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Com 0 in'tuito de inVB'stig-'at um controte de q .. 'U8'lidad'e eiiciente el del beixo custo per« oteboretorlo

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desenvo ... ,'-·I','\I·B-=m·: -O·iS~~' U' vn '·'·B·'''· tee .aice d .. ··-'Q, controie de ou ~'9lld···:··<a'·,··~·,d·,·-:I··e':· etrs v'~s·: d e em brioes b'-o=-"N'/;n~~'D··-:S:C:- Se iscentos e··-

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vinte ,e·- ootsoocnos bo vine IS' torern espre .... -dosae O-,~t,A~;O!,'·:s'-' de ~'.Ia:·:'·IC···~'~ re'ir:a,d'os,imedl'atam,e!nteaip:c:-,Als·.·····QI

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CEP: ,87.5011'-'030 .. T'el,ef,ax'~ 1(0446;) 2,2, ",27164 UlmUla~qama ~, Pi,a;rana

N- -'016·=-·'-'119::·" 9-"~

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2'013.:.:

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clfico corn Ig-:::Ia-ilo-Ila's~:-: racao pessoa C,',Q"'m-- '9'--X',c,...

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periencia In'OI manuselo dos animals, alern da necessidade de se obter urna llnhaqern especfflca de camundonpos crlqinados die urna fe'lml,sa da ralca. IC57 81 e' urn macho dial" raca B,allb C'~I que devern ser cruzados. A prlrnelra "... rla - d,-, en l'1lm:1 "I' n acid' a:" F 11, forneco a t, 'e~'lm'='- e a ,

~ _ , ~' . c c _ U , '" _ c _ II . - - . 1- _ _. _ ' I I, - , "

necessaria lEi obtencao dos embrioes. Bons

--'- "'" 'I. d-,I , " t-t --- r sid = -c btidc s -c:- ",-c f', .... , ,', c,'· , ::!;.

resu Il,8:0S 'em ,51,-10 0 ,'ILi"O~1 corn emeas vtr

gl'sns, Id,e ojto sernanas Ide idade e machos de ',2 ssmanas' ~2: .. 3,~ .. 6,,11'1,.

A,s fem,e,a,:s F1 sao superovuladas pela i,n,jjec"a,o, intraperitcneal die, 5 Unldadcs lntemaoionals (Ul) die soroqonadotrolina de' eglu,a prsnha (PMIS) dllutdas 8'lm QI,2:ml: de, cloreto de sodio a 0,-9'% sequlndo ,44 a ,48 horas mais tarde pela admlnistracac de SIUII de qonadotrcfina corionlca hurnana (HCG),. Estima ... ,s"e' que '0 tempo de ovulacao seja apes 1,2 horas depois da injecao Idle H'C'G. Illme'ldli~,a'ta.mlie'nt:e apes a ,a,dmiinis,tra.(~:ao do HCG, as fe'lm,eas sao colocadas corn ,0 macho. As fem,sas .5.8.0 sacrificadas 4,0 a ,44 h ora s a p-'-':' 0' s "0'"'" -HI C" ·"'G'" - por deslo carr ento c '-'e·'r-":v,·'I'lc-'~I-1

. .Ii' 1- I, ~ "I, ··1 I ~ I' III 'v' >. -- ' • I. _ ~ :_-1, -' I.. ,~ jI

sendo seu abdomen aberto e as trompas de faloplo secclonadas junto ,8110 IC:OlrnIO do utero. C:IQ'!m ,a trornoa livre, s'olb rnicroscopio estereosC6pl'j1CO '8 localizadc 0 ostio tuoaric 0 Iqlua~ 8' cateterlzado corn agulha de, iinsluUna sem ponta sendo auxiliado pelo usc de uma plnca die' relojoelro. Os ernbrloes sao colhidos pelo lavado dos ovidutos corn solucao salina Idle DIU Ib'8!C-

C- O·~IS' Ph- icsphate B"uff' ered' sendo identltlca des

'/'~/ .1_ I :_I'~; .-~: I ':;~-c_' _ . - ~ 1 .'~' '- ': • , :-'-~ 1-'1 ~ •.. ~: 1'1. 1 I!I-;' ... _'I- ,-'.

sob m'icros'C'Q'IPiio e tran,sferido,s p"ara. p[~,acas c'O!ntenldlo, n'o'va SOllu'c,ao s,all'in,a Ide Du!b,elc',co;s PhloSp'hlate' IB,lu'ffs'red,. ,Apors ,a t!,a'V,81'Q,em" ,8;8,0 ,enta,IO Ipas,s:ados p"a,ra IPII,ac:.a:s Iconltendo mlel'O ,d"e: c'ultUlra pl,ara ii!ncul!b,a"ca,o'~1 ,8, ob,servado,s, eml s'e1u de~sen:'vo,!lv~ilml,e!nto pOlr '96, Iho'r8,s, at'8 a fas,e de, b Ilas,t,o',C i.sto,1,,2 .. 311·4)3. '111

