Mutao e

Reparao
do DNA
Aspectos Conceituais e
Rotas Metablicas
Prof. Antonio Mrcio Teodoro Cordeiro Silva, M.Sc.
Mutao e Reparao
do DNA
Aspectos Conceituais
e Rotas Metablicas
Prof. Henrique Santana Costa, M.Sc.
Mutao
Mutaes modificao sbita e hereditria no conjunto gnico de um organismo
no explicvel pela recombinao da variabilidade gentica pr-existente.

Mutante organismo possuidor de uma forma alterada como resultado da presena
de uma mutao.

# Tipos

aneuploidias mudanas no nmero cromossmico.

aberraes cromossmicas mudanas grosseiras na estrutura dos
cromossomos.

mudanas dos genes individuais.


1. Atualmente, o termo mutao tem sido utilizado quando da presena de
alteraes detectadas em nvel de genes individuais.
Mutao
Mutao
# Geralmente, organismos portadores de uma mutao num determinado gene
apresentam problemas em sua sobrevivncia (sendo, assim, eliminados por
seleo natural).

# Contudo, nem toda mutao resulta numa conseqncias deletria para seu
portador.

# mutao fonte bsica de toda variabilidade gentica (matria-prima para a
evoluo)

Sem a mutao, todos genes existiriam apenas em uma forma.

mutaes espontneas resultam de funes celulares normais ou interaes
aleatrias com o ambiente.

podem ser aumentadas pelo tratamento com determinados compostos (agentes
mutagnicos mutaes induzidas)

atuam diretamente no DNA.
Mutao
Sntese de Protena
Mutao pode alterar a
sntese protica
Mutaes
Classificao Geral
Mutao Cromossmica: Nmero ou Estrutura
Mutaes Gnicas: Genes individuais
A mutao a fonte bsica de toda variabilidade gentica, fornecendo
a matria-prima para a evoluo
Mutao: Bom ou Ruim?
Processo Evolutivo
1. Recombinao: Rearranjos Novas combinaes
2. Seleo Natural Preserva as combinaes mais adaptadas
3. Ausncia de Mutao Genes com apenas uma forma
Mutao como fonte de variabilidade
1 2 3
Classificao das Mutaes
1. Mutao espontnea
2. Mutao induzida
Mutagnese x Clastognese x Teratognese x Carcinognese
Quanto Natureza
Mutaes Cromossmicas
Conjunto de cromossomo de uma espcie
1. Monoploidia: n cromossomos
2. Diploidia: 2n cromossomos
3. Triploidia: 3n cromossomos
4. Poliploidia: mais de dois conjuntos
Euploidia
Nmero de cromossomos difere da espcie
1. Monossomia: 2n 1
2. Trissomia: 2n + 1
3. Nulissomia: 2n 2
Aneuploidia
Mutao
# Mutao de ponto modificao num nico par de base (substituio, adio ou
deleo)

mau funcionamento do sistema replicativo
mau funcionamento do sistema de reparo
interferncia qumica direta sobre uma das bases do DNA

# Mutao letal condicional letal num determinado ambiente (condies
restritivas)

Classes

Mutantes auxotrficos incapazes de sintetizar um metablito essencial
(aminocido, purina, pirimidina, etc.)

crescem e se reproduzem quando o metablito fornecido pelo meio (condio
permissiva)
no crescem quando o metablito est ausente (condio restritiva)
Mutao
mutantes sensveis temperatura crescero numa determinada temperatura

aumento da labilidade ao calor ou ao frio do produto gnico mutado.


mutantes sensveis ao supressor viveis quando um segundo fator gentico
(supressor) est presente - mas inviveis na ausncia deste.



