BIOTECNOLOGA

Captulo 2

Biotecnologa

Aplicaciones tradicionales
La biotecnologa es la biologa aplicada
Enfoque moderno de la ingeniera gentica, de la tecnologa del ADN recombinante y el anlisis de las biomolculas.

Las aplicaciones tradicionales (histricas) se remontan a hace ms de 10.000 aos

El uso de la levadura para producir cerveza y vino en Egipto y en el cercano Oriente. El cultivo selectivo de plantas. La crianza selectiva de animales.

Ingeniera gentica
La ingeniera gentica se refiere a la modificacin del material gentico para alcanzar metas especficas. Los objetivos principales de la ingeniera gentica son: Aprender ms acerca de los procesos celulares, como la herencia y la expresin de los genes. Ofrecer una mejor comprensin y tratamiento de enfermedades, en particular los trastornos genticos. Generar ventajas econmicas y sociales a travs de la produccin de molculas biolgicas valiosas y de mejores plantas y animales para la agricultura.

ADN recombinante
La ingeniera gentica usa la tecnologa de ADN recombinante.
Empalme de genes o partes de genes de diferentes organismos.

El ADN recombinante puede transferirse a plantas y animales.

Los animales modificados se llaman transgnicos u organismos modificados genticamente (GMOs). La biotecnologa ms moderna incluye la manipulacin del ADN.

Reproduccin sexual
Debido al entrecruzamiento durante la meiosis, cada cromosoma en un gameto contiene una mezcla de alelos de ambos cromosomas paternos.
Por lo tanto, los huevos y la esperma contienen AND recombinante.

Transformacin
Las bacterias pueden capturar ADN del ambiente en forma natural (transformacin) e integrar los nuevos genes en el genoma (recombinacin).

Transformacin
Las molculas de ADN circulares pequeas (plsmidos) cargan genes suplementarios.
Los genes plsmidos podran permitir a las bacterias crecer en ambientes nuevos. Los genes plsmidos pueden aumentar la virulencia de las bacterias al crear una infeccin. Los genes plsmidos pueden entregar resistencia a las drogas antimicrobianas.

Transferencia viral del ADN

Ciclo de vida viral.
1. 2. 3. 4. La partcula viral invade la clula husped. El ADN viral se replica. Se sintetizan las molculas de protena viral. Las cras de los virus se ensamblan y revientan la clula husped.

Transferencia viral del ADN

Transferencia viral del ADN.
Los virus pueden introducir algunos genes de la clula husped en las partculas virales mientras se ensamblan. La infeccin de la nueva cdula husped inyecta genes del husped anterior, lo que permite la recombinacin.

La biotecnologa y las ciencias forenses

La tecnologa del ADN ha permitido a las ciencias forenses identificar vctimas y criminales a partir de una muestra biolgica.
La secuencia gentica de cualquier individuo humano es nica. El anlisis del ADN revela patrones que identifican a la gente con un alto grado de precisin.

Reaccin en cadena de la polimerasa

Los tcnicos forenses comnmente tienen muy poco ADN al cual realizarle anlisis. La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) produce virtualmente copias ilimitadas de una muestra muy pequeas de ADN.

Reaccin en cadena de la polimerasa

La PCR precisa de pequeos trozos de ADN (llamados iniciadores) que son complementarios a las secuencias de los genes a copiar. Una ejecucin de PCR es bsicamente la replicacin de ADN en un pequeo tubo de ensayo.
La secuencia del ADN, el iniciador, los nucleotidos y el ADN polimerasa se encuentran en la mezcla de reaccin.

Reaccin en cadena de la polimerasa

Los cuatro pasos de un ciclo de PCR:
1. Separacin de las cadenas de ADN
Se calienta el tubo de ensayo a 90-95 oC para separar el ADN en cadenas individuales.

2. Unin de los iniciadores

Se reduce la temperatura a 50 oC para permitir que los segmentos de ADN iniciadores formen pares de bases complementarias con las secuencias genticas originales por medio de la unin de hidrgeno.

Reaccin en cadena de la polimerasa

Los cuatro pasos de un ciclo de PCR:
3. Sntesis de cadenas nuevas de ADN en las secuencias originales
Se aumenta la temperatura a 70-72 oC donde el ADN polimerasa resistente al calor sintetiza ADN nuevo a partir de las secuencias de los iniciadores. Se repite el ciclo en forma automtica (por medio de una mquina de ciclo trmico) durante 20-30 ciclos, lo que produce miles de millones de copias de una secuencia de ADN original.