P d t b L bt b ,'.... t' d

1-, ,,-C ~ .... ,c.' ,-', '_',-_," -, " 'II,' ,,-, , ,'--'1, '·1:':, - " ',.- ('I" ":,! ',_,"-,:' ",' '·'i'·_ --, 'c '.

o~_e S9 .-alm- 81m 0 er emnoe,s a p,ar ir ·8

ica,mlunldonl,gios 'S.'U~QOS ,allbinos ,d',a, 'mesma ma~ neiiral pOlreml de'v'emo!s traballhar SIOlmlie~nte Ico'mi

,'.. -: b'·' ''''~'' ',:, -::-, _. ,,," I ".',., d" : d'" I, lb' II" , ,·,t- ,,~, ,- ,- ',- -- - ' -,-, "'--:

em_ rloes, CO'lml m,alllS ;8 I. OIS,I"as 'om'8ros, PIO'II,S,

10'S cam'ulndo,ngllo,s ,dle"sta rac:a f:az,em urnl ,stop em

. -

dais b,l'.a,s.tcllmlsr,o's, 'n~ao Si,e ,d:es,e'n'vo'~v',e!lndo, inl

vftTto,. o,fe:re,c:,ein,do as v1e'z,les, Ulim r!elsuliitad,o 'fallSo, n,sgatIV'QI,.,

Cul~'tura d'ie emlbr~oesl de Ic:a,mul,nldl()lnlgol e e'xe~'iB c uts,da pleri:o,d~cam,elntle, p"ara mlon i~t,ofar ,a 8Ifi,ch§n,-

cia Id,o m,eio 'ide clultulra~ - e tam:bsllm para 8lVa.lIiIa"ca,Q da, 1~~imIIP,e'2:,a~, .e~s,t8JHizacaol e f·,8.lta ,dl,s tOlxl,~ ,cid,ade d'OLS materi:ais ;al~em da COI'nstante ,clhe;ca,~ gem ~:'Ol C'02~ temperatura 19 Iumii,da,de da jn,c'u""

b- -"'d-"- ,,'.' , H-;lt:.'· ---= :(-"",-= -"::-"-::-'-"=,,,--:, 'C: -c-;,t,-~-:" '1'·-'" t"· -_'-"". d',_., c..C1

_ ,a o,ra,~! do Iuml co·nsens,o e'n~re O,S a.u, ,-ores ... e·

que a obt,elnc"ao de, aIPllro.xiilm,adl,almlenlt,e 7',51% de mlor1u[as 18 b[~'asto!c~stos 'or~lginados, dOl ,de"slelnl~

volvirnentc die embrloss de, carnundonqo corn dois a ouatro blastorneros nos autortzaa uttlizar ,01 II ab o rate ri 0 para msnuselo de g,amlletas e

ernbrloes hurnanos".

Va,F'iIQS testes. tern sido realizados para corn ... provar ,8. ,efic~enc;ia, deste tipo idle controle die quallda de A' n d~'"r-,:,CIW- -:,,: '0·':0· I[~m' 18" n & ... C<'Q," I a ·t- ra ves d··· 10· :1

• ': ~. .'. ,.. c_ _ _" , •• _ _ _ I w '. -- , . - ~' I ., . _. ..'.' 'I '. ..!'. _, c_ • es= -' . .-"

dessnvolvlrnento de embr:i(Jn8S de carrumdon

~Igo in vitro, observararn ,8 etlciencia die tres diterentes rneios de cultura. Ouando ernbrioes de dols bdl,a.s:tomeros toram C:U ltivados por '72 horas elm Ham's F ... iIO hi iO,IUV e· a formacao Ide 7'3% de blastcclstos. ,0 cultivo ern Hoppe-Pitts forneceu urna taxa sernelhante r(751%)., mas 81 utlhzacao Id'Q' rnslo :MiUe,u' 8,2 1119V!OU ,8 for maca 01

de ape na s 4'" 2.1°'- de bla s,·,t' o cis-,:'t"o-"'S-1,2

:.' ' I, _'. - .o, I: - " ,'. 10 ' _' c.~.' _ I .. ::"-=-" "" ,- ~,- - ,- - - ,I,

Ern 198·4, Lucinda Veek, relatou ,8 ef~c:ac:i,81

.

deste tlpo de C10llntrol,e de qualidade cornparan-

do ";' iIr·" ,", , d'- de S e' -,:- C ,- -,: lvlrr ento 10-' bs -', -,' "_·'u

o as 1~,aX,81,S, 1:...'1,8 11-,-"c-c-,::_I~nv'O'~_·lm ' __ t·.,,_,.:. .. srvo ...

