REPLICAO DO DNA

(enzimologia em procariotos)

A reviso do modelo de Watson & Crick e replicao semi-conservativa

Cromossomos Arlequim

A replicao e E. coli tem uma origem apenas

Autoradiografias feitas por J. Cairns (1963) em DNA de E. coli tratadas com meio contendo Trimidina comprovaram que a replicao semi-conservativa, bidirecional e que o DNA e circular

Nos eucariotos so abertos vrias "bolhas de replicao" ou replicons

A replicao

Se replicao semi-conservativa e a polimerizao deve ser sempre no sentido 53 Mas o DNA antiparalelo ou seja, uma fita ocorre no sentido 5 3 e a outra no sentido 3 5 Como ocorre ento a replicao nos dois sentidos? (figura)

A forquilha de replicao em E. coli

As enzimas e suas aes

Polimerases: todas podem tanto adicionar como remover nucleotdeos, somente no sentido 5 3. Quando removem do final do filamento so chamadas de exonucleases. Se os removem em algum outro lugar do filamento, so chamadas de endonucleases). A remoo feita no sentido inverso, ou seja 3 5)

DNA Polimerase em E. coli (procariotos)

Tipo
DNA Polimerase I

Funo
Catalisa o crescimento da cadeia no sentido 53 Atividade de exonuclease 35 e 53 Preenche pedaos pequenos de DNA durante a replicao e processo de reparo Polimerase alternativa de reparo, mas tambm pode replicar DNA quando o filamento molde danificado

DNA Polimerase II

DNA Polimerase III

Catalisa o crescimento da cadeia no sentido 53. a polimerase primria durante a replicao normal do DNA

A replicao do filamento leader (replicao contnua)

Protenas de iniciao identificam a origem da replicao e participam da ligao da DNA helicase ao DNA A protena de iniciao acoplada DNA helicase abre o DNA na juno Y. As pontes de H se rompem e a molcula se abre como um zper e se desespiraliza e a ela unem-se a primase e outras protenas (DNA helicase + primase + outras protenas = primossomo). As fitas se mantm separadas durante a replicao graas ao de uma protena a Single-strand binding proteins - SSB

A replicao do filamento leader (cont.)

A primase (que uma RNA-polimerase) constri o primer de RNA em uma regio no coberta pelas SSB. A topo isomerase alivia a tenso da espiralizao provocada pela abertura do DNA Ex. DNA girase A DNA polimerase (III) sintetiza as novas cadeias. Elas capturam os nucleotdeos, prontos com um trifosfato, os levam ao molde, retiram dois fosfatos e os ligam ao C 3 do nucleotdeo anterior. Elas vo polimerizando muito rapidamente (100.000 nucl./min). Outras DNA polimerases preenchem as falhas e corrigem erros.

A replicao do filamento lagging (replicao descontnua)

Os Fragmentos de Okazaki (complementam o filamento lagging) formado um primer de RNA pela enzima Primase Os primers so continuados pela DNA polimerase III at o primer do prximo fragmento de Okasaki. DNA polimerase I retira o primer de RNA e completa o pedao com nucleotdeos corretos Os fragmentos so ligados pelas DNA ligases.

Replicao contnua x descontnua em E. coli (procariotos)

(para a animao)

O modelo replissomo

Duas DNA polimerases III ficam unidas e trabalham conjuntamente, a helicase e a primase movem-se ao longo do DNA. O filamento leading alimentado imediatamente pela polimerase, enquanto o filamento lagging no complementado pela polimerase at que um primer seja colocado sobre o filamento. Isto significa que um longo pedao de DNA fica aberto durante o processo e que a replicao que ocorre primeiro no filamento leading enquanto a do filamento lagging ocorre em pulsos (ver animao prxima do real).

A replicao em eucariotos

Nos eucariotos existem outras DNA polimerase anlogas s dos procariotos

DNA Polimerase em eucariotos Funo
DNA Polimerase Replicao do cromossomo nuclear (fita lagging)

DNA Polimerase

Reparo de DNA no preenchimento de espaos do cromossomo nuclear. Anloga a Polimerase I

Replicao de DNA mitocondrial Replicao do filamento leader a da lagging do cromossomo nuclear Reparo do DNA do cromossomo nuclear

DNA Polimerase DNA Polimerase DNA Polimerase

DNA Polimerase

Aparentemente reparo de DNA

A replicao em eucariotos (cont.)

Nos fragmentos de Okasaky, os primers de RNA so removidos por uma Rnase que complementado por uma polimerase de reparo. A finalizao da replicao feita com a formao de estruturas complexas no topo do cromossomo, os telmeros (ver animao do CD) Os telmeros so replicados com a ajuda das telomerases (animao) Sugesto de vdeo par ver aps a aula sobre telomero e telomerase e suas implicaes em doenas e envelhecimento http://video.google.com/videoplay?docid=4557284417806796 911&q=telomerase&total=4&start=0&num=10&so=0&type=s earch&plindex=0

O funcionamento da telomerase

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