PRUEBAS DE COMPATIBILIDAD

Integrantes: Roberto Adame Gmez Jos Manuel Garca Atempa

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Son los procedimientos realizados por los servicios de transfusin o los bancos de sangre, previos a la transfusin, con el fin de asegurar la seleccin adecuada de la unidad de sangre o los componentes a transfundirse.

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OBJETIVO

Transfundir al paciente hemocomponentes de EXCELENTE calidad, para evitar el contagio de enfermedades infecciosas y reacciones postransfusionales.

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OBJETIVO:

Seleccionar hemocomponentes que no afecten al receptor y tengan una sobrevida postransfusional aceptable. Si se realizan en forma correcta confirman la compatibilidad ABO entre el componente y el receptor y detectan la mayora de los anticuerpos imprevistos significativos.

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Que se debe hacer antes de entregar los hemoderivados?

Identificacin del receptor y su muestra de sangre.

Tipificacin ABO y Rh de la sangre del receptor y del donante.

Deteccin de anticuerpos antieritrocitarios en el suero o plasma del receptor. Comparacin de los hallazgos actuales, con los registros previos.

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Confirmacin del tipo Rh de las unidades Rh NEGATIVO. Seleccin de los componentes de tipo ABO y Rh apropiados para el receptor. Compatibilidad cruzada serolgica.

Rotulacin de los productos con la informacin que identifica al receptor.

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RECEPTOR

DETERMINACIN DEL GRUPO ABO. DETERMINACIN DEL Rh. DETECCIN DE ANTICUERPOS INESPERADOS. IDENTIFICACIN DEL ANTICUERPO.

- VDRL - Reacciones febriles - Rosa de bengala - PCR - Frotas sanguneo - Elisa

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El factor Rh es una protena integral de la membrana aglutingena que est presente en todas las clulas. Un 85% de la poblacin tiene en esa protena una estructura dominante, que corresponde a una determinada secuencia de aminocidos que en lenguaje comn son denominados habitualmente Rh+.
fue descubierto por Karl Landsteiner y Wiener en 1940

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Dce dCe

DcE Dce DCE dcE dce dCE

POSITIVO NEGATIVO

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Variante D dbil Du: Se presenta en individuos que poseen en sus glbulos rojos pocos determinantes antgenos D o que por causas genticas se manifiestan dbilmente. Para su deteccin se realiza un coombs indirecto. Los anticuerpos del sistema Rh, no son naturales, solo se encuentran como resultado de una inmunizacin por transfusin embarazo incompatible.

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PRUEBA DE LA ANTIGLOBULINA O DE COOMBS:

La prueba busca revelar la presencia de anticuerpos IgG complemento, en glbulos rojos sensibilizados, por medio del suero de coombs y mediante dos modalidades en su procedimiento:
INDIRECTA DIRECTA

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Busca revelar la presencia de IgG complemento en los glbulos del individuo en estudio. Una PAD= POSITIVA La reaccin sensibilizante ocurri in vivo, es decir mientras las clulas rojas estn circulando.

Util para investigar:

Aloanticuerpos adsorbidos sobre los glbulos rojos en situaciones como: Enfermedad hemoltica del recin nacido.

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La Prueba de antiglobulina Indirecta PAI busca revelar la presencia de los Acs LIBRES en la circulacin del individuo en estudio. SUERO del individuo + GR dotacin antignica conocida panel de glbulos rojos + suero de antiglobulina.

Sensibilizar los GR conocidos Acs en el suero. Potenciar la reaccin = soluciones de fuerza Inica baja ( Liss) albumina.
GR conocidos Antgenos.

Suero Anticuerpos

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APLICACIONESS
Relacionada con un embarazo una transfusin previa. Sensibilizacin con un antgeno ausente en los GR de la embarazada o del receptor. Compatibilidad serolgica del donante GR y el suero del receptor.
Identificacin de antgenos como Kell, Kidd, Duffy, D dbil.

La transfusin es uno de los modelos trascendentales que obligan a la aplicacin rigurosa del control de calidad. Tericamente los efectos nocivos fueron observados desde la primera transfusin, realizada en el siglo XVII por Jean-Baptiste Denis, la cual termin en una crisis hemoltica intravascular con muerte del paciente. Ottenberg (1908) fue el primero en aplicar el descubrimiento de Landsteiner de los grupos sanguneos a la prctica transfusional, al comprobar como prueba previa a la transfusin, si el suero del receptor causaba lisis y aglutinacin de los hemates del donante.

