. Sobre Km: no interferem na ligao do substrato. A enzima mostra o mesmo Km na presena ou ausncia do inibidor. Sobre a curva de Lineweaver-Burke: Vmax diminui e Km no alterado.

Inibidores enzimticos como drogas


No mnimo a metade das dez drogas mais comumente prescritas nos Por exemplo, os antibiticos lactmicos amplamente prescritos, EUA agem como inibidores de enzimas.

como a penicilina e amoxacilina, atuam inibindo uma ou mais enzimas da sntese da parede celular bacteriana. As drogas podem agir inibindo reaes extracelulares. Isto ilustrado

pelos inibidores da enzima conversora da angiotensina


(ECA), que diminuem a presso arterial bloqueando a enzima que cliva
a angiotensina I para formar o potente vasoconstritor angiotensina II.

Estas drogas, que incluem o captopril, enalapril e lisinopril,


causam vasodilatao e uma resultante reduo na presso arterial.

9. Regulao Enzimtica
Clivagem Proteoltica

Pr-Enzimas Zimognio
Clivagem Proteoltica

ENZIMA ATIVA
Ex.: Pepsinognio que origina a pepsina na cavidade gstrica,
por remoo De 42 resduos de aminocidos sob ao de ons H+

ZIMOGNIO

Certas enzimas, cujo local de ao extracelular (plasma, trato digestivo), so sintetizadas na forma de precursores inativos, chamados zimognio. Exemplo: Zimognio: pepsina e quimiotripsina

So sintetizadas nas clulas na forma de pepsinognio (pepsina


na cavidade gstrica), tripsinognio, quimiotripsinognio, origem pancreatica, so transformadas em tripsina e

quimiotripsina no intestino delgado sob enzimas hidroliticas

A regulao da velocidade de reao das enzimas


essencial para o organismo coordenar seus inmeros processos metablicos. [subst.] velocidade de reao [subst.] normal

Enzimas com funes reguladoras especializadas: Efetores alostricos Modificao covalente

ALOSTRICAS
As enzimas reguladoras por modificao no covalentes so chamadas alostricas. As enzimas alostricas so reguladas por molculas denominadas efetores (tambm chamados de modificadores ou moduladores) que se ligam de modo no covalente a stio diferente do stio ativo.

Estes efetores ou moduladores podem ser negativos: que inibem a


atividade enzimtica ou positivo que aumentam a atividade enz.

10. Isoenzimas
So enzimas que apresentam multiplas formas.
Elas so codificadas por genes diferentes, asim diferem na composio de aminocidos.

Exemplo : a lactato desidrogenase ocorre como cinco isozimas diferentes.

Isoenzimas
CREATINA QUINASE
ATP/ADP

Creatina Dmero subunidades B e M


Composio BB MB MM Tipo

Fosfocreatina 3 isoenzimas

Localizao Crebro
Corao Msculo Esqueltico

CK1/CPK1
CK2/CPK2 CK3/CPK3

Aparecimento de CPK2 no sangue

Infarto do miocrdio

INDUO (aumento) OU REPRESSO (diminuio) DA SNTESE DE ENZIMAS


As clulas podem regular a quantidade de enzima presente alterando a velocidade da sntese e da enzima.

IMPORTNCIA PRTICA

1. Desordens genticas hereditrias


Albinismo Galactosemia Fenilcetonria

Enzimas no Diagnstico Clnico

Capilar

do nvel plasmtico de enzimas intracelulares devido leso celular

Enzimas

Renovao celular Normal

Clula doente ou exposta ao trauma

2. Enzimas na Clnica
Doenas cardacas(IAM) AST , LD, CK Doenas hepticas (Hepatites): ALT, GGT, LD Pancreatite: lipase, amilase Caxumba: amilase Doenas sseas: fosfatase alcalina Cncer de prstata: fosfatase cida, PSA Hemlise: LDH

3. Na Indstria qumica, preparo de alimentos, agricultura.

Caracterizao de variedades de milho, feijo, soja, etc,


atravs de isoenzimas. Transformao industrial de dissacardeos em frutose pelo frutose isomerase Uso em Biologia e Gentica Molecular - Engenharia Gentica . Fabricao de pes, vinhos, cervejas, produtos fermentados.

Roteiro de estudo
Conceitue enzimas: Classifique as enzimas de acordo com as reaes que elas catalisam: Qual a classe de enzimas responsvel por catalisar reaes de transferncia de grupos dentro das molculas com formao de ismeros? Classifique e exemplifique cofatores enzimticos: Definir stio cataltico ou stio ativo: Explique e demonstre graficamente como uma enzima aumenta a velocidade de uma reao: Em uma reao enzimtica o que o catalisador no pode alterar? Quais fatores podem influenciar a velocidade de uma reao enzimtica? Explique: Como feito o doseamento quantitativo das enzimas? A) Classifique e diferencie os tipos de inibio enzimtica: B) Exemplifique tipos de inibidores enzimticos na teraputica: Classifique e conceitue os tipos de regulao enzimtica: As enzimas X e Y catalisam a mesma reao em situaes diferentes, sendo que a enzima Y s atua em altas concentraes do substrato. Explique: Km de uma enzima sempre: (A) a metade da velocidade mxima. (B) a concentrao de substrato fisiolgica normal. (C) a concentrao de substrato que resulta na metade da velocidade mxima. (D) a concentrao de substrato quando a velocidade mxima. Marque V ou F: ( ) As enzimas alostricas possuem stos para ligao do substrato e do modulador. ( ) Na inibio no competitiva, o inibidor liga-se irreversivelmente a enzima em local diferente do stio ativo. ( ) Os catalisadores enzimticos aumentam a velocidade das reaes qumicas, aumentando a concentrao dos produtos formados. ( ) Quanto maior a afinidade da enzima pelo seu substrato menor o seu km. ( ) A parte protica de uma enzima tambm denominada apoenzima. ( ) O grupo prosttico de uma enzima pode ser um ons ou uma coenzima. ( ) Holoenzima uma enzima sem atividade cataltica. PESQUISAR: Enzimas mais comuns usadas no preparo de alimentos