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MODELOS EXPERIMENTAIS

Fundamental para o aperfeioamento e comprovao de tcnicas e procedimentos j existentes, assim como para o desenvolvimento de outros.

Definio e Importncia
Materializao de uma parte da realidade; Preciso adequada; Demonstrar das limitaes; Auxiliar na compreenso dos fenmenos naturais; Mais semelhante possvel.

Exemplos
Culturas de clulas e tecidos (in vitro), Animais de laboratrio (in vivo) Estudos anatmicos (cadveres)

Modelos Animais
Importante a conceituao de doena animal; Similaridade Condies ideais Ambientes controlados Uniformidade

Classificao
1. Status sanitrio ou ecolgico 2. Status genotpico 3. Status como modelo experimental

Status sanitrio ou ecolgico


Relao animal X organismos associados Flora interna e externa

Animais Axnicos
Tecnologia Especfica

Animais Axnicos
Fisiologia geral semelhante aos @s convencionais: - velocidade de maturao sexual; - espessura das paredes vasculares e alveolares - mucosa intestinal - trnsito gastrointestinal mais lento

GNOTOBIOLOGIA (1961)
Obter novas matrizes livres de patgenos Elucidar o efeito barreira Entender inter-relao hospedeiro-flora Eliminar interferncia da microbiota nos estudos de fenmenos biolgicos

Status genotpico
1. Heterognicos - Cruzamento ao acaso; - 99% de heterozigose

2. Isognicos - Consanginidade (20 geraes consecutivas) - 99% de homozigose

Animais Hbridos
Cruzamento aleatrios de isognicos Resposta Imune semelhante aos @s de origem Maior vigor e longevidade

Animais Transgnicos
Acrscimo de genes clonados ou fragmentos de DNA nos cromossomos Adquirir novas informaes genticas p estvel Oncognese

Animais Mutantes
Ao acaso ou provocadas 1. Espontneos: - Nude ou atmico 2. Provocados: - Agentes qumicos ou fsico - Manipulao da seqncia gentica em cultura p somente em camundongos (Embryonic stem cells)

Knock-out e Knock-in

Status Genotpico

Status como Modelo Experimental


Substitui um procedimento capaz de provocar a morte 1. Clnico Induzido: Aloxano e Estreptozotocina 2. Cirrgico Induzido: Retalho cutneo isqumico randmico dorsal 3. Negativo: Mecanismos de resistncia 4. rfo: Encefalopatia Espongiforme Bovina 5. Adotado

Status como Modelo Experimental


6. Local de privilgio imunolgico - Ausncia de drenagem linftica local - Natural: hamster p bolsas laterais da cavidade oral - Artificial: coelho

Culturas de clulas, tecidos e rgos


In vitro Avaliar comportamento molecular, bioqumico, celular e histoqumico de tecidos normais ou patolgicos Queratincitos e fibroblastos

Cadveres
Desde a antigidade Cirurgia plstica Pouco explorado

QUAL A IMPORTNCIA DO USO DE MODELOS EXPERIMENTAIS?

MODELOS EXPERIMENTAIS EMPREGADOS EM ESTUDOS DE HEMATOPOESE

Resposta hematopotica
Vrias formas de estresse alteram a atividade de diferentes populaes celulares comprometidas com a resposta

imunolgica (Chrousos, 2000).

Interaes homeostticas entre o crebro e o sistema imunohematopoitico : citocinas funcionais (Elenkov et al., 1999). identificar as implicaes

Resposta hematopotica

Laboratrio CFU/Imunotoxicologia
Modelos experimentais: - TAE - Infeco por Listeria monocytogenes - Intoxicao por Pb - Estresse fsico e psicognico

MIELOSSUPRESSO

MODULAO

Listeria monocytogenes
G+ Replicao intracelular Presente no solo e na gua Assintomtica no TGI de animais e do homem Contgio: ingesto de alimentos contaminados (laticnios no pasteurizados ou carnes mal cozidas)

Listeria monocytogenes
Bacilo Gram positiva Catalase positiva Oxidase negativa Anerbio facultativo Mvel

Listeria monocytogenes
Sintomas de gripe; Alteraes gastrintestinais: vmitos e diarrias Infeces severas: septicemia, meningite e meningoencefalite

Listeria monocytogenes
Modelo experimental: estudar a resposta imune celular Altamente reproduzvel Resistncia a bactria: imunidade inata do hospedeiro e resposta especfica erradicao do patgeno

