Departamento de Qumica Analtica y Tecnologa de Alimentos

QUIMICA ANALITICA APLICADA

Tema 14. Anlisis farmacutico, clinico y toxicologico Identificacin, caracterizacin y purificacin de principios activos. Tcnicas analticas para la separacin de productos activos y sus metabolitos

ANLISIS FARMACUTICO
FARMACO Un frmaco es cualquier sustancia que esta destinada para el diagnostico, curacin, mitigacin, tratamiento o prevencin de una enfermedad o para alterar la estructura o funcin del cuerpo. EXCIPIENTE Aquella materia que, incluida en las formas galnicas, se aade a las sustancias medicinales o a sus asociaciones para servirles de vehculo, posibilitar su preparacin y estabilidad, modificar sus propiedades organolpticas o determinar las propiedades fisicoqumicas del medicamento y su biodisponibilidad. FORMA FARMACUTICA Disposicin individualizada a la que se adatan las sustancias medicinales y los excipientes para constituir un medicamento; tambin se denominan formas galnicas o formas de dosificacin. MEDICAMENTO Sustancia medicinal y sus asociaciones o combinaciones destinadas a la utilizacin en las personas o en los animales, que se presente dotada de propiedades para prevenir, diagnosticar, tratar, aliviar o curar enfermedades o dolencias, o para afectar a funciones corporales o al estado mental.

ANLISIS FARMACUTICO
La Qumica Analtica puede participar en diferentes facetas en la investigacin, desarrollo y aplicacin de productos farmacolgicos. En este esquema se puede representar las diferentes etapas
ANLISIS FARMACOLGICO Y CLNICO

DESCRUBIMIENTO

Aislamiento de un frmaco a partir de un producto natural *Rendimiento de la reaccin de aislamiento *Propiedades fsico qumicas del frmaco: Sntesis de un nuevo frmaco *Pureza de los materiales de partida. *Rendimiento de la reaccin de sntesis. Subproductos *Propiedades fsico -qumicas Test Farmacolgico DESARROLLO Test del frmaco in vitro y en animales de laboratorio Test del frmaco en humanos: (fase I) CLINICA Estudios de La Fase II en Humanos Farmacodinamica COMERCIALIZACIN Y EMPLEO

Formulacin del compuesto(inyectables, jarabes, pomadas, comprimidos..) Control de calidad del producto Empleo del frmaco Monotorizacin teraputica. Sobredosis Drogas de abuso Anlisis forense toxicolgico Dopaje

MEDICAMENTOS Y EXCIPIENTES CLASIFICACIN FARMACOLGICA Aparato Digestivo y Metabolismo Sangre y Organos Hematopoyeticos Aparato Cardiovascular Dermatologicos Preparados Genitourinarios y Hormonas Sexuales Preparados Hormonales Sistemicos, Excluidas Hormonas Sexuales Antiinfecciosos Via General Antineoplasicos y Agentes Inmunomoduladores Aparato Locomotor Sistema Nervioso Central Antiparasitarios, Insecticidas y Repelentes Aparato Respiratorio Organos de Los Sentidos Varios
Aceite de cacahuete Aceite de ricino Aceite de soja cido benzoico y benzoatos cido brico, sus sales y steres cido saliclico cido srbico y sus sales Alcohol benclico Aprotinina bovina Aspartamo zucar invertido Bronopol Butil hidroxianisol Butil hidroxitolueno Clorobutanol Cloruro de benzalconio Etanol Fenilalanina Formaldehdo Fructosa Galactosa Glicerol Lactosa Lanolina Polioles Potasio Propilenglicol, Sacarosa Sodio Sorbitol Sulfitos y metabisulfitos Tartrazina Urea

Compuestos mercuriales Manitol orgnicos Glucosa

EXCIPIENTES

ALGUNAS FORMAS FARMACUTICAS Cpsula. Envoltura membranosa soluble, que contiene una dosis medicamentosa. Colirio. Medicamento de accin local para el tratamiento de enfermedades oculares y de los prpados. Comprimido. Preparacin farmacutica en forma de pastilla, en la que la sustancia medicinal est conformada por fuerte presin. Crema-gel. Preparacin teraputica en forma de coloide, caracterizada por una fuerte viscosidad. Emulsin. Lquido de aspecto lechoso que mantiene en suspensin una substancia insoluble (aceite o grasa) finamente dividida en un cuerpo viscoso emulsionante. Inyectable. Substancia teraputica lquida que se introduce bajo presin y por medio de un instrumento adecuado, en una parte, rgano o cavidad del cuerpo. Jarabe. Preparacin azucarada que puede tener disueltas substancias medicamentosas. Pomada. Frmula medicinal para uso externo, blanda, compuesta por una o varias drogas activas, incorporadas a una grasa animal o vaselina. Suspensin. Estado en el que se encuentran dentro de un lquido las partculas de otra substancia medicamentosa no soluble en l y que no se depositan en el fondo.

