Determinao Cromatogrfica de Resduos de Pesticidas em gua

Dra. Sonia C. N. Queiroz Pesquisadora - Embrapa Meio Ambiente e-mail: sonia@cnpma.embrapa.br

Uso de pesticidas
Aplicao de pesticidas: Vantagens: controle eficaz de pragas nas plantaes acelerao da produo de alimentos Desvantagens: Pode contaminar o meio ambiente e os alimentos (resduos de pesticidas).

Volume de vendas de pesticidas no Brasil - 1990/2001

1 .6 0 0 .0 0 0 1 .4 0 0 .0 0 0 1 .2 0 0 .0 0 0 1 .0 0 0 .0 0 0 USD 8 0 0 .0 0 0 6 0 0 .0 0 0 4 0 0 .0 0 0 2 0 0 .0 0 0 0 1 9 9 01 9 9 1 1 9 9 21 9 9 31 9 9 4 1 9 9 51 9 9 61 9 9 7 1 9 9 81 9 9 92 0 0 0 2 0 0 1

Inset icida A caricida F ungicida H erbicida O ut ros

Legislao sobre pesticidas em gua

Legislao da Comunidade Europia para guas:

Potvel : 0,1 g/L (individual) e 0,5 g/L (soma) Superficiais : 1-3 g/L

Legislao da EPA (Enviromental Protection Agency-USA): Baseada em estudos toxicolgicos. No Brasil:

Padro de potabilidade

CONAMA - RESOLUO No 357, DE 17 DE MARO DE 2005 Dispe sobre a classificao dos corpos de gua (doces, salobras e salinas) e diretrizes ambientais para o seu enquadramento, bem como estabelece as condies e padres de lanamento de efluentes, e d outras providncias. http://www.mma.gov. br/port/conama/res/res05/res35705.pdf

PARMETROS ORGNICOS VALOR MXIMO

PARM ETROS ORG NICOS VALOR MXI MO Acrilamida - 0,5 g/L Alacloro - 20 g/L Aldrin + Dieldrin - 0,005 g/L Atrazina - 2 g/L Benzeno - 0,005 mg/L Benzidina - 0,001 g/L Benzo(a)antraceno - 0,05 g/L Benzo(a)pireno - 0,05 g/L Benzo(b)fluoranteno - 0,05 g/L Benzo(k)fluoranteno - 0,05 g/L Carbaril - 0,02 g/L Clordano (cis + trans) - 0,04 g/L 2-Clorofenol - 0,1 g/L Criseno - 0,05 g/L 2,4D - 4,0 g/L Demeton (Demeton-O + Demeton-S) - 0,1 g/L Dibenzo(a,h)antraceno - 0,05 g/L 1,2-Dicloroetano - 0,01 mg/L 1,1-Dicloroeteno - 0,003 mg/L 2,4-Diclorofenol - 0,3 g/L Diclorometano - 0,02 mg/L DDT (p,p-DDT + p,p-DDE + p,p-DDD) - 0,002 g/L Dodecacloro pentaciclodecano - 0,001 g/L Endossulfan (a + b + sulfato) - 0,056 g/L Endrin - 0,004 g/L Estireno - 0,02 mg/L Etilbenzeno - 90,0 g/L Fenis totais (substncias que reagem com 4aminoantipirina) - 0,003 mg/L C6H5OH Glifosato - 65 g/L Gution - 0,005 g/L

PARM E TROS ORGN ICOS VALOR M XIM O Heptacloro epxido + Heptacloro - 0,01 g/L Hexaclorobenzeno - 0,0065 g/L Indeno(1,2,3-cd)pireno - 0,05 g/L Lindano (g-HCH) - 0,02 g/L Malation - 0,1 g/L Metolacloro - 10 g/L Metoxicloro - 0,03 g/L Metoxicloro - 0,03 g/L Paration - 0,04 g/L PCBs - Bifenilas policloradas - 0,001 g/L Pentaclorofenol - 0,009 mg/L Simazina - 2,0 g/L Substncias tensoativas que reagem com o azul de Metileno - 0,5 mg/L LAS 2,4,5T - 2,0 g/L Tetracloreto de carbono - 0,002 mg/L Tetracloroeteno - 0,01 mg/L Tolueno - 2,0 g/L Toxafeno - 0,01 g/L 2,4,5-TP - 10,0 g/L Tributilestanho - 0,063 g/L TBT Triclorobenzeno (1,2,3-TCB + 1,2,4-TCB) - 0,02 mg/L Tricloroeteno - 0,03 mg/L 2,4,6-Triclorofenol - 0,01 mg/L Trifluralina - 0,2 g/L Xileno - 300 g/L

Portaria do Ministrio da Sade n 518/2004

Portaria MS no 518/2004: estabelece os procedimentos e responsabilidades relativos ao controle e vigilncia da qualidade da gua para consumo humano e seu padro de potabilidade e d outras providncias.

