Mdulo 1: Morfofisiologa funcional Laboratorio de Fisiologa n1 SEMINARIO: Principios de organizacin y mtodos de estudio. De las clulas a los sistemas corporales.

TEST ELISA
Ensayo por Inmunoabsorcin ligado a enzimas

Integrantes:

Gonzalo Ulloa Pamela Ureta Gabriela Zegarra

Ensayo por Inmunoabsorcin ligado a enzimas

Infeccin o enfermedad autoinmune

Fundamento Fisiolgico
Anticuerpo y Sistema inmune humoral Sintetizados por linfocitos B Identificacin y neutralizacin de elementos extraos Regin hiper-variable y diversidad Reaccin de complementariedad Eptope (Ag) Partopo (Ac) Mltiples enlaces no covalentes

http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Anticuerpo.svg

Especificidad, rapidez, espontaneidad y reversibilidad

Ensayo por Inmunoabsorcin ligado a enzimas

Sustrato Enzima

Basado en: Interaccin Antgeno-Anticuerpo

Elevada especificidad de los Anticuerpos La alta actividad de algunas enzimas
TEST -

Conjugado especfico

Anticuerpo

Antgeno TEST +

The Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay (ELISA); http://en.impactmalaria.com/iml/cx/en/layout.jsp?cnt=8E0526D1-4C12-4811-9A20-9859143FCECA

http://www.ferato.com/wiki/index.php/Test_de_Elisa

Antgeno/Anticuerpo marcados con una enzima Conjugado con actividad inmunolgica y enzimtica Actividad enzimtica sobre el substrato = cambio de color Espectrofotmetro colormetro

Clasificacin y Modalidades

Homogneos
Fase lquida

Heterogneos
Soporte slido Inmovilizacin del inmunorreactante

Test ELISA - HETEROGNEOS

Deteccin de Antgenos

Deteccin de Anticuerpos

ELISAs sndwich

ELISAs indirectos

Anticuerpos marcados

ELISAs Sndwich
1. Fijacin al soporte insoluble de anticuerpos especficos
Adicin de la muestra Adicin de anticuerpos especficos conjugados con una enzima Adicin del sustrato Lectura visual o colorimtrica

2. 3.

4. 5.

http://www.cybertesis.edu.pe/sisbib/2004/rosas_dt/html/sdx/rosas_dt.html

ELISAs Indirecto
1. Fijacin al soporte insoluble de antgenos especficos
Adicin de la muestra Adicin de anti-anticuerpos conjugados con una enzima

2. 3.

4.
5.

Adicin del sustrato

Lectura visual o colorimtrica

http://www.veterinaria.org/revistas/vetenfinf/vet_enf_inf_tripod/vetenfinftrip odcomar/5ELISA.htm

Deteccin de infecciones o enfermedades autoinmune

Limitaciones

Falso +
Presencia de anticuerpos

Falso Baja produccin de anticuerpos Paciente enfermo

Paciente sano

Mdulo 1: Morfofisiologa funcional Laboratorio de Fisiologa n1 SEMINARIO: Principios de organizacin y mtodos de estudio. De las clulas a los sistemas corporales.

Ensayo por Inmunoabsorcin ligado a enzimas

Bibliografa:
Soluciones ELISA, Protocolo y Tcnica;Javier Albadalejo, Cultek. http://www.cultek.com/inf/otros/soluciones/Soluciones-ELISAprotocolos.pdf Inmunologa e Inmunoqumica, Fundamentos; Ricardo Anbal Margani, 5ta edicin. Captulo 38 ELISA, pginas 798-820.

TEST ELISA