MEDICAMENTOS Y EXCIPIENTES

METABOLISMO DE LAS DROGAS

La forma de introduccin de la droga en el sistema biolgico, es decir, la ruta de administracin, dictamina el conjunto de condiciones digestivas y enzimticas a la cual la droga est sujeta y, por lo tanto, el destino metablico y su distribucin en los distintos tejidos. Las formas ms comunes de introduccin de las drogas son: -Ingestin oral -Inyeccin intravenosa e intramuscular - Aplicacin drmica. Una vez introducida en el sistema biolgico, la droga est sujeta a procesos de: a) absorcin, b) distribucin c)metabolizacin y e) excrecin Absorcin : Para que un medicamento o droga pueda ejercer su accin es necesario que sea absorbido Distribucin : El farmaco se distribuye en los tejidos para llegar al sitio donde se espera que acte. La sangre distribuye la droga a los distintos tejidos. La proporcin tejido/sangre del farmaco depende de la velocidad de perfusin sangunea hacia estos tejidos y de sus caractersticas como, acidez, solubilidad y tamao. Metabolismo: La gran mayora de los frmacos se modifican metablicamente en el organismo. Su modificacin conduce a la formacin de metabolitos Excrecion : Las drogas absorbidas y sus metabolitos se excretan a travs de la orina, y de la bilis, que se genera en el hgado y se vierte en el intestino. Las drogas o metabolitos hidroflicos se excretan en la bilis. Las drogas lipoflicas y sus metabolitos tienden a retornar a la sangre y como la velocidad de perfusin sangunea hacia el rin es alta son excretadas en la orina en su forma ionizada

CARACTERSTICAS DE LAS MUESTRAS BIOLGICAS

Las muestras biolgicas son muy complejas, en ellas el principio activo est presente en muy baja concentracin, tambin estn presentes los metabolitos y adems puede haber compuestos interferentes. Tipos de muestras biologicas Tipo Muestra Sangre, plasma y suero La sangre es un fluido complejo que contiene solubilizadas protenas , sales, grasas disueltas y clulas suspendidas. El constituyente mayoritario, las clulas rojas (eritrocitos) pueden separarse por centrifugacin dando lugar a un fluido claro denominado plasma. Si la sangre permanece sin aadirle un agente anticoagulante, los eritrocitos coagulan y el fluido resultante, suero, puede ser decantado. Por lo tanto, el suero y el plasma pueden considerarse muy similares. Orina Tiene la ventaja de no contener protenas, lo que hace posible la extraccin directa con un disolvente orgnico y el tiempo de vida de las drogas es mayor y contiene alta concentracin de metabolitos fcilmente detectables

Lquido Fluido cerebral, Lgrimas, Sudor, Orina, Bilis, Saliva Mezclas Slidos Plasma, Suero y Sangre Heces fecales, cerebro,corazn, rin, pulmn, lengua, msculo y hueso

El anlisis de las drogas se lleva a cabo en diferentes muestras, y de acuerdo a la naturaleza de las mismas se pueden distinguir dos tipos: -Medicamentos : Donde el principio activo se encuentra en minoria frente a los excipientes -Muestras biolgicas: donde losanalitos y sus metabolitos que se suelen encontrar en cantidades traza en comparacin con el resto de los compuestos. PRETRATAMIENTOS EN MEDICAMENTOS En todos estos tipos de medicamentos, los analitos son componentes minoritarios que se encuentran junto a otros componentes complejos mayoritarios, por lo que, generalmente, es necesario llevar a cabo un pretratamiento de la muestra. ste incluye, a veces, no slo una separacin de los compuestos mayoritarios que puedan suponer una interferencia, sino tambin una etapa de concentracin antes de la etapa de anlisis, que permitir la cuantificacin de dicha droga.. Esta primera etapa suele ser tediosa y lenta y se emplean dos tcnicas de extraccin : a)Extraccin lquido-lquido Las drogas se separan de la muestra mediante el reparto entre dos solventes inmiscibles, a menudo mediante un ajuste de pH para controlar la ionizacin y una re-extraccin a diferente pH para mejorar la selectividad y recuperacin b)Extraccin slido-lquido. El principio de la extraccin en fase slida es similar a la extraccin lquido-lquido e implica la particin de los compuestos entre una fase slida y una lquida. El compuesto ha extraer debe tener una mayor afinidad por la fase slida que el resto de la matriz y ser fcilmente eluido posteriormente con un pequeo volumen de disolvente