,'-, ,- . ':, ,,=, tra '·V"9',I'·, ... dest . - onn .... II, ',' d - - - - ~ ~!d- ad i - -·I·-·'~

qUle ,a~r~·~·_:"··,s, eS'l'S 'Clon .rlo'~e' e q,UI8l~I.,-a.-le era

, -I' det ,i ~ Id d d . II d

pO,SS:IIVf~~ I .... etermlnar a tOX~CIII·. :"a·: e .···0, ta CIO' I __ a,s

luvas C~lr(l,rgi'ca,s'i comprovando este fato quando utltzou, para o: dcscnvolvimento des embrioes Ide camundcnqo, rnelo de eultura mer-

.... II h id I - - - - -, 11- - c", .' ,- ,-, ," I " ( " I" '", " ,-, '- : t· or. '.' :!~. I - a'..... .... -II 'iI':lil ~v" ~-:,

glU_ ,8. 10 par iuvas cnurqicas eS,I_,e.rSIS, nao ,d· 8:'"

das antes CIO'lm aglu,a cstcril. A taxa de ernbrloes com dols a quatro blastomeros cue cheqou a 0, estaqio de blastoclstos fol 0%". Ao rnesrno ternPi 01 rsalizou outre teste, no qual as luvas ciJi(Jrgi·~ cas eram lavadas corn agu,a esteril antes da lmersao no' rnelo Ide cultura. A. taxa obtida, entao, foi de '93'%, Ide morula C'UI blastoclsto.

Te· "S*'8S' t- '8· 'm'b-'·· e'ci' m" for' alm"-'- Ir·-·ca-' 1-1'I'z--'a' d-o- s- p--' a- r--'a=' 'V- -'e-=-,rl~lfl"ca'-' r-

'~-·'--:'IJ.,I. -:,- I_~~_I_I __ :_.I= . 1._:1 ,- ·I~'~'-.' ....•. ,::_:_,I,)_ :'~', __ -.'!I.I .. I:=~,~,._

ii, "dl d . d"f- - d - dl

,a 't,Q,XIIClil:· •. ,a·.·.9 de .•• ·III'er,8,ntes ,pro.·~. utlos: usa~_,ol:S

P.o:iI1ra' e'·s'-·t·e"r~I~II;iz'a',...'a~o' s"9c·'n'dlo-':- 0"'Ibs-'e--r-v-'a-d-=-' '0· q'=---u-e'-': 0'-'-'

cl "I .-,-,ll,l:-:- II .t, :_"_,- ''Y'-.: ,'.,_ ." '-' .... ,', 1 __ :. _' __ I~\ . Ii, . - .. ':.1 . _. c. _ ',-' •• ,I

,o,xiidlo! ,d!'e ,etilenol Ina,o iinlt:'e:rferiilu nos, r'9:s,ullta.dlo,s, ,enlquI8.nt,o 0, 'C,iid'e·,x redluz~'ul gra.n,'d'e'mle~nte a ta.)(,a ,de des,9:nlvolviimento emlbri'o,na,r~,o,5"

'V,sr:ifii,ca.mo,s quel 0 cOinltrol,e Ide, qlual:ida1dle

... - ,t, .c .. "b_~ d,1 '. - ' '_ ' ','lb·,1 j,:""'; :- ,~ :.' d··: ... ,.. -,. I I d' -,. ..- -. ," Ib' ',- ""t', - >t' I

a~rav~s ... e em· :lrlllOeS '. e camun ongoe I_-,as .an ,18·

e,fi!cii'e~nt8; ,porem 0 a.ito' CUI,S,to e ,as, ~gra,nd:es; d'iificu Idl,a,de,s, p,8lra ,a obteln,c',ao, de CO'lnltro~e ,d,e' q:u,a,l~ida,de':~1 atr~av'e,s; Ide ,smb,('oes Ide c:,am,un,dot1-, g'lo~ lelv'sm! s, :m,a'ii!orla Idic,s l.abioratorir'Q,s, 'da Ame~lri ... · ca, "ILa:tl;ln,a a Ina,o Ire'allii'z.arem Icontro'-e de qlua,I:i~,

d-'a'd"-Is'" d-es'·'Q"· na't"u-r--'-s'-'z'a- A'-' n-e'-·c-~e-'s-·'S-·:~I:d":-:-a---;d'e':-" d-·'e' u'm"'"

I 1- .. _ I~ •.. ;_-~,t:·cl 1- ,-'-~_.____:,. l.. ,,-.,,---,-'1_:,_, _ .. ,:_, .. ·_,_1._ - I ... , .. ! I

conltroha de· ,quard,ad'e 'sfi'cile'nte ,9 conf:iiaiv',e'~t,

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pes'so,a~ In'o Imlanllus~i~91Idos gamleta:s~ iln,celntiiv"OUI~' nlQs! ,8 de,s,env',o'~lv'er urnl mode~o, de contr'o, e Idle