4. Repeticin del ciclo

Muchos cultivos se modifican genticamente Entre un tercio y tres cuartos del maz, el algodn y la soya que se cultiva en los Estados Unidos estn modificados genticamente.

Muchos cultivos se modifican genticamente Los cultivos de plantas se modifican comnmente para aumentar su resistencia a los insectos y los herbicidas.
Los cultivos resistentes a los herbicidas resisten la aplicacin de qumicos que eliminan la mala hierba. El gen Bt (de la batera Bacillus thuringiensis) pueden sacarse de las plantas para producir protenas que matan a los insectos en los cultivos.

Clonacin del gen deseado

La modificacin gentica de una planta comienza con la clonacin gentica.
1. El gen deseado es primero aislado del organismo que lo contiene.
El gen deseado podra alternativamente sintetizarse en el laboratorio. 2. El gen luego se inserta en un crculo de ADN pequeo llamado plsmido el cual se replica asimismo en forma autnoma en las clulas bacteriales.

Las enzimas de restriccin cortan el ADN

Una secuencia de ADN (por ejemplo, un gen) puede ser retirado de un cromosoma usando enzimas especiales. Las enzimas de restriccin son ncleos que cortan el ADN en una secuencia especfica de nucleotidos.

Las enzimas de restriccin cortan el ADN

Las enzimas que efectan cortes escalonados con bordes pegajosos son las ms tiles en la clonacin de genes.

Unin de fragmentos de ADN

Los bordes pegajosos permiten la unin de un fragmento de ADN con otro fragmento complementario.
El gen Bt puede cortarse del cromosoma Bacillus con la misma enzima que se utiliza para cortar el plsmido. El borde del fragmento de gen Bt puede ser el par base de los bordes pegajosos del plsmido abierto y agregarle el gen al ciclo plsmido.

Los plsmidos se usan para insertar genes

El plsmido Ti del Agrobacterium tumefaciens es fundamental para la transferencia de genes a los cromosomas de una planta. La agrobacteria infecta las clulas de la planta e inserta su pequeo plsmido Ti en un cromosoma de la planta en el ncleo.
Se pueden desactivar los efectos patgenos de ciertos genes plsmidos Ti que son causantes de tumores. Un gen que es insertado en un plsmido Ti es por lo tanto llevado hacia los cromosomas celulares de la planta en un proceso natural.

Plantas modificadas genticamente y medicinas

Se pueden insertar genes tiles a la medicina en las plantas, por ejemplo:
Algunas papas que han sido modificadas genticamente para producir virus inofensivos de la hepatitis B y de las protenas de E. coli, lo que estimula la respuesta inmunolgica al ser ingeridas. Se le podra aplicar ingeniera gentica a las plantas para producir anticuerpos humanos, lo que proporcionara una inmunidad pasiva frente a infecciones microbianas con solo comer la planta.

Animales modificados genticamente

Los animales transgnicos (modificados genticamente o GM) pueden ser sometidos a ingeniera gentica al incorporarles genes en los cromosomas de un huevo fertilizado. Es difcil crear animales transgnicos saludables.
Se han insertado genes de hormona de crecimiento en cerdos y en algunas especies de pescados pero solo se han observado algunas anomalas.

Los animales como las ovejas podran someterse a un proceso de ingeniera para producir protenas importantes desde el punto de vista mdico en su leche.

El proyecto del genoma humano

Hallazgos:
El genoma humano contiene ~25.000 genes. Se han descubierto genes nuevos, incluyendo muchos que se relacionan con enfermedades. Se ha determinado la secuencia nucletida de todo el ADN de todos nuestros genes, lo que se llama el genoma humano. Los genes se componen de un 2% de todo el ADN.

El proyecto del genoma humano

Aplicaciones:
Mejores diagnsticos, tratamientos y curas de trastornos o predisposiciones genticas. La comparacin de nuestro genoma con los de otra especie clarificar las diferencias genticas que nos ayudan a ser humanos.

