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Preparao e distribuio de meios de cultura

Os meios comerciais devem ser hidratados; Devem ser pesados Frasco; papel manteiga/alumnio;

Hidratar em pequena quantidade; Depois deve-se acrescentar o restante da gua; Levar o meio para fundir aquecer;

Preparao e distribuio de meios de cultura


Usar sempre luvas trmicas; Sempre que for usado o termo "esterilizar em autoclave", o tempo de esterilizao de 15 minutos e a temperatura de 121C; Sempre que for usado o termo "esterilizar por filtrao", usar o filtro com porosidade de 0,22 micra, recomendado para partculas bacterianas; Distribuir o meio antes de autoclavar, os tubos no precisam estar esterilizados; Distribuir o meio aps a autoclavao, os tubos, frascos, placas, pipetas e vidrarias estreis; Os meios devem ser autoclavados com as tampas semi-abertas, para que a esterilizao seja por igual em todo o contedo dos tubos tampas fechadas no permitem a entrada do vapor;

Meios de cultura - transporte


CARY BLAIR Microrganismos patognicos e outros coliformes fecais sobrevivem bem neste meio; A carncia de uma fonte de nitrognio impede consideravelmente a multiplicao de microrganismos e a composio nutritiva garante a sobrevivncia deles; FUNO Transporte de material fecal e conseqente conservao dos microrganismos;

Meios de cultura - transporte


SALINA TAMPONADA Meio lquido tamponado que mantm a bactria vivel; FUNO Meio de transporte de fezes.

Meios de cultura - transporte


MEIO STUART A carncia de uma fonte de nitrognio impede consideravelmente a multiplicao de microorganismos e a composio nutritiva garante a sobrevivncia deles; FUNO Transporte de diversos materiais e conseqente conservao dos microorganismos; Haemophilus spp., Pneumococcus, Salmonella spp., Shigella spp. entre outros.

Meios de cultura - manuteno


GAR NUTRIENTE Meio simples, de fcil preparao e barato; FUNO Vrias aplicaes anlise de gua, alimentos e leite como meio para cultivo preliminar das amostras submetidas exames bacteriolgicos e isolamento de organismos para culturas puras; Conservao e manuteno de culturas em temperatura ambiente; Usado para observar esporulao de espcies de bacilos Gram positivos;

Meios para crescimento e isolamento


GAR CHOCOLATE Utilizado para o cultivo de microrganismos exigentes; Cresce quase todos os tipos de microrganismos; base do meio adiciona-se sangue de cavalo, carneiro ou coelho em temperatura alta hemcias lisam liberando hemina e hematina compostos crescimento dos m.o exigentes; Observao: se utilizar sangue de carneiro ou coelho no lugar do sangue de cavalo, adicionar os suplementos a base de NAD (coenzima I) e cistena aps resfriar a base achocolatada aproximadamente 50C;

Meios para crescimento e isolamento


THAYER-MARTIN CHOCOLATE um meio rico e superior a outros meios de cultivo destinados para o isolamento de Neisseria sp; Contm em sua frmula antibiticos; Inibem o crescimento de outras bactrias, quando em amostras colhidas de stios contaminados;

Meios para crescimento e isolamento


GAR SALMONELLA-SHIGELLA (SS) Possue componentes (sais de bile, verde brilhante e citrato de sdio) que inibem microrganismos Gram positivos; Lactose ao meio se o m.o lactose positiva;

Tissulfato de sdio e o citrato frrico permitem a deteco de HS evidenciado por formao de colnias de cor negra no centro. FUNO Selecionar e isolar espcies de Salmonella sp e Shigella sp, em amostras de fezes, alimentos e gua.

Meios para crescimento e isolamento


CALDO SELENITO Inibem coliformes e outras espcies da flora intestinal como estreptococos; FUNO Isolamento de Salmonella spp. e Shigella spp. em amostras de fezes, urina e alimentos...

Meios para crescimento e isolamento


CALDO TETRATIONATO Os sais de bile contidos no meio de tetrationato inibem microrganismos Gram positivos e a adio da soluo de iodo inibe a flora intestinal normal de espcies fecais; FUNO Meio de enriquecimento para Salmonella spp.