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qu,atii;d.8!dl'8 die, CIU,stos; re:dulz~i[dlos ,9 q'ul,e C:Olrrles''''

po,n"d'8s,s;e a,lols nlossos, an,saio,s;" Ests mode'l~o 'fo,1 de·,se'nv'oll'vtdo ,c:oml ga,meta.s b"o,v~n'o's" se:nldl,ol m,alnus!ea,d,os le'Olm 0 ,mlssmlO materiii,a~l,e no mes.' ...

m' ," 0"': Iia-, b:- if'1-r'a' toi'i"rio:--:'lut;rn"·I'Z"8"" d,o· p" a- 'ra" g' a·" m" "e"t-Ca' '-'s'.' I-hum'- a'- In-''o-''s-

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Um mU~ntr,o de s'eme,nl f,o,il colocado ern tubo dis centrfuqa (Costar, catalog .. ,410111) esteril, adlclonando-se 2 Imlii!litUtr'Q!s, de rnelo de oultura, '8' apes ·hiomolg8~lni~,zal~:a.o tol ce~ntr~flu:lg.ado a ,3IO'01'GI

por trlnta minutos. Depols da centrirfugacao" o sobrenadante tol removido semrnexerno ,ptii',llet

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e escartao. O~IS ,mllll,lrOS, __ 8 meIIO_"S, cultura

foram adicionadcs ao pellet e Ig'9,lnti'llm:9Inlte hornoqeneizados, e elntao recentrifuqadosa 3,QOIIG 1J:)iOr dez rninutos. 0 sobrenadante f,o,i rernovido

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'e B'O peue rma 1'01 a, ICIOna,_'_lOI genJ"mlenl_e, ~~,""

ImiUiUtrols dis melo de cultura. 101 tube 'folii coloca-

.

do na incuoadora [par duas horas, aquardan-

do-se a, espermorniqracao. A,Q 'filn,81~ deste ternIP1011 uma pequena arnostra da suspensao Idol

S- ob r en adan te I to ~';I' rem iovlda para a 'v" '8-:-',I"",'a' cao ,d-' B':"

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S' IOOICII'~'IOS rorarn o ," sarva . lO'S, S,O •. rrucrosco-

1~~)iiOI lnvertido quanto a presenca ouausenciade clivaqern 8' a rnotilldade des eepermatozoides lo~ documentada 4,8 horas 81pIIOIS a. fertlllzacao. lOIS emt;Jr;iiIQI9S, foram a'iilnlldl,a cbservados par 72 18 96 hi oras apos a lnsemlnacao. ,Ao final deste lntarvalo de temoo fol determlnada a porcentaqern de, desenvolvmenrc embrlonarlo conrando ... se 0 numero de emorloea de dlU,8S celulas, 'tries a quatro colulas e de rna s de qu at ro Ice~u tas,

0- IS IOIIO"·C-"'I~ltIO::,IS':-, forsrn 0- b tldos de I ovarlos de

. ' ~ _ __ ., ' _ .-.-. . -._. .. OJ '._ .' r-

'V'8,IC',as, mortas atraves de sangria ernfriqorflcc limeldlii,atam'enl!8 apes arnorts, fol realizada abertura do abdomen e os ovaries toram retirados a,s;septtIC8Ime,nlte,s!endocolaC8Id!,osem'uma,c1ub'a prevlamente esterilizada p .• elo calor. ,A cuba tol

- !i' • ,

asseptlcarnente transportada para 0 lab 01 ratio rio .,

Os ovaries forarn retlrados aleatorlamente sem observacao die raca l'I~'d' .. ade paridade o·:u

... ', .. '_ ._y_ .. ',__". I·Y ., I. _ . . .. . ,! .._. I .... · ..... '.". . -'

qualsquer outras caractertstlcas 0'

. . '

INla tarde anterior a, retirada dos ovarios to-

rami colocados 181m estuta (IFo'rma 'Modlell'. 31,519) a ,31'7· °C.··~· ,- 95 .. ·~ 0, de umldads ,5~.·Ot~! d,-e.' '.,:' C~!O~· p a: Ira",

~, .. ~ - ,Ie - "" ... lO "2' -

equilibrio Ida, temperatura e! rnanutencao'do p,IH

e osmolarldads "OOmlll de solueao salina ,de Dulbeoco's Phosphate IB,uffered (G IIBCO' l.abo ... , ratories, Grand Island, NY11 UI,S,A) para lavaqern dos oocltos: sels a, oito placas de cultura (IC,OS-tar~ catalogo ,3,0,35) C,Q,m IG,P'MI para re'lc'8IpIIQ80 des oocitos apes lavaqem (Sereno Sao Paulo, Birasiii~) e '110mlll de G'PMI em tube de centrffuqa (Costar, cataloqo 31 " 6) para prepare dos es ... ,

permatozoldes.

