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TCNICAS IMUNOLGICAS

Parte 1

IMUNODIAGNSTICO: Diagnstico laboratorial por meio de tcnicas imunolgicas. Busca: Anticorpo ou Antgeno no organismo do paciente
por meio de ensaios de Precipitao, Aglutinao, Fixao de complemento, Neutralizao ou Imunoensaios que utilizam sinalizadores da interao Ag-Ac com conjugados ligantes, como Imunofluorescncia, Radioimunoensaio, Imunoenzimticos, Imunofluorimtricos e Quimioluminiscncia

Outros testes: Hipersensibilidade a Antgenos: Reaes intradrmicas e percutneas.

INTERAES ANTGENO-ANTICORPO

[Ag] + [Ac ] [Ag-Ac] KA= [Ag-Ac] ([Ag] + [Ac])

KA

KA= Constante intrnseca de associao

Reatividade Cruzada
Quando os antgenos so estruturalmente relacionados podendo ocorrer a reatividade de um anticorpo com outro epitopo antignico. Reaes Cruzadas
Anti-A Ab Anti-A Ab Anti-A Ab

Ag A

Ag B Epitopo compartilhado

Ag C

Epitopo similar

FORAS QUE ATUAM NAS INTERAES ANTGENO/ANTICORPO

Molculas que apresentam grupos laterais inicos de cargas opostas que se atraem fortalecendo a interao Ag-Ac.

Foras fracas que ocorrem devido proximidade fsica entre as molculas.


A mais fraca das ligaes. Ocorrem entre o ncleo de um tomo e a nuvem de eltrons de outro formando dipolos que se atraem.

Atua em molculas no polares facilitando a aproximao, os choques moleculares e as ligaes.

Avidez
So as foras totais de interao entre um antgeno com o anticorpo

Keq =

104
Afinidade

106 Avidez

1010 Avidez

Metodologias que utilizam reagentes no marcados:


Precipitao Aglutinao Hemlise (Fixao de Complemento)

Metodologias que utilizam reagentes marcados


Radioimunoensaios ELISA Imunofluorescncia Western Blotting

Citometria de Fluxo

IMUNOPRECIPITAO

Zona de equivalncia: AgAc se ligam equimolarmente formando uma rede estvel. Excesso de antgeno: Os complexos podem ser dissolvidos quando h excesso de Ag pois o Ac fica livre para se ligar a novos Ag adicionados diminuindo a formao de complexos insolveis. Excesso de Ac: Ocorre reduo de imunocomplexos pois todo o Ag est precipitado e fica Ac livre no sobrenadante.

Pr-Zona

IMUNODIFUSO

Imunodifuso radial (Mancini)


Mtodo
Anticorpo no gel Antgeno no poo
Ac no gel
Ag Ag Ag Ag

Interpretao
Diameter2

Dimetro do anel proporcional concentrao do Ag

Quantitativo
Nveis de Ig

Ag Concentrao

Imunoeletroforese/Precipitao

Agglutinao/Hemaglutinao
Definio - testes que possuem como alvo um antgeno de natureza particulada
Aglutinina/hemaglutinina

Teste de aglutinao qualitativa


Ag ou Ac

AGLUTINAO

Fixao do Complemento
Metodologia
Antgeno misturado com o soro teste Complemento adicionado Eritrcitos recobertos com anticorpo so adicionados A quantidade de lise determinada

Ag
Ag

No Ag
Patients serum

Ag

INIBIO DA AGLUTINAO: TESTE DE GRAVIDEZ

AGLUTINAO EM LTEX: FATOR REUMATIDE


Fator Reumatide: Anticorpos que reconhecem eptopos presentes na frao cristalizvel (Fc) da molcula de IgG. A maioria destes Acs so da classe IgM porm pode-se encontrar tambm Acs IgA e IgG.
Teste: Visualizao de aglutinao das partculas de ltex revestidas pelo antgeno (no caso IgG humana ou de coelho)

Interpretao: Igs com atividade FR esto presentes em pequena quantidade e com baixa avidez no soro de amior parte das pessoas. No caso de artrite reumatide surge uma alta quantidade de FR de alta afinidade

Enfermidades em que o encontro de Fator Reumatide comum


Causas virais HBV, HCV, Mononucleose, influenza, AIDS, ps vacinao

Doenas auto-imunes

Artrite Reumatide, Lpus Eritematoseo sistmico, Esclerose sistmica, polimiosite, dermatomiosite, sndrome de Sjrgren, cirrose biliar, hepatite auto-imune, etc Aps irradiao ou quimioterapia

Neoplasias

Infeces bacterianas

Tuberculose, sfilis, hansenase, salmonelose, endocardite bacteriana subaguda, brucelose, borreliose Malria, esquistossomose, filariose, tripanossomase

Doenas parasitrias