PROMOCIN DEL CRECIMIENTO EN PLANTAS POR BACTERIAS DE LA RIZOSFERA

Gina Holguin, Yoav Bashan, Esther Puente, Angel Carrillo, Gabor Bethlenfalvay, Adriana Rojas, Patricia Vzquez, Gerardo Toledo, Macario Bacilio Jimnez, Bernard R. Glick, Luz Gonzlez de Bashan, Vladimir Lebsky, Manuel Moreno y Juan Pablo Hernndez.

Vsquez Cortes Oscar Geovanny

Las bacterias promotoras de crecimiento en plantas (BPCP) benefician a stas a travs de diferentes mecanismos, por ejemplo: Fijacin de N2 (reduccin de N2 a NH3) Produccin de fitohormonas, siderforos, solubilizacin de fosfato Sntesis de enzimas que alteran los niveles de fitohormonas y biocontrol de fitopatgenos

Versatilidad metablica Su capacidad para fijar Nitrgeno Su produccin de fitohormonas Sus clulas tipo quistes, Capacidad para adherirse a cualquier sistema de races

Azospirillum brasilense

TALA INDISCRIMINADA

No propicios (ocasionan desertificacin)

El suelo se ocupa para actividades agrcolas Pachycereus pringlei (Cardn)

Problemas de salud

Inoculacin Mezquite maduro(MM) Mezquite joven (MJ) Palo fierro maduro (PFM) Terracera (T),

Finalidad : prevenir la erosin y la contaminacin reforestando zonas desertificadas

Plntulas inoculadas y cultivadas en T mostraron incrementos en el peso seco y longitud de la raz a pesar de que la concentracin de carbono (g kg- 1) y de nitrgeno (g kg-1) fue mayor en MM que en MJ, PFM y T

En cuanto a las propiedades del suelo resembrado con cardn, se observ un incremento en la concentracin de fsforo y nitrgeno al compararse con el suelo no resembrado, debido probablemente a la exudacin radicular y a la actividad metablica de la rizosfera asociada. En reas no resembradas con cardn se observ una prdida de 500 mha de suelo (tasa de erosin de suelo muy alta) mientras que en las resembradas se acumularon 50 m ha

Inoculadas Microcoleus Avicennia germinans

La cianobacteria se cultiv sola en las mismas condiciones que los tratamientos con plantas

Experimentos con N demostraron que las plntulas de mangle asimilan el nitrgeno fijado por Microcoleus sp., sobre todo en las races. Al medir la concentracin de nitrgeno total en la plntula se observ que fue mayor en plntulas inoculadas que en las no inoculadas

interaccin sinrgica entre la cianobacteria y las plntulas de mangle, lo que se sugiere la posibilidad de utilizarla como inoculante para reforestacin de manglares daados o para la formacin de nuevas reas de manglar.

Experimentos realizados con cultivos mixtos de bacterias han revelado interacciones sinrgicas benficas entre los componentes del cultivo; por ejemplo, la bacteria fijadora de nitrgeno Phyllobacterium sp. Aislada de las races del mangle, increment la fijacin de nitrgeno en 200% cuando creci en cultivo mixto con B. licheniformis, bacteria solubilizadora de fosfato. As mismo, la solubilizacin de fosfato por B. licheniformis se increment cuando creci en cultivo mixto con Phyllobacterium sp.

 Conocer el potencial de Azospirillum para colonizar y

promover el crecimiento de plntulas de mangle y reforestar zonas daadas de manglar, experimentos de inoculacin de plntulas de mangle con dos cepas halotolerantes de Azospirillum: A. brasilense Cd y A. halopraeferens.
Ambas cepas colonizaron las races y mantuvieron sus

niveles poblacionales relativamente estables por un perodo de cinco das.

 El mecanismo de colonizacin de las dos cepas fue

diferente; A. halopraeferens produjo una sustancia mucilaginosa que cubri las races y las clulas bacterianas, mientras que A. brasilense gener agregados unidos entre s por material fibrilar.
La capacidad de Azospirillum para colonizar y promover

el crecimiento de plantas que crecen en ambientes marinos tales como el mangle y la Salicornia, demuestra que esta bacteria no presenta especificidad hacia alguna variedad o tipo de planta hospedera.

