UNIVERSIDAD AUTNOMA DE GUERRERO

UNIDAD ACADMICA DE CIENCIAS QUMICO BIOLGICAS P.E. QUMICO BILOGO PARASITLOGO LABORATORIO DE BACTERIOLOGA MDICA

TESIS RESISTENCIA A ANTIBITICOS EN BACTERIAS PATOGENAS AISLADAS DE PACIENTES CON DIARREA QUE ACUDEN A LOS CENTROS DE SALUD DE CHILPANCINGO GRO.

PRESENTA: MARLENE GARCA ROQUE

DRA. NATIVIDAD CASTRO ALARCN DIRECTORA DE TESIS Chilpancingo, Gro., a 30 Octubre de 2011

Una gran variedad de patgenos bacterianos, parasitarios y virales que pueden alterar la funcin intestinal y causar algunas manifestaciones diarreicas.

Grupo ms grande de Bacilos Gram negativos con importancia clnica.

Entre las principales enterobacterias causantes de diarrea se encuentran:

Escherichia coli (Serotipos)

Salmonella

Shigella

Yersinia enterocolitica
Murray et al., 1997

Patotipos de E. coli
Patotipos E. coli enterotoxgena ETEC E. coli enteropatgena EPEC Fenotipo Toxinas secretoras que daan el epitelio mucoso Signos y Sntomas no Diarrea del viajero predominante es una profusa. El sntoma diarrea acuosa

Se adhiere a las clulas epiteliales en microcolonias localizadas y causan lesiones de adhesin y borrado.

Usualmente ocurren en infantes. Se caracteriza por fiebre baja, malestar, vmito y diarrea, con una cantidad prominente de moco, pero sin mucha sangre

E. coli enteroinvaciva. EIEC

Invaden clulas epiteliales.

Disentera; las caractersticas son fiebre y colitis. Los sntomas son urgencia y tenesmo; sangre, moco y muchos leucocitos en materia fecal.

E. coli enterohemorrgica EHEC

Elaboracin (SLT).

de

Citotoxinas Diarrea sanguinolenta con leucocitos. A menudo sin fiebre. Es comn en dolor abdominal. Puede desarrollar el sndrome urmico hemoltico.

E. coli enteroagregativa EaggEC

Se adhieren a las clulas Diarrea acuosa, vmitos deshidratacin y epiteliales en un patrn que con menor frecuencia dolor abdominal. hace recordar una pila de ladrillos.

Koneman, et al., 2001

Sntesis de la pared bacteriana

-lactmicos

Penicilinas Cefalosporinas Monobactames Carbapenmes

Alteracin de la estructura de los cidos nucleicos

Bloqueo de la sntesis de factores metablicos Sntesis de protenas

Tetraciclinas Quinolonas

Sulfonamidas Trimetroprim

Cloramfenicol

Calvo, J et al 2009

Bacterias Patgenas
Salmonella Bacilos gramnegativo anaerobio facultativo, con flagelo . Se transmite por contacto directo o contaminacin cruzada durante la manipulacin de alimentos o en el hogar, tambin por va sexual. Gram negativas, no mvil, no formadora de esporas e incapas de fermentar la lactosa. La infeccin por Shigella, comienza por contaminacin fecal-oral. Dependiendo de la edad y la condicin del hospedador.

Forman parte de la microflora comensal y pueden causar infecciones gastrointestinales emergentes.

Bacilo gramnegativo no esporulado, se puede transmitir a travs del contacto con animales, ingestin de productos contaminados o agua contaminada. Raramente causa infecciones mortales.

Klebsiella sp

Proteus sp

Koneman et al 2001 ,Bhaduri et al., 2005

Bacterias Patgenas
Las infecciones causadas por esta bacteria se original al ingerir alimentos, agua o leche contaminada por excrementos humanos o de animales que contengan esta bacteria.

Las infecciones por Shigella puede provocar enfermedades que van desde diarreas leves, disentera grave con la presencia frecuente de sangre y moco, fiebre alta, calambres, tenesmo, y en raros casos, la bacteriemia.

forman parte de la microflora comensal y pueden causar infecciones gastrointestinales oportunistas.

Los cerdos son el reservorio primario a partir de los cuales las cepas de Y. enterocolitica son patgenas para los seres humanos, es considerado como un microorganismo patgeno que es transmitido por el consumo de carne de cerdo.

Klebsiella sp.

Proteus sp.
Koneman et al 2001 ,Bhaduri et al., 2005

Inhibicin de la pared celular Betalactmicos

Ampicilina Cefuroxime Cefotaxima Ceftacidima Imipenem Gentamicina Trimetoprim-sulfametoxasol Tetraciclina Chloramfenicol ciprofloxacima

MECANISMOS DE ACCION DE LOS ANTIBITICOS

Inhibicin de la sntesis de cidos nucledos. Quinolonas Ciprofloxacina

Bloqueo de la sntesis de factores metablicos. Sulfamidas Trimetoprim Inhibicin de la sntesis de protenas Tetraciclinas Aminoglucosidos Gentamicina Macrolidos Alteracin de la permeabilidad de la membrana celular.

