SOGIEDADE BRASILEIRA DE REPRODUGAO HUMANA,
—SaBaBaaEEEEEE
INSUCESSO EM F.I.V. POR PRESENCA DE FLORA
MICROBIANA EM SEMEN:
RELATO DE CASO.
LV.F. FAILURE FOR MICROBIAL FLORA IN SEMEN:
A CASE REPORT.
LOCAL DE TRABALHO: METERBABY - Reprodugio Humana
“arlos Gilberto Almodin
*specialista em Ginecologia ¢ Obstetricia
4ATERBABY: Av. Angelo Moreira da Fonseca, 3334
‘ele fax: (0646) 22-276,
7.500 - Umuarama - Parané
SPRODUGAO VOLUME 7 N*2- ABRIUJUNHO 1992 91 SOCIEDADE SRASILEIRA DE REPRODUGAO HUMANA
a
|
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i INTRODUGAO
[ee
Na procura de causas responsdveis pelo insucesso da
fertilizaigdo in-vitro, além naturalmente da falha na indugao
da_ovulagio, deficiéncia de manuseio dos gametas, e
dificiéncia nas condigdes ideais de manutengao e transfe-
réncia dos embrides, vem se somar a presenca de flora
comensal ou paiégena no sémen diminuindo a taxa de
fertilizagdo © consequentemente 0 sucesso.
Trabalhos de C. Huyser ¢ col. na Universidade Pre-
t6ria demonstram que antibioticoterapia profilitica dos
pacientes em programa de F.L.V. e as lavagens do sémen
Teduzem a concentracdo de germes presentes no swim-up.
A presenca de germes no preparado final nao interfere com
acapacitagdo espermética, mas sim na fertilizagdo e desen-
volvimento embrionério.
‘Temos como rotina do controle de qualidade do
nosso laborat6rio fazer aferigo do CO2, temperatura &
troca de gua da bandeja da incubadora uma vez por
semana, além de desenvolvimento de embrides de camun-
dongo e bovino. Apesar do controle de qualidade rigoroso
temos tido alguns casos de faléncia na fertilizagio sem
causa aparente. Nestes casos resolvemos incluir em nossa
rotina 0 diagnéstico bacteriano e/ou fiingico através de
'meios proprios e provas bioquimicas para evidenciagio de
possivel contaminagdo bacteriana ou fiingica na tentativa,
de encontrar sua origem.
RELATO DO CASO
M.CSS., 24 anos, esterilidade inaparente, fez uso de
anticoncepcional oral (Gynera) a partir do primeiro dia do
ciclo por 21 dias consecutivos quando foi interrompido..
Alguns dias apés retomou a clinica menstruada para
histerometria (7 cm) e prova de cateter de transferéncia
embrionéria calcando melhor 0 Tef-Cat. Seis dias apés a
interrupedo do anticoncepcional, iniciou indugio da ovula-
¢do com dois comprimidos por dia de citrato de clomifene
(Serofene), uma ampola de HMG de 1000 unidades
(Pergonal) em dias alternados, totalizando quatro ampolas,
e um comprimido de Decadron 0,5 mg & 22 horas diaria-
‘mente. No quinto dia de indugdo 0 marido iniciou 0 uso de
Vibramicina duas vezes aodia e manteve-seem abstinencia
sexual.
Paciente retomou a clinica no oitavo dia de indugdo
para avaliagdo da ovulagao e revelava colo uterino aberto
discretamente, com muco cervical finlante ¢ cristalino ¢ &
ecografia vaginal (Aparelho Kretz Combison 310) mostra-
vaovario direito com seis foliculos ¢ sete no ovério esquer-
do com medidas de 17 a23 mm em média. Neste dia foram
administradas 10,000 unidades de gonadotrofina coriénica
humana (Profasi 10.000) as 9,30 horas ¢ a colheita dos
o6citos realizada 34 horas apés.
No dia anterior & colheita foram colocados em incuba-
dora(Forma3159USA)uma placade cultura (Costar catélogo
3260 USA)com 5 ml de Ham F 10com hypoxanthine (Gibco
Laboratories, Grand Island, USA) suplementado com 7,5%
de sorode corto e sem antibistico, trés placas de culturacom
GPM (Serono SP), dois tubos de centrifuga (Costar catdlogo
3216) com 10 ml de Ham F 1G e GPM respectivamente
destinados ao swim-up, trés placas decultura (Costar catélogo
3035) com solugao de Dulbecco's Phosphate-Buftered Saline
(GIBCO Laboratories, Grand Island USA) para lavagem dos
oécitos € 20 mi de Dulbecco's Phosphate-Bulfered Saline
com 10 unidades de heparina s6dica por ml, destinados a
evitar formagao de codgulos.