MANIPULACIN GENTICA DE Azospirillum

El etileno es una hormona vegetal que interviene en

la germinacin, iniciacin de la raz, crecimiento de tallo y raz, floracin, maduracin de la fruta, senescencia, en la respuesta de la planta al estrs ambiental y al ataque de patgenos.
Los niveles de etileno en las plantas pueden

incrementarse como respuesta al estrs.

 Sin embargo, altas concentraciones de etileno en la

planta pueden inhibir su crecimiento, provocar marchitamiento e inducir senescencia y muerte prematura.
En el suelo existen bacterias que pueden disminuir la

concentracin de etileno en la planta, degradando el precursor del etileno, 1-aminociclopropano-1- carboxilato (ACC).
Deaminasa de ACC, enzima microbiana no presente en

tejidos vegetales, que rompe la molcula de ACC y genera a-cetobutirato.

 Colonizan las races y utilizan como fuente de carbono y

nitrgeno al ACC, presente tanto en la parte interna de las races como en exudados radiculares. provoca que disminuya la concentracin interna de ACC, lo que reduce a su vez la concentracin de etileno.
Azospirillum sintetiza altas concentraciones de cido

indolactico (AIA), el cual induce la sntesis de etileno que estimula la actividad de la enzima sintetasa de ACC.

 Como hiptesis se propuso que la transformacin

gentica de A. brasilense con el gen de la deaminasa de ACC podra incrementar la capacidad de sta para bajar concentraciones elevadas de etileno.

El gen de la deaminasa de ACC o acdS, de la bacteria

Enterobacter cloacae y se clon en el vector pRK415; los exconjugantes de A. brasilense no mostraron actividad de la deaminasa de ACC a pesar de que se comprob que las bacterias contenan el gen.

 Para resolver el problema de la falta de expresin del

gen acdS se decidi cortar la regin promotora y substituirla por otra que Azospirillum pudiera reconocer.
Por tanto, se crearon dos quimeras:

1) Con el gen acdS bajo el control del promotor de la

lactosa (lac)

Figura 6. Clonacin del gen estructural de la deaminasa de ACC (acdS) bajo el control de la regin promotora lac. La regin promotora silvestre se elimin con la enzima de restriccin EcoRV y posteriormente se clon el gen en el plsmido pRK415 de amplio rango hospedero (Holguin y Glick, 2001).

 2) Con acdS fusionado a la regin promotora del gen de

resistencia a la tetraciclina (Tetr).

Figura 7. Fusin del gen estructural de la deaminasa de ACC (acdS) con la regin promotora del gen de resistencia a la tetraciclina (Tetr), por medio de la tcnica de extensin por sobrelapamiento con PCR (Holguin y Glick, 2003).

 La

actividad de la deaminasa de ACC de los exconjugantes de Azospirillum (transformados con el gen acdS bajo el control de la regin promotora lac) fue similar a la del control (Enterobacter cloacae UW4).

La

inoculacin de plntulas de canola (Brassica campestris cv. Reward) con A. brasilense Cd/pRKLACC y E. coli transformada con acdS promovi la elongacin de la raz.

Figura 9. Longitud de la raz de plntulas de canola inoculadas con brasilense Cd, A. brasilense Cd/pRKLACC, Escherichia coli DH5/pRKACC (acdS bajo el control de su regin promotora silvestre), E. coli DH5/pRKLACC y Enterobacter cloacae CAL2, utilizada como control positivo (Holguin y Glick, 2001).

La inoculacin de plantas con BPCP que presentan

actividad de la deaminasa de ACC suele aminorar el efecto negativo que pudieran tener diferentes tipos de estrs ambiental sobre las plantas. La capacidad de Azospirillum para producir deaminasa de ACC, aunada a sus otras caractersticas inherentes, pudiera hacer de esta bacteria una herramienta muy til para la agricultura.

 Azospirillum tambin promueve el crecimiento de plantas

microscpicas unicelulares como la microalga de agua dulce Chlorella vulgaris, utilizada en tratamientos de aguas residuales para la remocin de compuestos nitrogenados y fosfatados, as como de metales pesados.

 Provoc un incremento en el crecimiento y en la

produccin de pigmentos de Ch. vulgaris, esto a la vez promovi la remocin de amonio y fsforo por la microalga.