IN,o laboratorio, lOS f',allfc:ul~ols torarn asplrados

corn serinqa descartavel Ide' 10Im~~ sern borraoha (Becton Dlcklnson lndustrias C:!iruirgllc,a,s ltd,a,~" CUlriitiba, Parana, Brasil) consctada a aquIha 2,5x8 (21 G'1), se:ndo 0 llquldo toltcular translerido para tubes de, centrffuqa, 0 -i'qUiidol

folicular foi examlnado atraves de' mkroscoplo esterloscoplo Mii,cro~naL, 10:8, oocitos observados foram lavados ern solucao salina de IDu~ble;c~ ICO~~S Phosphate Buffered 9' transferldos com urna pipeta Paster de ponta fina para Pi II ac as de cultura contendo 2:ml! a. ,3'im~ de rneio Ide cultura. A,s placas de cultura permaneceram ,4,8, horas In,B j'n 'C,IUI Ib ad ora, na expectativa da rnaturacao

dos c ocitos A" p os 4-1'8"- horas de ~I"n' -":"'b""" ,.".' ..... ,".,.

I )" I _1'LIoII ;-'" " ',i-'" .. rl I · .. 11' 'a' .. -' .. 'Ctil.·.!,agao, O',S

oocltos torarn observados ern rriicroscopio ifn'v"srtli,do (OII'Y'mpu,g Ck2) e 0 graiu de m,aturida,de 'fa'i ,clh,ecad!o~ ,Fora,m cl:.a,s,s,irfli:lc:,ado's, am iimlat:u:rlos,

(IP,rofase, I 'e Imetafase I), madurlos (mletafase U)~I atres,ljlcos e f:ra:gmenta,d,os" Olb,s,ervo'lu-S'9 n!e,s:te' te~mllpo qUls, , allg1ulns apre,se1inta'v'am, d:ivi:s"ao, pl,artI8In:o'ge·netic.,a., Es't;es,'foram retira,do,s Id!,as pl~a-C:,8S, Ipl9.,ra nla"ol fornec'srem re,su Ilt8Id,o's 'f:allso ... ,po,~

'~t-·, , .,

S"IIIVOS~

Ap'lo:s ,8 cl~assii'fiic"ac:,alo, f'loii· reali,za,d,a ,8 f'e~rtilH:za, ...

C,aol Ide: todos, lOIS olocilt!os c'om s'8:men del b'OI~ tiiP'O

I'll: • '~I:I! (-C·" - I dl S"- .... ' L d-

-"marqlu8jian,o,' 1'~:8ntrall ,·· .. ,8_;emsln' _,ago"a , __ ia

Serra Lonldriin'a IP',aran,A B-·'r'a.· 1.8"".".1),1 E- 's··· ... ~e.··: s·;e~',m'"; ·e','n-"·

. "" __ , _ _ _ _ _" , .,., ct., ... ' . I!.. 'I

ollb·'tld'o conl,gel~;aldo", f'ot 'capaciitadl,QI ,atJr,8.V',8S del

s'wiml,up" Foraml ds,slconl'Q,sialdIIQ's ;OI:S, p,a,ietes tEl te,mperatullr8t aJmbiente~~ F'8z, ... s,e c:,o,nta,g'9,me a,va .... li,ac:,8.o da motn~,d,a,d'e· em camara de Ma,'ckler~

Ouarenta e olto horas depois Ida, coleta no memento da fertilizacao, os oocitostoram observados e rstlradas a"s: dtvisoes; partenoqenetl .. Icas~

Doe 6,,22: cocitos obtldos 'de '146, ovaries, f:,oram observados apes 4,81 horas da 'f'e~r;inza,Icao:' 912 embril;C~le,.s leornl dais, bla.sto,mero,s'J '110;3 C:'On1: tries, at q1uatr,ol ,b l,as;t6 me rlQS " 178 'c,lolm mais, ,d,e qU81tro' blastOmlerlo,s" 23,101 nj,a,IOI ferttUz:a,ram,! ocorr,endo dliv~salo, 'p,arte~nlo,genetlilca 'eml 3%"

06eitcHl< F"ert, 2Ce~ls ,3/4 C:ells 4. 'C'els N'- IF,srt.,
···.an
622 3'73 92: 11 ()S, 1 78 230,
'100'% ,59/9i7% 1479'% . '16 55'~ 28.611% 36 '98"
1 .,.-' ....... '"'jl"';- ','0' I J. :"1" . 1.· .. 0 ,

,A ne,c,e's,s,iida,de dl19 clo,ntr1o,II'9' de Iqualidade e

treinalmle1ntlo a.ldlequ'8,do do p,e,ssol8),1 e'nvo'l'vido 'no prloc9',S:S,o de, f',ert!i~Uz,ao:alo in vitro e e~sslenci,a~ para 0' s,u,cfess,o' dio! Ip1fogra:mai Elntretanto,~ a

Figura l' - O'dcito b(~lvino ern metafase Il~ metursdo in vi~ro ,apos 48 bores de' OU!tul'8', com' p',rimeir:o co.rpuS'.cu"o po/a'r ~vidente,.