# Mutaes transmitidas descendncia clulas germinativas

# Mutaes perpetuadas em clulas que descenderam da clula original na qual a
mutao ocorreu (podendo no afetar o organismo inteiro) clulas somticas
Rearranjos Cromossmicos
1. Inverses: Paracntricas ou Pericntricas
Rearranjos Cromossmicos
2. Deleo: Terminal ou Intersticial
Rearranjos Cromossmicos
3. Translocao: Recproca ou Robertisoniana
Rearranjos Cromossmicos
4. Duplicao x Replicao
Mutantes em nvel molecular
modificaes tautomricas flutuaes qumicas decorrentes de mudanas
nas posies dos tomos (purinas, pirimidinas, grupamento amino, anel
nitrogenado, etc.)

alteram o pareamento de bases normal.

# Envolvem a substituio de um par de bases por outro tipo mais comum de
mutao


# Transio substituio de uma purina por outra purina, ou de uma pirimidina
por outra pirimidina.
# Transverso substituio de uma purina por uma pirimidina ou vice-versa.


mutaes que modificam a estrutura da leitura envolve a adio ou deleo
de um ou alguns pares de bases.

alteram a estrutura de leitura de todas as trincas de pares de bases no gene depois
da mutao.
Mutao Molecular
Modificaes Tautomricas
Mutao em Nvel Molecular
A T T A
C G G C
A T T A

C G G C
Transio
Transverso
Taxas de Mutaes
procariotos 10
-5
a 10
-6
evento/locus/gerao (mutao espontnea)

eucariotos estimativa semelhante encontrada nos procariotos.


# mutaes silenciosas sem efeito aparente
# Hotspots stios de pares de bases mais
susceptveis mutao.



Envolvem a troca de bases do DNA mas no
causam a troca do aminocido presente na
protena correspondente.


Levam troca do aminocido, mas a
substituio no afeta a atividade da protena
(mutaes neutras).

Mutao em Nvel Molecular
Mutao em Nvel Molecular
Alterao do Quadro de Leitura (Frameshift)
Mutao em Nvel Molecular
Deleo
Mutao em Nvel Molecular
Insero
Mutao em Nvel Molecular
Sentido Trocado (Missense)
Mutao em Nvel Molecular
Sem Sentido (Nonsense)
Mutao em Nvel Molecular
Expanso de Repetio
Radiao
poro do espectro eletromagntico que contm comprimentos de onda menores e de maior
energia que a luz visvel (0,1m).


Tipos

ionizante raios X, raios gama e raios csmicos (teis no diagnstico mdico pelo fato de
poderem penetrar nos tecidos vivos).

no-ionizante luz ultravioleta.

No processo de penetrao, a radiao ionizante
colide com tomos da matria causando a liberao
de eltrons (formando radicais livres positivamente
carregados ons).


Quimicamente mais reativos quando comparados
tomos em seu estado estvel normal.

# a reatividade aumentada dos tomos presentes
nas molculas de DNA a base dos efeitos
mutagnicos da luz ultravioleta e da radiao
ionizante.
Mutao por Radiao
Radiao ionizante no envolve uma extenso de tempo.

# a mesma dosagem de irradiao pode ser obtida por um longo perodo de tempo, ou
uma alta intensidade num curto perodo.


# mutaes de ponto diretamente proporcionais dose de irradiao.

# Teoria da cintica de coliso nica toda ionizao tem uma probabilidade de
induzir uma mutao.
Mutao por Radiao
Radiao ionizante H
2
O H

+ OH


Radiao ionizante Efeito direto
Efeito indireto
Acidentes Radioativos
Aberraes Estruturais
Caritipo - Metfase
Mutao por Radiao
Radiao no-ionizante (luz ultravioleta) no possui energia suficiente para induzir
ionizaes.

# so absorvidos por purinas e pirimidinas (tornando-se mais reativas).

multicelulares atingem apenas camadas de clulas superficiais.
unicelulares potente agente mutagnico

Formao de hidratos de pirimidina e dmeros de pirimidinas.

# a relao entre a taxa de mutao e a dose de UV muito varivel, dependendo do tipo de
mutao do organismo e das condies empregadas.
Mutao por Radiao
Mecanismos de reparo do DNA
Um mutante sobrevive quando sua troca gentica no prejudicial ou, mais raramente,
benfica.