Mecanismos genticos de transferencia de la resistencia a antibiticos

Rosenblatt- Farrell 2009

Mecanismos de resistencia microbiana

Llevan a cabo una mutacin en las subunidades Gyr A y Gyr B de ADN girasa.

Anderson et al., 2005

son protenas de membrana externa que estn presentes en bacterias Gramnegativas, formando un canal acuoso permitiendo la difusin pasiva de molculas y de materiales de desecho tanto al interior como al exterior de la clula

como la expulsin de determinadas sustancias dainas para las bacterias como los antibiticos.

E. coli
Fred et al, 2006

El eflujo activo de antibiticos es mediado por protenas transmembrana insertadas en la membrana citoplasmtica. Estas protenas forman canales que exportan a un agente antimicrobiano fuera de la clula impidiendo que este actu sobre la bacteria debido a que no alcanza a llegar a su sitio blanco.

Ejemplo

Pseudomona el factor ms importante es la presencia de bombas de expulsin activa, en especial MexAB-OprM, con capacidad para expulsar antibiticos betalactmicos, tetraciclina, cloranfenicol macrlidos, y trimetoprim.

(Wasaznik, 2009., Opazo, 2009.)(Levy S. 1998)

Resistencia mediada por -lactamasas

UNION
N O

ACILACION
N O O

HIDROLISIS
NH OH O

Mtodos Fenotpicos

INTERPRETACIN

Un incremento 5mm en el diametro del halo para cefotaxima o ceftazidina cuando se prueban en combinacin con cido clavulnico. Comparado con el diametro del halo cuando se prueba sin, cido clavulnico, confirma la produccin de BLEE.

Planteamiento del Problema

Cul es la frecuencia de resistencia a antibiticos en bacterias

patgenas aisladas de muestras diarreicas de pacientes que acuden a los centros de salud del municipio de Chilpancingo?

Justificacin
El uso indiscriminado de antibiticos de espectro extendido ha producido un incremento en la resistencia de los diferentes agentes patgenos a los antibiticos usados comnmente en la clnica.

Por lo que la resistencia bacteriana, se considera como un problema de salud en todo el mundo, principalmente en los pases en vas de desarrollo, como Mxico.

En esta investigacin se pretende conocer la resistencia a antibiticos en bacterias patgenas causantes de diarrea, que permita por un lado dar un tratamiento adecuado a los pacientes y por otro lado generar evidencia cientfica de la frecuencia de la resistencia de enteropatgenos. Con esta informacin los profesionales podrn mejorar el tratamiento en el primer nivel de atencin

Hiptesis

Ms de la mitad de los aislamientos clnicos de bacterias patgenos causantes de diarrea en Chilpancingo, Guerrero han desarrollado una resistencia debido al uso indiscriminado de los antibiticos por lo que esperamos encontrar una resistencia a: lactmicos, Quinolonas, Trimetroprm Sulfametoxazol, Tetraciclina y Cloranfenicol.

Objetivos
General:

Particulares:
Caracterizar fenotpicamente la resistencia a antibiticos en bacterias patgenas causantes de diarrea. Determinar la resistencia a antibiticos en bacterias patgenas causantes de diarrea. Comparar la frecuencia de resistencia diferentes gneros de bacterias patgenos. en los

Tipo de estudio Transversal observacional de corte descriptivo. Lugar donde se realiz el estudio Laboratorio de Investigacin en Microbiologa. Poblacin objetivo Pacientes con diarrea del Municipio de Chilpancingo Gro.

Grupo de estudio Especies patgenas causantes de diarrea.

Criterios
Inclusin
Bacterias patgenas aisladas de muestras diarreicas, en centros de salud del municipio de Chilpancingo Gro.

Exclusin y Eliminacin
Bacterias comensales gastrointestinal que no etiolgicos de diarrea. del son tracto agentes

Variables
Dependiente: Resistencia de enteropatgenos a agentes antimicrobianos Independiente: Especies de enteropatgenos.

Anlisis de resultados
Excel

Las muestras fueron en consentimiento de las pacientes.

Consideraciones ticas y de bioseguridad

NOM 087 ECOL SSA 2002.

OBTENCIN DE BACTERIAS ENTEROPATGENAS A PARTIR DE MUESTRAS DIARREICAS

TCNICA DE DIFUSION EN DISCO

TECNICAS REALIZADAS

PRUEBA DE NITROCEFINA

DETECCION DE BLEEs

RESULTADOS

DISCUSION

CONCLUSIONES

Dimetros de sensibilidad y resistencia establecidos por el CLSI.

Abreviatura Antimicrobiano Concentracin R I S

AMP CAZ CTX

Ampicilina Ceftazidima Cefotaxima

10 g 30 g 30 g

13 14 14

14-16 15-17 15-22

17 18 23

CXM
CIP C CN IPM TE SXT

Cefuroxima
Ciprofloxacina Cloramfenicol Gentamicina Imipenem Tetraciclina Trimetroprim/suIfametoxazol

30 g
5 g 30 g 10 g 10 g 30 g 1.25/23.75 g

14
15 12 12 13 14 10

15-22
16-20 13-17 13-14 14-15 15-18 15-18

23
21 18 15 16 19 19

Resultados

Grafica 1. Frecuencia de bacterias patgenas causantes de diarrea en Chilpancingo, Gro.