~;g": U'II'IO 9 _, em~ b· ':i,.,~;;ro· . £"'0' s; '.-.... . '. -' . s,,, .' ,', .. ' . d . - -,..;( . ,I, _r,I,,_J,g v ~l__ H~!_ V _Jv~no em lase, .' e,' mu'Uta~

: .

d ""'" oil- f-~ ",A, .,

a __ equacao e'n'tre B. e~C~t#lnCla, e 0 estar aie

alcance economico d .. '-·- ,c: """,:""", ,.,,', ',.-, -' ' '_.' ,'." '"

-_, .,"',:, .' ,',: ,.', ", 1,,1 le,,:_ ':. as Re's"s,o,a,s, que nlecess,~-

tam de _ tal procedlmento e vlta I para a "CIQln ... tlnuidade do service. A, rnanutencao die COin, ... noles del qualldade die padrac jin'ternl,a·cional e dltlcultada pela qrande Id'ilfer,elnc'a econornlca entre a"s, varlas econornlas mundlals. O. lntulto deste trabalho foil dessnvolver urn controls d'19

qualida ·d·le· I efioiente -". -'<," .' adeo ~.",-,,,'~'.,-, ,.'t. --,.':-. ·.c·

.. 1 esu ... ",_., ~ .. _ ~I'_c-_'Q . ._I e~1 Cloml ,a, a' lequ,ag8o a rea ....

Udl,adl'9 econemlca da rnalorla dos palses da Am Ar'Cl\c:-:8'·':c, l.a tin" a'"

t::.1.":" _' J~ .'~

Ap-"'o"IS·.-,·' testar lu-m:-:-·' .. ·· nnrnero conslderavel de

" "I" . .: ... _. ',.:',1 _',' ,'_'__ t_ I ._ -,'_' I '.. ..' . " " '_ ',I . ", ...• -I a. ." . '_-'_. ~ .. :".: '.

, .

embrioes bovines Ie compara-los com 0 desen-

volvhnento de ernbrloes de camundonqo, acre ...

dltamos que 0" controls de' qu I' I'd de m

li_,"" -l~"-'l--' comro ~'__: __ l'l_a roaoe corn a

'fertii~II"z··,··,.a·: cao in vttro d··:-:· e:.:-: ooc 'I·'tt-'IQ. '. S",:-' -'de Ie'" va 1(;--'8"", m-' '10'" str B:' ,-

'_ ,. ",y - _'.' ' ,_ c . c," - .. ' '. ' . " . .-' !L '. ,", '.:,'.-' ",'"., ' ..... ' .. ' _ cl , . :':" 'l ".,

se de qualldade simllar. ;

A- d~t d I b ~

.crscnarros que 0 rnooe 0 oovno apresen-

ta ,ailgums:s, vantaqens sobre ,os' de carnundongos" que se lnleia CO~: a extrema faollldado da

I d ~!I'- d . ..(, " -

co eta cos oocttcs I' Q,S OVd_rIOS das vacas ,0

que se contrapoe a grain1d'e ditlculdade da lavagern das trompas das f,~me,as;, de camundonpcs, Para IB, obtencao dos oocitos de ca ... rnundonqc e, necessario trelnarnento do pessoal a tarnbsrn transports ao laboratorio ern

C- "o""n' dill'~O""""'e'" md·I-, .. :.~ '~,:-., 0"'" .'~' .... ~t" ,,- .-. b' --" ,~- .. ".-,:-, -:: .. ' ..... - trs -,"

'.' .. 1 J __ 'yl __ ,g 11,-_eal~S .. ·.,8 IOOICI'_oOS .. lovlnqs ,S8IO .' rang,..,.

portados ,ao' laboratorio dentro des ovarlos, n,B."Q· necessrando de condlcoes especlais e sendo coletados sornente no laboratorio.

.A glra.nd'9 diterenca Idle tamanho des ernbrioes de camundcnqc corn embrioes bovines e hurnanos torna 0' rnanuseio d:i~frcit f,u!ginldo, a realldade do rnanuselo cornerrortoes h uman os.