Meios para crescimento e isolamento


GAR MAC CONKEY O cristal violeta inibe o crescimento de microrganismos Gram positivos especialmente enterococos e estafilococos; A concentrao de sais de bile relativamente baixa em comparao com outros meios; No to seletivo para Gram negativos como, por exemplo, o gar SS; FUNO BGN (enterobactrias e no fermentadores) e verificar a fermentao ou no da lactose;

Meios para crescimento e isolamento


GAR SANGUE Base rica; timas condies de crescimento; Formao de halos de hemlise ntidos, teis para a diferenciao de Streptococcus spp. E Staphylococcus spp; FUNO Usado para o isolamento de microrganismos no fastidiosos; Verificao de hemlise dos Streptococcus spp. e Staphylococcus spp;

Meios para crescimento e isolamento


GAR CLED CYSTINE LACTOSE ELECTROLYTE DEFICIENT Microrganismos presentes em amostras urina; A deficincia de eletrlitos inibe o vu de cepas de Proteus sp; FUNO Isolar e quantificar microrganismos Gram positivos, Gram negativos e leveduras;

Meios para crescimento e isolamento


CALDO BHI BRAIN HEART INFUSION Nutrientes de crebro e corao, peptona e dextrose; A peptona e a infuso so fontes de nitrognio, carbono, enxofre e vitaminas; A dextose um carboidrato que os microrganismos utilizam para fermentao; Funo Cultivo de estreptococcos, pneumococos, meningococos, enterobactrias, no fermentadores, leveduras e fungos; Pode ser utilizado na preparao do inculo para teste de susceptibilidade aos antimicrobianos; Realizao de teste de coagulase em tubo; Teste de crescimento bacteriano a 42 e 44C;

Meios para crescimento e isolamento


LWENSTEIN JENSEN A base do meio constituda por ovos integrais, o que permite amplo crescimento das Micobactrias; FUNO Isolamento primrio das micobactrias;

MEIOS PARA PROVAS DE IDENTIFICAO


GAR CITRATO SIMMONS Verifica a capacidade da bactria de utilizar o citrato de sdio como nica fonte de carbono; Sais de amnia alcalinizando o meio; FUNO Diferenciar gneros e espcies de Enterobactrias e no fermentadores.

MEIOS PARA PROVAS DE IDENTIFICAO


GAR BLE-ESCULINA Capacidade de bactrias hidrolisarem esculina na presena A esculina um derivado glicosdico da cumarina; A esculina incorporada em um meio contendo 4% de sais biliares; As bactrias Bile-Esculina POSITIVAS biliares;. crescem presena de sais bile;

A hidrlise da esculina no meio resulta na formao de glicose e esculetina; A esculetina reage com ons frricos (fornecidos pelo composto inorgnico do meio - o citrato frrico), formando um complexo negro; FUNO Identificao dos Enterococcus spp., que so Bile-Esculina positiva;

MEIOS PARA PROVAS DE IDENTIFICAO


GAR FENILALANINA Verifica a capacidade da bactria de produzir cido fenilpirvico a partir da fenilalanina por ao enzimtica; FUNO Diferenciar gneros e espcies de enterobactrias;

MEIOS PARA PROVAS DE IDENTIFICAO


GAR TSI TRIPLO ACAR FERRO Este meio contm trs acares: 0,1%glicose, 1,0% lactose, 1,0% sacarose, vermelho de fenol para deteco da fermentao de carboidratos e sulfato de ferro para deteco da produo de sulfato de hidrognio (indicado pela cor preta na base do tubo); A fermentao indicada pela mudana da cor do indicador de pH de vermelho para amarelo. O gar fundido deixado solidificar, formando uma superfcie inclinada; Essa configurao origina duas cmaras de reao dentro do mesmo tubo; A poro inclinada ou bico, exposta em toda sua superfcie ao oxignio atmosfrico, aerbia. A poro inferior, denominada profundidade ou fundo, est protegida do ar e relativamente anaerbia; FUNO Diferenciar bacilos Gram negativos com base na fermentao de carboidratos, produo de sulfato de hidrognio e gs.

