Prof.

Aelson Brum

ESPECTROFOTOMETRIA

Verso Disponvel em www.farmabio.k6.com.br

ESPECTROFOTOMETRIA

Type of Radiation gamma-rays x-rays ultraviolet visible

Frequency Range (Hz) 1020-1024 1017-1020 1015-1017 4-7.5x1014

Wavelength Range <10-12 m 1 nm-1 pm 400 nm-1 nm 750 nm-400 nm

Type of Transition

nuclear inner electron outer electron outer electron

near-infrared
infrared microwaves radio waves

1x1014-4x1014
1013-1014 3x1011-1013 <3x1011

2.5 um-750 nm
25 um-2.5 um 1 mm-25 um >1 mm

outer electron molecular vibrations

molecular vibrations molecular rotations, electron spin flips* nuclear spin flips*

*energy levels split by a magnetic field

Intervalo de (nm) 400 - 435 435 - 500 580 - 595 580 - 595 595 - 610 610 - 750

Cor Violeta Azul Verde Amarelo Laranja Vermelho

Cor complementar Verde-amarelo Amarelo Vermelho Azul Azul esverdeado Verde

ABSORO DE LUZ PELA MATRIA

luz E = h

Molcula

Absoro: aumenta a energia da molcula

Estado fundamental Estado excitado

TRANSMITNCIA
Quando uma amostra absorve luz, o poder radiante (Po) do feixe de luz diminudo

Poder radiante: Energia/unidade de tempo/unidade de rea

do feixe de luz (W/m2)
Fonte de Luz
P < Po

Selector de (monocromador)
luz monocromtica um nico

Po

Amostra
b

Detector

Transmitncia (T): Frao original da luz que passa pela amostra

T = P/Po 0T1 % T = T.100 0 %T 100%

Absorbncia (A)

A = log Po/P = log 1/T = - log T

Ex: Ausncia de absoro P = Po T = 1 A = 0 90% de luz absorvida 10% transmitida P = Po/10 A = 1 LEI DE BEER Absorbncia diretamente proporcional concentrao da espcie absorvedora de luz A = .b.c A = absorbncia (adimensional) b = caminho tico (cm) c = concentrao (mol.L-1) = absortividade molar (mol-1.L.cm-1) caracterstico de cada substncia em cada

ESPECTROFOTMETRO

ESPECTROFOTMETRO
Fonte de Luz Selector de (monocromador)
luz monocromtica um nico

P < Po

Po

Amostra
b

Detector

Porta-amostras Cubetas Vidro (visvel) Quartzo (UV)

Pr-requisitos fundamentais alta intensidade de emisso numa dada regio espectral distribuio espacial uniforme da radiao emitida estabilidade Caractersticas 1.1. Lmpada de Tungstnio - REM contnua entre 350 e 1300 nm

1.2. Lmpada de hidrognio - Espectro contnuo em UV, com descarga de H2 ou D2 - min: 200 nm para janela de quartzo e 185 nm para janela de slica fundida - >450 nm - espectro descontnuo
A lmpada de deutrio aproximadamente 3 x mais intensa que a de H2 1.3. Lmpada de Xennio - intensidade no UV e VIS

1. Tungstnio (2500 K) 2. Tungstnio (3500 K) 3. Deutrio ou hidrognio 4. Xennio

Seleo da Faixa Espectral

So dispositivos para selecionar o a partir da radiao emitida pela fonte: 2.1. Filtros pticos : so utilizados nos colormetros para selecionar uma regio espectral desejada. Consistem em uma pelcula delgada de gelatina com diferentes corantes, ou em lminas de vidro colorido. Isolam faixas espectrais relativamente largas 2.2. Prismas : Os prismas de vidro so utilizados na regio do visvel. Para uma regio abaixo dos 400 nm so necessrios prismas de quartzo ou de slica fundida. A seleo do comprimento de onda disperso da luz incidente em um determinado ngulo do prisma.

Monocromadores 2.3. : isolam faixas espectrais mais estreitas. Quanto mais estreita a faixa espectral, mais a condio de trabalho se aproxima da ideal, pois a lei de Beer estritamente vlida para radiaes monocromticas.

ESPECTROFOTOMETRIA MONOCROMADOR

Partes que compe um monocromador:

Fenda de entrada Lente colimadora Um elemento de disperso (Prisma ou rede de difrao) -Uma lente para focar a radiao dispersa Uma fenda de sada para isolar a poro desejada do espectro.(seleciona o comprimento de onda)

Rede de difrao: Este mtodo de disperso utiliza o princpio da difrao da radiao por uma srie de ranhuras finas, paralelas, pouco espaadas, marcadas numa superfcie. O princpio da operao da rede de difrao a diferena do caminho ptico das diversas partes de uma frente de onda que incide obliquamente sobre as superfcies individuais das ranhuras da rede.

ESPECTROFOTOMETRIA FOTOTUBO

Transforma o sinal luminoso em sinal eltrico. 1 Fotoclula: Um ctodo de grande superfcie recoberto com uma camada de metal fotoemissor como por exemplo Na, Ag-K, Sb-Cs, e nas proximidades deste ctodo, fica centrado um fio que funcionar como nodo e receber os eltrons produzindo o sinal. Quem provoca a emisso dos eltrons a luz incidente. 2 Tubo fotomultiplicador: Funciona de forma semelhante contudo o sinal ampliado devido uma srie de dnodos - efeito cascata - que so colocados numa srie crescente de potencial. Problemas ligados aos detectores: Fadiga e aquecimento

monocromador

ESPECTROFOTOMETRIA

Origem do espectro de absoro

As molculas absorvem radiao porque elas tm eltrons que podem ser excitados a nveis mais altos de energia; Energia absorvida pode ter () no visvel ou no UV; Tambm ocorrem variaes de energia vibracional dos tomos da molcula e da energia rotacional; Portanto, o resultado uma banda de absoro comparativamente larga!

Origem do espectro de absoro

Os eltrons podem ser classificados em: 1 Que esto em uma ligao simples covalente (ligao ), fortemente ligados, exigem radiao de alta energia; 2 Esto localizados em tomos (pares livres ou isolados), por exemplo o cloro, oxignio e o nitrognio; 3 Eltrons em ligao dupla ou tripla (orbitais ), que podem ser excitados com certa facilidade. O espectro de absoro ocorre em maiores!!

Origem do espectro de absoro

A absoro de uma dada substncia afetada se ela contm um cromforo. O cromforo um grupo funcional que tem absoro caracterstica na regio do UV/Visvel; Possuem duplas e triplas ligaes!!!! Deficincia de eltrons!!! Compostos saturados no mostram absoro seletiva nas regies do UV/Visvel; As duplas conjugadas produzem absoro a maiores comprimentos de onda no UV (200 a 300 nm);

Origem do espectro de absoro

Se o sistema se estende para longe (), a

absoro entra na regio do visvel e resulta

em cor! O -caroteno, com 11 duplas, absorve em 420 a 480 nm, sendo portanto verde amarelado na aparncia.

AUXCROMOS