Ne" ·m-··· se 'm'-"'-p'r'ec, Iurn:" tecnico 'q' us" m'" " U' ,.', '~.,. ,- .-.--

.', II .; .. _-, I I" .... ' I., . .'_;~! ......_: ·Cc:;: . an .Ise' a, :s,em

dlflouldades qametas fa! ie'm!bril'Q'8s humanos conlse'gue rnanlpular .. CIOlm f',ac~lida,d,e lOS ism ... ,

'b·..... d d .. Jti·,

bnoes "="'9'::-" earn ainc on g" 0:' ". 18"":' V'·'' 'C" ···e-····,-v·,~e· .. ,rs:··a··:-···:·· 0-' a:-I'S-----

_. .' _ _ ..' .'. .', " '. .'. 1 . . . _._ I .:_. _ '.' .: _,,"" .: ~ • . _." •. :.~ . _. :._ IJ '._ ,I.~ ", [!!II ',_ t...·. .:'. . ~. ,- .-

to rni i!' ~ d . b --

P'9C 0 rmcroscopico 1)01:8. gametas e, elm,)r~'Ole,s,

bovinos 18: sernejhante ,810 dos hurnanos.

Acredltamos 'Q!U8", alern de ser urn controle ,dI19! qualldade eflciente, esta seria urnarnanejra

2'-'19-:- Q

I . • ~

Carnundonqo

Bovmos

rio bovine nos autoriza ,8,. utilizar 0, laboratorio pa-a cesenvolvimento de ernbrloes hurnanos ..

Ao' mesmo tempo em que realizavamos ,0

t d b'~ bovi f' rnll ,_ '.

estu '.:0' com emnnoes oovmos, a rem izacao In

viCro,em h,u man os tinha continuidade em nO',SS,Q laboratorio corn ,0 rnesrno melo de cultura e condicoes de cultura utilizados no, presents trabalho. Neste' intervale tivernos oito pacientes, . . - '- '2··0_--···· 3'-'6'-" .'- -- .-. -. d- - - - ,- .... b '--,~ .. -- -. "... t,· ' .. ,t .

entre .. "",._.'_. e' ...•.... .: a,n'OS'I_as qiu'als, obnvernos tnnta

'oocitos. Destes, vinte sofrerarr dlvisao, 10 que mostra um indice de tertllizacao de ~6'7%, Ob-

i'" - .... id t t b

IdVem,QS tres qravmezes, 01 que ares a ,0 corn

tunclonarnento do laboratorio.

Controls de- qualidade em ernbrioes de camundonqo x bovines

,--~------~~=====~ ,--,--_._

----~--- ~- ~- --------------

N 210 permite rnaturac 8,0 d os 06 c itos in vitro

Fertilizacao e realtzada in vivo

Permit e m aturac,ao do s ooeitos in vitro lFe,rti:~tlaQa,o e re.a~,l:zada in vitro

Permits 0 estudo dos e sperm atozc ides

Perm i t:e 0 man usei 0 de ernbrices e qetnetee Baixo custo

Permits c~.assiifjca9ao cos ernbrices e oocitos

Perm ,it e' tr e i n 0 e-rn

m icrornan Iipu~ac ao

N 30 n eC,8S,g ita, b ioter io Nao nscessita induzir ovulacao

SUI rn '_-, rn a- sv

~ . ..1 . I .. ' • '. _ • :. :

N 8.0 perrnite a estudo dos esperrnatozoides

N' 8,0 P erm ite 0 rnanuseio de g,arnetas

Alto custo

Perrnite ctassificacao do'S embrices

N 80 perm ita' t r eino em

m icrornanipu '1Ia.;ao Ne-cessita bioterio N:ee-ess.ita induzlr ovulacao

W_'·(··f'-· tr« ." .'. t- , . t- "-' , . - 'f- t: .' tio t:'" .... .... .... tt .

1.···1 u ,Ie mtonuon 0 InVeS,Jga.ln,g an' em-

ciem. low' cost q',ualify control tor an IVF lsbore-

II' d' I ,.. t-' -h

tory, as we '.' as aequafe y tremmq o~ toe per-

. - -'" -' ---/.: ·[····f:·f':: .,,'- d '.' /' ... .d ' .. '- ". /":t· ..... ··t-:· ... /

so'nne s'a"J weeve_ope·.· .. · a' quaJ,y ,GOnIO·

technlauc ,- ''!--'' be ,""-'--' --, ·-b· ""1 .' 6"'2'-"2'-"· bovin

ecnruaue uSl.n,g oovme emoryos, '_~~_'OVJne

oocytes were removed frorn trie overies of'cows wnen thoy were ,kille,d in the sleuqnterhouse. it was observed that after in vitro tortiliretion 3'7'3 oocytes preeented dtvtsion tn venous steces of development up to morule. Cotnpeting: it with tho in'tern',atio,na/'y eccepted method of quality controlusinq mice embrvos in IVF'laboratorie's~, 'we observed a similer eiiiciencv, end lower costs re',garding' tecbnique end culture condition's,

d· . d-

. . . I . . . . . II . '.' '.. '. . ' '.- .e'l . . - .. ',-

slegiura _ e uma eql,u~pe' comecar a ser tremaoa

para, a :~'mpl:a,n!ta<;a,o de um nO'VQ proqrarna de tertifzacao in vitro em humane.

o rneio de cultura 'GPIMJ mostrou-se efi=,

~ A g"6' h did ,. A- ~

ciente ate __ noras '.', a coleta des oocitos. Apes

este intervale de tempo os ernbrioes parararn seu desenvolvimento, 0 que nos 1'8'z acreditar 'que 0, G:PM nao e um rneio decultura adequado para cultura de' celulas ,8, lango prazo.