A maioria das mutaes, contudo, so desvantajosas impedindo a sobrevida celular.


mecanismos de reparo revertem os efeitos de processos mutagnicos artificiais ou naturais
sob o DNA.


muitos dos danos sofridos pelo DNA podem ser reparados porque a informao gentica
preservada em ambas as fitas da dupla-hlice.


a informao perdida em uma fita pode ser recuperada atravs da fita complementar
APLICAES PRTICAS DAS MUTAES
Apesar da maioria das mutaes tornarem o organismo menos adaptado e serem, portanto,
desvantajosas, h a possibilidade das mesmas desenvolverem novas caractersticas desejveis.


Mutantes induzidos de cevada, trigo, aveia, soja, tomate podem melhorar as linhagens
cultivadas.


resistncia ferrugem, maior produo, maior quantidade de protena, sementes sem
casca, ente outro.


elucidam as vias pelas quais os processos biolgicos ocorrem (isolamento e estudo das
mutaes nos genes que codificam enzimas envolvidas nas mais diversas atividades metablicas)


disseco de processos biolgicos
Reparao do DNA
Tipos de Reparao do DNA
1. Reparao por fotorreatividade enzimtica

2. Reparao de bases alteradas

3. Reparao por exciso de base

4. Reparao por exciso de nucleotdeos

5. Reparao de bases malpareadas

6. Sistema de reparao por resgate
Reparao por Fotorreatividade Enzimtica


# dmeros de pirimidina impedem a replicao e a expresso gnica


Fotoliase catalisa uma 2 reao fotoqumica, na presena de luz visvel, desfazendo a
mutao e refazendo as bases pirimdicas individuais.




ETAPAS


1 reconhecimento da enzima ao dmero na ausncia de luz.

2 aps a absoro de luz, energia fornecida para a converso do dmero em monmeros
de pirimidina.

3 dissociao da enzima do DNA.
Reparao do DNA
Reparao do DNA
Reparao por Fotorreatividade Enzimtica
Fotorreativao
1. Fotoliase reconhece e se liga ao dmero
2. Absoro de luz Converso em monmeros
Reparao do DNA
Reparao de Bases Alquiladas
Ao de enzimas especficas: O
6
-Metilguanina-metiltransferase

CH
3
-Cys-Enzima
No h meios de recuperar a enzima metilada (necessidade de novas enzimas para cada
grupamento metil removido).
Reparo por exciso


# A remoo de uma base defeituosa (ou no habitual) pode ocorrer a partir da:




clivagem da ligao base-acar (exciso de base)


inciso endonucleoltica nos dois lados da leso


liberao de nucleotdeos


preenchimento da regio pela ao da DNA-polimerase I e posterior ligao
Reparao do DNA
Reparao por exciso de base


# A citosina do DNA desaminada espontaneamente sendo, portanto, percebida pela uracil.


evento mutagnico potencial

formao de filamento apresentando pares de bases errneos (AU no lugar de GC)



Etapas de reparo

1. Hidrlise da ligao glicosdica entre uracil e as molculas de desoxirribose pela enzima
uracil-DNA-glicosilase

2. Liberao da base nitrogenada errnea (formao do stio AP)

3. Exciso da cadeia em regies adjacentes base perdida pela enzima AP endonuclease
Reparao do DNA
Reparao por exciso de base


Etapas de reparo


1. Hidrlise da ligao glicosdica entre uracil e as molculas de desoxirribose pela enzima
uracil-DNA-glicosilase

2. Liberao da base nitrogenada errnea (formao do stio AP)

3. Exciso da cadeia em regies adjacentes base perdida pela enzima AP endonuclease

4. Insero de citosina no local mutado pela enzima DNA-polimerase I

5. Ligao da fita corrigida pela enzima DNA-ligase
Reparao do DNA
Reparao do DNA
Reparao do DNA
Reparao por Exciso de Base
Reparo por exciso de nucleotdeos