MEIOS PARA PROVAS DE IDENTIFICAO


TSI - LEITURA
Reaes pice/base: Prpura/amarelo = fermentao apenas da glicose (lactose e sacarose negativos); Amarelo/amarelo = fermentao da glicose + lactose e/ou sacarose (2 ou 3 aucares); Presena de gs (CO) = bolhas ou meio fragmentado; HS positivo = presena de precipitado negro;

MEIOS PARA PROVAS DE IDENTIFICAO


GAR BASE URIA (CHRISTENSEN) Determinar a habilidade do microrganismo de degradar a uria em duas molculas de amnia pela ao da enzima urease; Positivo Funo BGN fermentadores e no fermentadores Staphylococcus e Haemophilus. na alcalinizao do meio;

MEIOS PARA PROVAS DE IDENTIFICAO


PARA PROVA DE GELATINASE Determina a habilidade do microrganismo de produzir enzimas proteolticas (gelatinases) que liquefaz/hidrolisa gelatina; FUNO Identificar e classificar bactrias fermentadoras, no fermentadoras e bacilos Gram positivos esporulados.

MEIOS PARA PROVAS DE IDENTIFICAO


PARA PROVA DE OXIDASE O teste de oxidase baseado na produo intracelular da enzima oxidase pela bactria; FUNO Ajuda caracterizar espcies de Neisseria, distingui no fermentadores (oxidase positiva) de enterobactrias (oxidase negativa); Diferencia algumas bactrias fermentadoras oxidase positiva entre elas Plesiomonas shigelloides, Aeromonas spp. e Vibrio spp.

Interpretao
Oxidase positiva: roxo, bactria no fermentadora; Oxidase negativa: fermentadora, fazer testes bioqumicos (enterobactrias);

MEIOS PARA PROVAS DE IDENTIFICAO


PARA TESTE DE MOTILIDADE A bactria mvel flagelo; Flagelos ocorrem nos bacilos Gram negativos, poucas formas de cocos so mveis; FUNO Determinar se o microrganismo o no mvel; Meios associados a outros testes: Meios SIM (Sulfato, Indol, Motilidade); MILI (Motilidade, Indol, Lisina); MIO (Motilidade, Indol, Ornitina) utilizados para testes enterobactrias;

MEIOS PARA PROVAS DE IDENTIFICAO


PARA PROVA DE TOLERNCIA AO NaCl 6,5% A tolerncia ao NaCl a 6,5% uma prova utilizada para verificar a capacidade de alguns microrganismos crescerem em presena do sal; Meio base utilizado o BHI caldo, que um meio nutritivo de uso geral, empregado para o cultivo de muitas bactrias; FUNO Separa Enterococcus spp., que so NaCl 6,5 % positivo dos demais Streptococcus spp., que so NaCl 6,5% negativos; Na identificao de bacilos Gram negativos no fermentadores.

MEIOS PARA PROVAS DE IDENTIFICAO


GAR MUELLER HINTON gar padronizado por Kirby e Bauer e pelo NCCLS que oferece condies de crescimento das principais bactrias; FUNO Meio utilizado para a realizao do teste de avaliao da resistncia aos antimicrobianos pelos mtodos de difuso em disco e E-test para enterobactrias; No fermentadores, Staphylococcus sp e Enterococcus sp.

Intepretao de entebactrias
Identificao das enterobactrias Meios IAL ou Rugai pice LTD: reao positiva = verde garrafa; Sacarose fermentao: reao positiva = amarelo. Base Glicose fermentao: reao positiva = amarelo; Produo de gs: reao positiva = formao de bolhas; Hidrlise da uria: rao positiva = azul intenso; H2S (gs sulfidrco): reao positiva = negra. Fundo Lisina: reao positiva = qualquer cor diferente de amarelo; Reao negativa = amarelo; Mobilidade: reao positiva = turvao do meio e ou qualquer crescimento alm da picada ou arrebentamento do meio. Tampa Indol: reao positiva = rosa ou vermelha aps a adio do reagente de Kovacs.