Diagnstico de desrdenes hereditarios

Los padres potenciales pueden saber si son portadores de un trastorno hereditario a travs de un examen. Los aleles de los genes defectuosos son diferentes de los genes normales y funcionales en la secuencia nucleotida. Se utilizan dos mtodos para detectar un alele defectuoso en una muestra de ADN de una persona.
Anlisis de fragmentos de enzimas de restriccin. Identificacin de aleles defectuosos con sondas ADN.

Anlisis de fragmentos de enzimas: la restriccin Antes del PCR, las diferencias de los fragmentos de restriccin se usaban para generar huellas digitales de ADN en las ciencias forenses. El anlisis RFLP en la actualidad se usa para identificar la presencia del gen de la anemia drepanoctica en el ADN de una persona.

Tratamiento de enfermedades
Tratamientos que usan la tecnologa de ADN.
Administracin de protenas para tratar una enfermedad, pero no para curarla. La insulina humana producida a bajo costo y gran velocidad en bacterias recombinantes para la diabetes. La hormona del crecimiento y los factores coagulantes producidos en forma segura y econmica en bacterias recombinantes.

Tratamiento de enfermedades
Tratamientos que usan la tecnologa de ADN:
Reemplazo de genes defectuosos para posiblemente curar un desorden gentico. El reemplazo del alele defectuoso de la fibrosis qustica al usar un virus para llevar una secuencia gentica funcional a las clulas pulmonares de un paciente. El reemplazo de clulas de ADN de la mdula espinal por genes funcionales en pacientes con inmunodeficiencia combinada severa (SCID).

Organismos modificados genticamente en la agricultura

La intencin detrs de reproducir o modificar genticamente a las plantas o el ganado es hacerlos ms productivos, eficientes o tiles. La modificacin gentica difiere de la reproduccin selectiva (biotecnologa tradicional).
La ingeniera gentica es mucho ms rpida. La ingeniera gentica puede transferir genes entre diferentes especies. La ingeniera gentica puede producir genes nuevos nunca antes vistos en la tierra.

Organismos modificados genticamente en la agricultura

Beneficios de las plantas modificadas genticamente:
Los cultivos transgnicos reducen las aplicaciones de pesticidas, ahorran combustible, mano de obra y dinero. Las plantas modificadas genticamente pueden venderse a precios ms bajos debido a los ahorros en su cultivo. Los cultivos modificados genticamente pueden entregar mayores cantidades de vitaminas.
Por ejemplo, el arroz dorado que produce vitamina A.

Objeciones cientficas frente a los GMOs

Temas de seguridad al comer GMOs.
Podra ser peligrosa para los humanos la ingestin de la protena Bt en plantas resistentes a los insectos? Sera peligroso comer un pescado transgnico que produce hormonas de crecimiento extras? Podran los cultivos modificados genticamente causar reacciones alrgicas?
El Departamento de Agricultura de los Estados Unidos monitorea los alimentos GM en busca de potenciales alrgenos.

Objeciones Cientficas Frente a los GMOs

Temas de seguridad al comer GMOs. Los estudios toxicolgicos de las plantas GM (2003) concluyeron que la ingestin de los cultivos transgnicos actuales no constituye un riesgo significativo para la salud. Riesgos ambientales planteados por los GMOs. El polen de las plantas modificadas puede llevar genes GM a la poblacin de plantas silvestres. Podran los genes resistentes a los herbicidas transferirse a especies de hierbas, creando sper hierbas?

Objeciones cientficas frente a los GMOs

Riesgos ambientales planteados por los GMOs.
Podran los peces modificados genticamente reducir la biodiversidad en la poblacin salvaje si escaparan?
Una diversidad reducida de peces salvajes los hace ms susceptibles a brotes de enfermedades catastrficas.

Los Estados Unidos descubrieron que no tienen los sistemas adecuados para monitorear los cambios en un ecosistema forjado por GMOs (Academia Nacional de Estudios Cientficos 2003).

El genoma humano
Debiera entregrsele a los padres la informacin de la salud gentica de un feto nonato? Debiera permitrsele a los padres seleccionar los genomas de su descendencia?
Los embriones de la fertilizacin in vitro normalmente se prueban antes de su implantacin. Se descartan muchos embriones no usados.

Debiera preemitrsele a los padres disear o corregir los genomas de su descendencia?