Um dos mais importantes e gerais mecanismos de reparo (REN)


ETAPAS

1. Reconhecimento da leso

2. Inciso da fita lesada em ambos os lados da leso e a alguma distncia desta

3. Exciso do segmento (oligonucleotdeo) contendo a leso

4. Sntese de um novo segmento de DNA utilizando a fita no-danificada como molde

5. Ligao



# reao, a princpio, livre de erro
Reparao do DNA
Reparao do DNA
Reparao por Exciso de Nucleotdeo (REN)
1. Reconhecimento da leso
2. Inciso da fita lesada em ambos os lados da leso
3. Exciso do seguimento contendo a leso
4. Sntese do novo seguimento de DNA e Ligao

Reparao do DNA
REN: Sistema Uvr (E. coli)
ATP
Helicase 5 3
5 (8nt)
3 (4 a 5nt)
Exciso de 12 a 13nt
UvrD
Algumas bases incorretamente pareadas escapam da correo realizada pela DNA-
polimerase


# Remoo de bases mal pareadas Qual das fitas contm o erro? Qual das bases a
errada?


Um dos mais importantes e gerais mecanismos de reparo (REN) enzima de correo de
erro


ETAPAS

1. Reconhecimento da leso

2. Inciso da fita lesada em ambos os lados da leso e a alguma distncia desta

3. Exciso do segmento (oligonucleotdeo) contendo a leso

4. Sntese de um novo segmento de DNA utilizando a fita no-danificada como molde

5. Ligao


# sinal que direciona o sistema de exciso do erro exclusivamente para a fita recm-sintetizada
seqncias GATC prximas ao erro
Enzimas de correo de erro
Reparao do DNA
Sinalizao por metilao
de stios especficos
Reparao do DNA
1. Enzima de correo de erro liga-se
seqncia GATC no modificada e ao par de
bases mal pareadas da mesma fita de DNA.




2. Enzima de correo de erro remove o
segmento de DNA que inclui o erro da fita
que contm a seqncia GATC no metilada.




3. DNA-polimerase preenche a fenda,
substituindo a base mal pareada pela
correta.
# Modificaes na adenina da seqncia GATC por metilases faro com que a enzima de
correo no mais atue (no ocorrendo a exciso).
Existem ocasies em que o dano no DNA to extremo que no h maneira de os
mecanismos celulares de reparo corrigirem de forma precisa o erro


perda completa de um par de bases



# Qual base deve ser inserida no local lesado?




Sistema de Reparo Sujeito ao Erro



qualquer uma das bases inserida no local lesado a fim de garantir a continuidade do
processo replicativo

# possvel indutor mutagnico (3/4 75%)


Ainda assim, mais vantajoso para a clula a incorporao de uma base errada do que no
replicar mais.
Reparo sujeito ao erro
Reparao do DNA
N
6
-Metiladenina (GATC)
Padro de metilao
Replicao
Diviso Celular
Metilao
Metiltransferase de
Manuteno
Reparao de Bases Malpareadas
Reparao do DNA
Reparao de Bases Malpareadas: Sistema Mut
1. MutS pb malpareado

2. Reconhece stio do erro

3. MutL se liga a MutS

4. Deslizamento at GATC (ATP)

5. MutH Reconhece GATC

6. Cliva: GATC at o malpareamento

7. Remoo da fita clivada (SSB)

8. Sntese e ligao da nova fita
Reparao do DNA
Sistema de Reparao por Resgate
1. Dano impede a replicao

2. Cpias com lacuna no stio lesado

3. Resgata-se a seqncia da fita normal

4. A lacuna da fita lesada preenchida

5. A lacuna da fita normal repolimerizada
Concluso
Mutao: Alterao do cdigo gentico

Efeito benfico x Efeito malfico

Mutaes cromossmicas numricas/estruturais

Mutaes gnicas (Nvel molecular)

Mecanismos de reparao de erros

Sistemas enzimticos complexos que removem vrios tipos de erros

Manuteno da integridade do DNA