MEIOS PARA PROVAS DE IDENTIFICAO


Kit EPM-MILI Tubo EPM: aps o inculo, a tampa deve fica um pouco frouxa. Provas Glicose: prova positiva = base do tubo amarela; H2S: prova positiva = cor negra. Tubo MILI: aps o inculo, sua tampa deve ser bem fechada. Provas Mobilidade: reao positiva = crescimento para todos os lados; Indol: reao positiva = negra; Lisina: as enterobactrias capazes de descarboxilar a lisina presente no meio, primeiro descarboxila a glicose, onde reao positiva = qualquer cor diferente do amarelo; Reao negativo = amarelo claro. Uria: reao positiva = alcaliniza a base do tubo provocando viragem do indicador para azul.

MEIOS PARA PROVAS DE IDENTIFICAO


Prova do VM: testa a capacidade da bactria em produzir cidos orgnicos a partir da fermentao da glicose. Leitura 48 72 horas. VM: reao positiva = colorao avermelhada. Prova do VP: as bactrias utilizam glicose presente no meio liberando um produto que a acetona. VP: reao positiva: turvao.

MEIOS PARA PROVAS DE IDENTIFICAO


TSI Verifica se a bactria degrada carboidratos especficos incorporados ao meiocom ou sem produo de gs. Gs: positivo = formao de bolhas; H2S: positivo = negra. Resultados Vermelho o pice: fermentao apenas da glicose, lactose e sacarose negativa a base amarela. Amarelo o pice: fermentao da glicose, lactose e ou sacarose a base amarela.

MEIOS PARA PROVAS DE IDENTIFICAO


Caldo indol-uria Esse caldo tem por finalidade diferenciar as enterobactrias com base na capacidade de produo de indol e de hidrlse da uria. Interpretao dos resultados Uria positiva: reao alcalina = vermelha; Uria negativa = amarelo. Indol: reao positiva = anel avermelhado; Indol negativo = ausncia de cor avermelhada.

Testes necessrios para a identificao de rotina dos BNFs


Tubo de OFglicose (com vaselina); Oxidase; PYR; Lisina; Arginina; TSB para motilidade em lmina; Indol; Esculina; Disco de polimixina; Tubo com TSI; Placa de Mac Conkey; Tubo com gelatina; DNAse; Tubo com caldo NaCl 6,5%

COLORAES

Coloraes diferenciais
Reage de modo distinto em diferentes bactrias; Servem para diferenciar as bactrias; Ex.: Gram e BAAR;

BAAR
BACILOS LCOOL-CIDO-RESISTENTES; Coram fracamente pelo gram; cido miclico de parede; Circundados por uma parede celular hidrofbica; Resistem a descolorao; Misturas de lcool-cido usadas na identificao;

Colorao para cpsula


Chamada colorao negativa; Mtodo difcil; Durante o procedimento cpsula; lavagem retira

Colorao para cpsula


Cpsulas geralmente no aceitam corantes biolgicos; Tinta nanquim;

Colorao de esporos
Verde malaquita Lavagem; Safranina Bactria cora o restante da bactria; verde e rosa; corante primrio;

Colorao dos flagelos


Estruturas muitos pequenas; Procedimento delicado para colorao; Usa-se mordente e carbolfucsina; Aumenta o dimetro dos flagelos ao microscpio ptico; visvel

Recomendaes
Toda amostra potencialmente contaminada; Manipulao de material biolgico EPI; cabine

Procedimento com risco com respingos de segurana; No pipetar com a boca;

Recomendaes
No reencapar agulhas; Descartar em recipiente adequado; Material contaminado deve ser descontaminado antes do descarte; Determinar rea limpa e contaminada;

Recomendaes
Limpar e desinfetar todas as reas de trabalho; Manter bancadas organizadas; No estocar material contaminado; Tirar jaleco quando sair do setor;

Recomendaes
Lavar as mos sempre; Separar materiais em sacos de lixo; Todos os reagentes identificados;

Recomendaes
Ter manual de procedimento; Estocar inflamveis local adequado;

Acidentes
Sempre pedir ajuda; No omitir fatos; Material biolgico 2%; superfcie hipoclorito

Acidentes
Material biolgico 70%; pele sabo e lcool

Material biolgico no jaleco

lavagem;