La prueba de compatibilidad es un ensayo In vitro de lo que puede suceder en el paciente al recibir la transfusin de un componente sanguneo, por lo que es de suma importancia, ya que permite que los antgenos y anticuerpos puedan ser detectados y estudiados en el laboratorio; tambin ayuda a prevenir la transfusin de sangre incompatible, y provee al paciente el mximo de seguridad y beneficio. La metodologa vara segn los recursos del servicio y la urgencia del caso, aunque de acuerdo a la Norma Oficial Mexicana ( NOM-003- SSA-1993 ) siempre debe incluirse la tcnica de antiglobulina humana como mnimo. Las tcnicas en medio proteico y con enzimas proteolticas pueden ser tiles para la distincin de la especificidad de un anticuerpo.

Internacionalmente se han establecido los siguientes procedimientos: Solicitud de producto y datos relevantes del receptor. Identificacin y coleccin de las muestras sanguneas del receptor. Estudios y pruebas del donador. Determinacin del grupo ABO y Rho (D) del receptor. Deteccin de anticuerpos irregulares. Seleccin de componentes ABO y Rho (D) apropiados para el receptor. Comparacin entre resultados actuales y el historial de las pruebas transfusionales realizadas con anterioridad

Las pruebas cruzadas y la bsqueda de anticuerpos son de suma importancia, ya que permiten que los antgenos y anticuerpos puedan ser detectados y estudiados en el laboratorio; nos ayudan a prevenir la transfusin de sangre incompatible, y proveen al paciente de mxima seguridad y beneficio. Antes de realizar cada procedimiento es muy importante contar con un excelente control de calidad, el cual nos permitir verificar todos los procesos y etapas que influirn en la deteccin de los anticuerpos. Las pruebas cruzadas normalmente se llevan a cabo en cuatro fases: Lectura rpida, lectura de 37, lectura 37/ Coombs, validacin con eritrocitos sensibilizados. El medio que rodea la prueba est muy relacionado con los potenciadores y con la fuerza inica que favorece la reaccin antgeno-anticuerpo, por lo que debe ser capaz de detectar anticuerpos activos a bajas temperaturas y diferenciar entre reacciones positivas verdaderas y falsas.

Consta de tres partes:

1. Prueba mayor (D) o del DONADOR: a) Sirve para confirmar si existe compatibilidad ABO entre el receptor y el donador. b) Detecta anticuerpos en el suero del paciente que no se hayan demostrado en la prueba de tamizaje (porque el antgeno correspondiente no estaba presente en las clulas detectoras o eritrocitos de fenotipo conocido, PANEL). Se utilizan 2 gotas de suero del receptor ms 1 gota de eritrocitos lavados del donador. La fase mayor recibe ese nombre por que permite descubrir en el suero del receptor los anticuerpos que suelen presentar la causa ms comn de las reacciones hemolticas graves o fatales ante las transfusiones. La reaccin a la transfusin suele ser leve, cuando se debe a incompatibilidad en la fase menor de la prueba cruzada.

2. Prueba menor (R) o del RECEPTOR: a) Detecta anticuerpos irregulares en el suero del donador y ratifica algn error de clasificacin ABO/Rh. Se realiza con 2 gotas de suero o plasma del donador ms 1 gota de eritrocitos del receptor. 3. Prueba autotestigo (AT): a) Permite detectar una prueba de antiglobulina directa positiva, as como la presencia de rouleaux y otras anormalidades autoinmunes (AHAI). Se realiza con 1 gota de eritrocitos del receptor ms 2 gotas de suero del receptor.

Deteccin de anticuerpos libres en suero:

se realiza enfrentando el suero del paciente o receptor con eritrocitos de fenotipo conocido (PANEL). La investigacin de anticuerpos irregulares libres en suero se debe realizar por lo menos con dos tcnicas: la primera siempre ser la salina llevada hasta la fase de Coombs, ya que en la mayora de los casos permite diferenciar la IgM en su fase rpida a 22 y 37 C de la IgG en la fase de Coombs; y la segunda puede ser un medio hiperproteico como albmina, o enzimas como bromelina o LISS, siendo esta ltima la ms eficaz.