Portaria MS no 518/2004:

Alaclor g/L - 20,0 Aldrin e Dieldrin g/L - 0,03 Atrazina g/L - 2 Bentazona g/L - 300 Clordano (ismeros) g/L - 0,2 2,4 D g/L - 30 DDT (ismeros) g/L - 2 Endossulfan g/L - 20 Endrin g/L - 0,6 Glifosato g/L - 500 Heptacloro e Heptacloro epxido g/L - 0,03

Hexaclorobenzeno g/L - 1 Lindano (-BHC) g/L - 2 Metolacloro g/L- 10 Metoxicloro g/L- 20 Molinato g/L - 6 Pendimetalina g/L- 20 Pentaclorofenol g/L - 9 Permetrina g/L - 20 Propanil g/L - 20 Simazina g/L - 2 Trifluralina g/L - 20

Mtodos Analticos
Requisitos: - rpidos - sensveis - exatos - precisos - baixo custo

Anlise de Resduos de Pesticidas

Amostragem. Armazenamento. Extrao e/ou pr-concentrao: Extrao Lquido-Lquido (LLE), Extrao em Fase Slida (SPE), Micro-extrao em Fase Slida (SPME), etc. Remoo de interferentes. Anlise instrumental: HPLC, GC, SCFC, CEC, CE, etc. Validao do mtodo.

Extrao lquido-lquido (ELL)

Baseia-se na partio da amostra entre 2 fases imiscveis (orgnica e aquosa). A eficincia da extrao depende da afinidade do soluto pelo solvente de extrao (KD), da razo das fases e do nmero de extraes. Para alguns sistemas o valor de KD pode ser aumentado pelo ajuste do pH para prevenir a ionizao de cidos ou bases, pela formao de par-inico com solutos ionizveis, pela formao de complexos lipoflicos com ons metlicos ou pela adio de sais neutros para que diminua a solubilidade de compostos orgnicos na fase aquosa.

Extrao lquido-lquido (ELL)

Tcnica clssica Baseada na extrao repetitiva de 1 ou 0,5 L de amostra com solvente, em um funil de separao. Solvente mais comum: diclorometano

vantagens: capaz de extrair uma ampla gama de compostos com larga faixa de polaridade e fcil de evaporar.

Herbicidas cidos: ajuste de pH<2.

Esquema de um sistema para EFS (off-line)

Figura 1: Esquema de um cartucho de EFS operando no modo de prconcentrao seguida de clean-up de amostra. A) ativao e condicionamento do cartucho; B) aplicao da amostra, com reteno do(s) analito(s) e dos interferentes; C) troca de solvente e eluio dos

Esquema de um sistema para EFS (on-line)

Figura 2: Esquema utilizado em extraes on-line. A) Prconcentrao e B) Eluio dos analitos e anlise cromatogrfica

Sorventes usados em SPE

NO POLARES Octadecilsilano Octilsilano Etilsilano Metilsilano Fenilsilano

POLARES Florisil Alumina Slica

TROCA INICA SCX Benzenossulfonilpropilsilano

PRS Sulfonilpropilsilano CBA Carboximetilsilano DEA Dietilaminopropilsilano SAX Trimetilaminopropilsilano

Cianopropilsilano Diolsilano

Cicloexilsilano

Aminopropilsilano

Extrao em Fase Slida

Vantagens:

mais rpida reduo do consumo de solvente eliminao de emulso enriquecimento de traos alto potencial para automao

Micro Extrao em fase slida (SPME)

Tipos de fibras

A slica fundida recoberta com um polmero age como fase estacionria. Tipos de fibras:

Carboxen/polydimethylsiloxane - gas e compostos volteis de baixa massa molar. Polydimethylsiloxane (PDMS) - no polares volteis/semivolteis. PDMS/divinylbenzene (DVB) - aminas e nitroaromticos Carbowax/DVB - alcoois e compostos polares

Determinao

Mtodos cromatogrficos:

So os mais utilizados para a separao, identificao e quantificao dos resduos de pesticidas em diferentes matrizes, incluindo gua. Aplicao de sistemas de deteco seletivos e altamente sensveis essencial em anlise de gua devido ao nvel baixo de concentrao dos resduos de pesticidas em gua.

Cromatografia: GC & HPLC

Cromatografia Gasosa: compostos volteis e termoestveis. Cromatografia Lquida de Alta Eficincia: compostos instveis termicamente e que no volatilizam. (Devem ser solveis na fase mvel).