PRETRATAMIENTO DE LA MUESTRA

PRETRATAMIENTO DE MUESTRAS BIOLOGICAS

Los principios activos en muestras biolgicas se pueden encontrar como tal, o como metabolitos. Muchas drogas y sus metabolitos pueden tener gran afinidad por las protenas, mientras que la mayora de conjugados de estas drogas son altamente hidroflicos y, por lo tanto, difcil de extraer con disolventes orgnicos El pretratamiento de la muestra incluye tres pasos: la hidrlisis de las drogas conjugadas, la ruptura de unin con protenas y, finalmente, la extraccin Hidrlisis cida y enzimtica de los conjugados de droga La hidrlisis convencional se lleva a cabo con HCl bajo condiciones rigurosas que, a veces, causan la descomposicin de otos compuestos generando una mezcla turbia. Tambin es posible realizar la hidrlisis utilizando enzimas. Separacin de las protenas (eliminacin de las protenas) Si los analitos tienen una elevada capacidad para unirse a las protenas, el protocolo adoptado para eliminar dichas protenas debe ser capaz de liberar estos analitos de las protenas de manera que no se puedan perder. La eliminacin de las protenas puede llevarse a cabo mediante el uso de: a)Temperaturas extremas, fuerzas inicas o condiciones de pH b) Agentes precipitantes orgnicos y c) Enzimas proteolticos. Extraccin Los procedimientos de extraccin utilizados dependern del fin analtico y del tipo de tcnica analtica seleccionada Los dos procedimientos de extraccin utilizados son la extraccin lquido-lquido o extraccin slido-lquido.

PRETRATAMIENTO DE MUESTRAS BIOLOGICAS

EXTRACCIN LQUIDO-LQUIDO Drogas solubles en disolventes orgnicos Se elige un disolvente o mezcla de disolventes teniendo en cuenta propiedades tales como densidad, volatilidad, polaridad, selectividad y solubilidad de las drogas Drogas solubles en agua La dificultad de extraer estas drogas y sus metabolitos con disolventes orgnicos se solventa con los siguientes procedimientos: Extraccin slido-lquido de muestras liofilizadas. Primero se aada cido actico a una muestra de orina y despus se somete a un proceso de liofilizacin. Se continua realizando una extraccin con metanol, consiguiendo extraer drogas bsicas, neutras y cidas, siendo necesario posteriormente un mtodo cromatogrfico Extraccin de par-inico. Otra posibilidad es la formacin de un par inico. Iones de carga opuesta tienden a asociarse para formar una especie neutra llamada par inico Efecto Salting-Out: consiste en aadir una alta concentracin de electrolitos para disminuir la actividad del agua; disminuyendo la capacidad de formar hidratos, disminuyendo su solubilidad y facilitando la extraccin mediante el uso de disolventes polares

PRETRATAMIENTO DE MUESTRAS BIOLOGICAS

EXTRACCIN SLIDO-LQUIDO Presenta las ventajas : a)Necesidad de menos volumen de fase orgnica. b)No se forman emulsiones.c)Ms rpida. y d)Posibilidad de automatizacin Adsorbentes utilizados como fase slida Como materiales adsorbentes se puede utilizar carbn vegetal, gel de slice, fluorisil, resinas polimricas derivadas del poliestireno, almina, etc. Hay otro grupo de fases slidas que utilizan fases ligadas, constituidas por un soporte de slice con grupos silanoles en la superficie que forman enlaces covalentes con los compuestos orgnicos. Configuracin del sistema de extraccin La fase enlazada se empaqueta en pequeas columnas o en pequeas jeringuillas realizadas en polipropileno mediante dos discos fritados del mismo material. El tiempo de extraccin se reduce al extraer simultneamente varias muestras introduciendo las columnas en un colector de vaco. Desarrollo de la extraccin 1.- Activacin del adsorbente 2.- Eliminacin del exceso de disolvente orgnico 3.- Adicin de la muestra (0.1 1 mL) 4.- Eliminar interferencias 5.- Elucin de la droga El disolvente utilizado en fases no polares suele ser metanol, acetonitrilo o una mezcla de disolvente orgnico con agua o tampn