Grafica 2. Frecuencia de Grupos de Enterobacterias y Bacilos Gram negativos-Oxidasa positiva.

Cuadro 1.- Resistencia de Enterobacterias lactosa positiva.

ANTIBIOTICO %RESISTENTE %INTERMEDIO %SENSIBLE

AMPICILINA
CEFUROXIME

66.6
1.85

24.0
29.62

9.25
68.5

CEFOTAXIMA
CEFTACIDIMA IMEPENEM GENTAMICINA TRIM-SULFA TETRACICLINA CHLORAMFENICOL CIPROFLOXACIMA

3.70
1.85 0 0 100 51.85 3.24 5.55

1.85
3.70 0 0 0 0 0 1.85

94.4
94.4 100 100 0 48.1 88.8 92.5

Cuadro 2.- Resistencia de Enterobacterias lactosa negativa.

ANTIBITICO AMPICILINA CEFUROXIME CEFOTAXIMA CEFTACIDIMA IMEPENEM GENTAMICINA TRIM-SULFA TETRACICLINA CHLORAMFENICOL CIPROFLOXACIMA %RESISTENTE 47.0 17.6 0 11.7 0 11.7 23.5 52.9 23.5 0 %INTERMEDIO 5.88 5.88 0 0 0 0 0 0 0 17.6 %SENSIBLE 47.0 76.4 100 88.2 100 88.2 76.4 47.0 76.4 82.3

Cuadro 3 .- Porcentaje de resistencia en Enterobacterias lactosa positiva y lactosa negativa

ANTIBITICO AMPICILINA CEFUROXIME CEFOTAXIMA Lactosa Positiva % 52.11 1.38 2.77 Lactosa Negativa % 11.26 4.22 0

CEFTACIDIMA
IMEPENEM GENTAMICINA TRIM-SULFA TETRACICLINA CHLORAMFENICOL CIPROFLOXACIMA

1.38
0 0 31.94 38.88 8.33 4.16

2.81
0 2.81 5.63 12.67 5.63 0

Cuadro 4.- Porcentajes de resistencia en grupos de Enterobacterias.

ANTIBIOTICO AMPICILINA CEFUROXIME CEFOTAXIMA CEFTACIDIMA IMEPENEM GENTAMICINA TRIM-SULFA TETRACICLINA CHLORAMFENICOL CIPROFLOXACIMA E. coli 65.11 2.32 2.32 2.32 0 0 48.83 55.81 13.95 6.95 Klebsiella sp 81.81 0 9.09 0 0 0 18.18 36.36 0 0 Salmonella sp 75 12.5 0 0 0 0 12.5 12.5 25 0 Shigella sp 25 50 0 50 0 50 25 100 25 0 Proteus sp 20 0 0 0 0 0 40 80 20 0

Cuadro 5.- Resistencia bacteriana a Bacilos Gram negativos oxidasa positiva.

ANTIBITICO Ceftazidima Gentamicina Amikacina Cefepine Ciprofloxacina Imepenem PORCENTAJE DE SENSIBILIDAD 100 100 100 100 100 100

Cuadro 6.- Frecuencia de resistencia de patotipos de E. coli

ANTIBITICO AMPICILINA CEFUROXIME CEFOTAXIMA CEFTACIDIMA IMEPENEM GENTAMICINA TRIM-SULFA TETRACICLINA CHLORANFENICOL CIPROFLOXACIMA ETEC n=1 100 0 0 0 0 0 100 100 0 0 STEC n=12 58.33 0 0 0 0 0 0 7 16.66 8.33 EHEC n=2 100 0 0 0 0 0 50 0 0 0 EAECt n=8 75 0 0 0 0 0 62.5 50 0 0 EAECa n=16 56.25 6.25 0 6.25 0 0 0 62.5 18.75 6.25 EPECa n=1 100 0 0 0 100 0 0 100 100 100

Conclusiones
Escherichia coli, con un 58%, fue la principal Enterobacteria causante de diarreas en los centros de salud del municipio de Chilpancingo Gro., Seguida por Klebsiella con 15 % y Salmonella con una frecuencia de un 11%.

Todas las cepas aisladas presentan resistencia a la ampicilina y una sensibilidad a antibiticos carbapenicos como es el Imipenem

De las enterobacterias aisladas y de los bacilos Gramnegativos Oxidasa positivo solamente E. coli presento resistencia a quinolonas de tercera generacin (Ciprofloxacina)

Utilizando los criterios de CLSI para la bsqueda de BLEE con la tcnica de doble disco combinado todas las cepas aisladas fueron negativas a esta prueba fenotpica.

El patotipo de E. coli identificado genotpicamente con mayor frecuencia de resistencia a la mayora de los antibiticos fue EAECa

Obtencin de bacterias enteropatgenas a partir de muestras diarreicas

Tcnica de difusin en disco

Prueba de nitrocefina

Tcnica doble disco combinado

Anlisis de resultados

Entrega de resultados

Discusin

Conclusin