Cromatografia Gasosa (GC)

O Cromatgrafo a Gs
1 2 6

5 3
1 - Reservatrio de Gs e Controles de Vazo / Presso. 2 - Injetor (Vaporizador) de Amostra. 3 - Coluna Cromatogrfica e Forno da Coluna. 4 - Detector. 5 - Eletrnica de Tratamento (Amplificao) de Sinal. 6 - Registro de Sinal (Registrador ou Computador). Observao: em vermelho: temperatura controlada

Cromatografia Lquida (HPLC)

Detectores para HPLC: Anlise de Resduos Clssicos:

UV/Vis. Fluorescncia

Moderno: MS

Espectrometria de Massas

Primeiros experimentos: Thompson, 1912 Espectrmetro de massas:

Introduo da amostra; Fonte de ionizao; Analisador de massas; Deteco de ons e Aquisio/processamento de dados.

MS & outros detectores para HPLC

MS um detector universal para HPLC; Alta sensibilidade (baixos limites de deteco); Confirmao da presena do analito (massa molar e informao estrutural); Alta seletividade (possibilidade de anlise de compostos com picos sobrepostos); Pureza de picos.

Incompatibilidades Fundamentais entre LC e MS

Vazes altas usadas em HPLC, ~ 1 mL/min

- O EM necessita de alto vcuo.

HPLC usa fases mveis com aditivos no volteis, tais como, tampes, reagentes par-inico, etc; Ionizao de compostos altamente polares, instveis termicamente, inicos e de massa molar alta.

Interfaces para LC-MS

Interface : um dispositivo colocado entre o LC e o MS e serve para remover o solvente e transferir a amostra para a fonte de ons. A Ionizao Presso Atmosfrica (API) uma famlia de tcnicas que inclui: Ionizao Qumica Presso Atmosfrica (APCI) Electrospray (ES)

ELECTROSPRAY

Nuvem de Electrospray

Aplicaes das tcnicas de API

Aplicao na rea ambiental

MSD1 TIC, MS File (0924P\PEST0011.D) API-ES Positive

A)

200000 175000 150000 125000 100000 75000 50000 25000 0 5 10 15 VWD1 A, Wavelength=235 nm (0924P\PEST0011.D) 20

1 3 2 4 5 6
25

7 10

30

35

40

45 min

B)

mAU 8 6 4

9 8 3 1 2 4 7 5 6

10

2 0 0 5

10

15

20

25

30

35

40

45 min

Figura4:Cromatogramasobtidosparaaseparaodamisturadepadresdepesticidas: 1= carbendazim; 2= dimetoato; 3= simazina; 4= tebutiuron; 5= carbaril; 6= 3,4-DCA; 7= atrazina;8=diuron;9=ametrin;10=linuron.A)LC-MSeB)LC-UV.

Espectros de massas de pesticidas obtidos por LC-API-ESMS

216.0 202.1 * S 1S C tim = 7 9 o 1 1 P E T 0 0 A I-E P s e M D P , e 1 .1 6 f 1 6 \P S 0 2 .D P S o itiv * S 1S C tim = 5 1 o 1 1 P E T 0 0 A I- SP s e M D P , e 2 .7 5 f 1 6 \P S 0 2 .D P E o itiv

A)

10 0

Mx 65 a: 10

B)

10 0

Mx 58 a: 10

8 0

[M + H]+

8 0

[M + H]+

6 0

6 0

4 0

203.1 204.0

4 0

60.0 69.1

85.0 91.0

85.0 90.9

112.9

112.8

173.9

69.1

216.9218.1

190.9

328.9

232.9

136.6

258.9

283.1

10 0

20 0

30 0

0 m /z

10 0

20 0

30 0

304.8

164.9

228.9

2 0

2 0

139.8

321.0 m /z

Figura 9: Espectro de massas: A) Simazina e B) Atrazina.

Deteco de pesticidas: Modo on Total SIM

MSD1 TIC, MS File (1105P\PEST0010.D) API-ES Positive 22500 20000 17500 15000 12500 10000 5 10 15 MSD1 202, EIC=201.7:202.7 (1105P\PEST0010.D) API-ES Positive 20 25 30 35

e Modo

A)

min

B)

900 800 700 600 500 400 300 200 5 10 15 MSD1 216, EIC=215.7:216.7 (1105P\PEST0010.D) API-ES Positive 20 25 30 35 min

c)

3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 5 10 15 20 25 30 35 min

Figura 5: Cromatogramas obtidos para amostra de gua da torneira e sorvente: Supelclean Envi-carb. A) on total"; B) Deteco de simazina em tR 16,8 min (ModoSIM)eC)DetecodeatrazinaemtR25min(ModoSIM).

Concluso

A anlise da qualidade de gua de extrema importncia para garantir a sade da populao. Anlise de resduos de pesticidas um desafio para os Qumicos Analticos. Exige formao na rea conhecimentos na rea de mtodos de separao (cromatografia). A formao de recursos humanos nesta rea de extrema importncia para realizao de estudos de contaminantes em amostras ambientais.