Estgios iniciais: MJ, neutrfilos e NK + IFN- e TNFcontrole da replicao bacteriana

Listeria monocytogenes

Disseminao da bactria

Listeria monocytogenes
Neutrfilos : primeiros tipos celulares Replicao inicial em macrfagos Citocinas inflamatrias (IL-1, IL-6, IL-12, TNF- e GM-CSF): atividade citotxica Participao dos linfcitos auxiliares (T CD4+) e citotxicos (T CD8+)

Listeria monocytogenes
no nmero de CFU-GM na MO hematopoese extramedular nos nveis sricos de CSF - C57BL: resistentes a bactria

Tumor Asctico Ehrlich


Ehrlich em 1986 Adenocarcinoma mamrio murino 1905 (Sakai et al., 2006) Modelo experimental: - Inicialmente na forma slida; - 1932 (Loewenthal & Jahn): forma asctica . Rpido crescimento e comportamento agressivo

TAE
Vantagens: - Inespecificidade - Transplantvel (100% pega) - Vrias vias de inoculao (sc, ip) - No metasttico

A. Camundongo portador de TAE B. Lquido Asctico corado com Giemsa C. Clulas de TAE coradas com PAS
Ramos, 2008

TAE
Induo experimental: transplante das clulas tumorais - Retirados cerca de 0,3ml (para a induo da forma asctica) a 0,5ml (para induo da forma slida) de lquido asctico de camundongos e inoculados diretamente no camundongo receptor. - Repetido no receptor a cada 10 dias; - 7 dia: crescimento da massa tumoral; - Crescimento contnuo e migrao das clulas para os linfonodos regionais.

TAE forma asctica e slida

TAE forma slida (subcutneo)

Alteraes imunohematopoticas induzidas pelo TAE

Th 1
IFN K: - ativa M, neutrfilos, NK. IL-2: - ativao e proliferao linfcitos Th e Tc antgenoespecficas; - o funes de clulas NK e Tc. TNF F: - ativa M, neutrfilos; crescimento de linfcitos B e produo de Ig.

Th 2
IL-10: - Inibe produo de citocinas por Th1, M e outras APC; - Inibe diferenciao em Th1. IL-6: - crescimento de linfcitos B e produo de Ig. IL-4: - Inibe diferenciao em Th1 e produo de citocinas por M.

TAE
o PGE 2: - Regula negativamente a hematopoese; - Favorece perfil Th2; - q IL-2 e IFN K. o TGF-F: q IFN K e TNFE. - Inibe proliferao de clulas T e produo de linfocinas; - Inibe proliferao de clulas B e produo de Acs; - Inibe proliferao de clulas tronco e hematopoticas imaturas; - Inibe atividade NK.

TAE
o VEGF: - Auxilia na neoangiognese tumoral; - Afeta atividade normal de macrfagos; - Induz esplenomegalia e neutrofilia; - o CSF-GM e nmero de megacaricitos. o CSF-GM: - Hematopoese extramedular; - Desenvolvimento de clulas supressores; - Falha na formao do estroma.

Intoxicao por Chumbo


Amplo emprego industrial Freqente no meio ambiente - Exposio ocupacional - Ingesto de gua e alimentos contaminados nmero de intoxicaes

Intoxicao por Chumbo


Alteraes: hematopoticas, GI, neurolgicas e reprodutivas Intoxicao aguda: Acidental Naseas, vmitos, clicas, colapso circulatrio Liga-se aos eritrcitos: inibe enzimas (sulfidrila) - Altera a biossntese do heme - Distribuio nos tecidos moles

Intoxicao por Chumbo


nos nveis do metal no sangue e em rgos alvo; da taxa de sntese de heme e de seus precursores; CFU-GM;

Altera proliferao e diferenciao celular: Altera RI: produo de Acs RI mediada por linfcitos T Infeces

- Altera nveis de IL-6

Estresse
Receptores para citocinas no crebro e a ativao do eixo HHA por citocinas pr-inflamatrias: vias importantes

Estresse
Inervao de rgos linfides primrios e secundrios: receptores especficos

Grande variedade de estressores fisiolgico do sistema neural

comprometem papel

- Desregula a produo das clulas sanguneas e a mobilizao seletiva de clulas da medula ssea para a circulao

Estresse
Altera nmero e funcionamento de clulas mielide e linfides - Relao TCD4 e TCD8, - Funo da NK - inibe produo de Ac CFU-GM

Altera produo de citocinas IL-2 e IFN

Concordam com uso de animais experimentais?