A) Anticuerpos negativos y prueba cruzada compatible. Una deteccin de anticuerpos negativa no garantiza que el suero se encuentre libre de anticuerpos eritrocitarios clnicamente significativos, slo indica que no contiene anticuerpos reactivos. Tampoco una prueba cruzada compatible indica una supervivencia eritrocitaria normal, por ello debe realizarse conjuntamente con un tamiz para anticuerpos, o bien diferentes tcnicas tanto para anticuerpos como pruebas Cruzadas.

B) La deteccin de anticuerpos, las pruebas cruzadas o ambas pueden ser positivas. Lo anterior puede deberse a la presencia de aloanticuerpos, autoanticuerpos, interacciones adversas con reactivos y formacin de rouleaux. Si hay mltiples anticuerpos o un anticuerpo que reacciona con un antgeno de alta incidencia o si el anticuerpo est presente en concentraciones muy bajas deben usarse tcnicas especficas como elusin, absorcin o la combinacin de las mismas.

C) Prueba cruzada incompatible, anticuerpos irregulares negativos. Se puede presentar cuando la concentracin del anticuerpo es muy baja y slo se detecta con clulas frescas, tambin ocurre cuando las clulas del panel de eritrocitos de fenotipo conocido no tienen el antgeno de la poblacin en estudio.

PROCEDIMIENTO: 1. Hacer una extraccin de 3ml de sangre al donador y receptor. 2. Preparar una suspensin al 5% de glbulos rojos en suero fisiolgico en un tubo de hemlisis, tanto del donador como del receptor. 3. Dejar coagular la sangre, desprender el cogulo por medio de un aplicador, centrifugar a 3000r.p.m. durante 5 minutos, separar el suero por medio de una pipeta Pasteur de ambos tubos

PRUEBAS CRUZADAS (salina): 1.Marcar tres tubos de la siguiente manera: Ds (prueba mayor), Rs (prueba menor) y Ts (autotestigo). 2. Al tubo Ds colocar dos gotas de suero del receptor ms una gota de glbulos rojos del donador y mezclar. 3.Al tubo Rs colocar dos gotas de suero del donador ms una gota de glbulos rojos del receptor y mezclar. 4.Al tubo Ts colocar dos gotas del suero del donador ms una gota de glbulos rojos del donador

5.Centrifugar los tubos Ds Rs y Ts a 3400 r.p.m. durante 30 segundos y observar si hay aglutinacin.
6. Mezcle y centrifugue a 340 r.p.m. durante 30 segundos y observe si hay aglutinacin.

PRUEBAS CRUZADAS (Albmina):

1. Marcar tres tubos de la siguiente manera: DA (prueba mayor), RA (prueba menor) y TA (autotestigo). 2. Al tubo DA colocar dos gotas del suero del receptor ms una gota de glbulos rojos de donador y mezcle 3. Al tubo RA colocar dos gotas del suero del donador ms una gota de glbulos rojos del receptor y mezcle 4. Al tubo TA colocar dos gotas del suero del receptor ms una gota de glbulos del receptor y mezcle 5. Agregue a los tubos DA RA y TA albmina bobina 2 gotas si es al 22% y dos gotas si es al 30% y mezcle 6. Centrifugue los tubos DA RA y TA a 3400 r.p.m. durante 90 segundos y observe si hay aglutinacin 7. Si no hay hemoaglutinacin incube a 37C durante 15 minutos. 8. Saque los tubos DA RA y TA y centrifugue a 3400r.p.m. durante 90 segundos y observe si hay aglutinacin. 9. Si no hay aglutinacin lave tres veces con solucin salina isotnica. 10. En ltimo lavado elimine totalmente la solucin salina remanente 11. Adicione a cada tubo DA RA y TA una gota de suero antiglobulina humana e incubar 15 minutos a 37C. 12. Mezcle y centrifugue a 3400r.p.m. durante 30 segundos y observe si hay aglutinacin. 13. Control de Coombs, realizar los mismo sin solucin de albmina y con solucin liss.