No dia da colheita foram colocados dez tubos de
centrifuga contendo cada 1 ml de Dulbecco's com heparina
sob placa aquecida (Slide-Warmer modelo 26020), ¢ apés
lavagem vaginal com gua destilada e anestesia local para-
‘cervical com 10mide cada lado de xilocaina sem vasoconstritor
«esedago com tropofol (Diprivan), foi realizada colheita dos,
‘o6citos com agulha de aspiragao folicular (Cook catélogo
KDOPU-172801) conectada ao tubo de centrifuga contendo
Dulbecco's com heparina ¢ pressio negativa através de
seringa de 50 ml
O Iiquido folicular aspirado era transportado rapida- |
‘mente para laboratério anexo a salaciriirgicaeexaminadoem |
microscépio estereoscépio (Micronal) para localizagio dos
o6citos. Foram encontrados nove oécites que, apés lavagem
em Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline, trés odcitos foram
transferidos para placa de culturacom Ham F 10eseis para as
placas de cultura com GPM, ¢ colocados em incubadoraapés |
classificagdodo grau dematuridadedeacordocomaaparéncia |
do cumulus-ooforus, corona radiata, forma ¢ coloragao do
ooplasma através de microscépio invertido Olympus CK 2,
‘sob fluxo laminar (Veco do Brasil).
Os espermatozéides foram colhidos por masturbasio
Jogo apés0 término dacolheitaem bécherde borosilicatocom
capacidadede 100mlepreviamentelavadoem 4guadeionizada
€ bidestilada e esterilizado em calor. Ap6s liquefagdo a
temperatura ambiente por 30 minutos, foi realizada uma
contagem camara de Macklerconfirmandooresultadoanterior.
Foram preparados duas amostras swim-up, uma com Ham F
I0eoutraGPM, colocando-se I mldesémencuidadosamente
oo
EPRODUGAO VOLUME 7N°2- ABRILUUNHO 1992 92. SOGIEDADE BRASILEIRA DE REPRODUGAO HUMANA
‘no fundo de um tubo de centrifuga o qual jécontinha 2 ml de
‘meio de cultura e mantido em incubadora por uma hora para
haver a espermomigragdo. Apés esse tempo o sobrenadante
foi pipetado cuidadosamente (pipeta Costar catélogo 4011,
USA) ¢ transferido para outro tubo de centrifuga que, com a
0 de® ml de meio de cultura, foi centrifugado 2 300G por
ddez minutos, Retirado o sobrenadante e novamente com 2 ml
de meio. Apés segunda centrifugagao foram adicionados 0,5
mi de meio e mantido em incubadora por duas horas.
A inseminagio foirealizada seishorasapésacolheitasendo
colocados 100.000 espermatozsides méveis por oécito. Os
‘espermatozéices que sobraram foram mantidos na incubadora
para teste de sobrevivéncia, No momento da ferilizaco nova
classificagao dos oscitos foi realizada, observando-se dois oécitos
‘maduros, (cumulus-ooforusexpandido, corona radiata expandida
€ presenca de primeiro corpiisculo polar) & um odcito imaturo
(cumulus-ooforuscompactocom visualizaaodificldocoplasma,
corona radiata compacta e no visualizago de corpasculo polar)
naplacadeculturacom Ham F 10e quatro oscitos madurose dois
imaturos nas placas contendo GPM.
‘As placas somente foram examinadas novamente de-
zoito horasapésa fertlizagio revelandoaplacacom Ham F 10
sinal de contaminagao (tipo rede de fibrina) nao compativel a0
fungo (semethante a algodio mothado), oécitos sem sinal de
fentlizagao porém com aparéncia inalteradaeespermatozsides
vivos com movimentos répidos. As placas com GPM ¢ os
espermatozsides guardados para teste de sobrevivéncia nao
You-se dois oscitos nao fertlizados, dois o6citoscom segundo
corpisculopolar evidente porém com dificuldade de visualizar
pré-nticleo com certeza e dois odcitos com dois pré-nticleos
cada vis{veis faciimente. Os oécitos que estavamem Ham F 10
| foram transferidos para outra placa e uma amostra do meio
contaminado foi enviado para diagndstico bacteriolégico. As
placas com GPM foram mantidas inalteradas. Novo exame
realizado 24 horas apés revelou placas com Ham F 10 nova-
‘mente com caracteristicas tipo redede fibrinadensaas placas
de GPM sem sinal de anormalidade, porém no houve evolu-
‘gdo dos o6citos que estavam ferilizados. As placas com Ham
F 10 foram desprezadas e as placas com GPM, apés colheita
de amostra para diagnéstico bacteriolégico, foram mantidas
ainda por mais 24 horas ndo ocorrendo nenhum tipo de
alteragio, porém sem sinal evidente (mesmo ao microscdpio)
de contaminaciio, apds acompanhamento por 96 horas foram.
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