Acreditarnos qUI8 a, obtencao de aproxirna ... darnente 4,01'% de desenvclvnnento embricna-

d· . .' -b" -~;t R-"'Br'~'O'--' 00' ..... - 2--'2'7' 1984'

e erm· mao, -,- \.,_'l',' ,'1 . : .', ,'. j' •• ' ,

7" Dande'kar, P,.V. & QUlg~e"'l~ :M.M.: Laboratory set-up for human in vitro tertilizatlon. Ferli I,. Steril, j 4.2: '1. J 11984.

8. Das, K".;' Stout, L.E.; Heoleiqh, H_C'.; Taqatz, G.,E.; Phi::pps~ 'W.R. & Leung~ B .,S; ~ Dir ect pos lti ve effect .of ep idermal growth factor o n the cytoplesmic m atura non of m ous e and human cocytes. Fertil. Steril., 55: 1ooo,! 1; 990 .

9. Gw.arkin ,! R. B- .L: 0 efined media an d development of rnamrn allan Hgigs in vitro. ann" N-Y" Acad, sci., 139~79! 1986"

10. Veeck, L,. L, & MaIaney I 'M.: La boratory Ou ali ty Control. Will iams

& W·'·!II ... " 17'8 19SQ • -

·',1 ~ II\. Ins j '.: t ·"'6.

11,. Trounson ~ A.; Peuraj A. & K_,irby i C.,:' UUrarapid 'freel::[ng~ a n°8'W' Ilow- cost an d 'sJf.ect i v e m e'thod of len) b r yo- c ryopr,e-s erv at.ion.

Fertil" St,eriilt 48:B4,3~ 1987. .

12 '~ Dorl'man~ A,,; Strll,~m~an~ R'. J.; Littrnanj B,A,. & Schumani ,J,.D.:

Mouse, e,mbryo cu.lture in eva.~uation -af rned~a and c'Ond~hons for hurn an ~VF i A bst r-acts! 4-1 : B 1.8 I' 19-84.

1_ Big,g,er:s:~ J-D'-; G;watkllni :R. B.L. & 8r'~nster'i R;,L,: Development of

b '. It f f II' " t b

. :"'j'. -01.·,"·. j' '1': -, :--.' :,-""":, -j -., [.- .. : -;I.~'-: .-.' I', 1'1 . ,<.-. "', '! -.' (", ',': I, '.' I' . ," .... : .... , ..... :

mouse ern ryes In orqan CtJU{8 0,_, auoprsn IU,_ es on a

chemically defined medium. Nature. '1:94: 7',47 ~ 1:'002.,

2- - i8.Hling ... · ton - W· _- .: -0-' - ~ 'G'- rah am - C: - F &'-- Me.' ., l, a re n A=: E'\;'·~-'-'a.,-::'. uerioe

- - - - - c _ .. , - - ~ . - . - I - - • . - - . . ~ -. ,I'I;,iI, r . Lh. ,~ .

development of mouse blastocysts culture ln vitro from 9'aill"ly

. ---:~-.' ,- . 1--'- JI E--- brv :1 E~-''''i M' - .. ,- . 'h-' 2·0···3·-·9·:'1 '-'9'6:8--'-

cleavage" :_ .. ,'m ryoL . Xpt. .' orp '! ,- -.'.. t ,._

,3. Brinster, R.L.: A m'ethod for in vitro cultivation of H\OUse ova from

tViJ o-ceM, to btastocvst. Esptl. Cell Res. I 3,2: 205, 1963.

4 A'l' . d--- -C'~' G--' M' . - -_. A'·" -L &.. '8·'11<- t- 'S"':' L'-'bo' - . "'6" . -

, ., .. :. rTiIO • ~n I ".' .; .'. ore!ra!- "" '. ., : 'lor ii' . ".: a' ····:ra;(, no para

]'-erti~izagao ~n vitro. RBG;Q'I 14: 1f):9j 1ig9,2_

5: A'--~"'e' rm' Uln" S'- '8:':· " 8·t-·, ··'k'· ."-0; G-' K···· • 0w··:·-·ns n' R- J . A:· .,-, - ,-_·t -~, A: A':·' •

: .'. . . CI:\.' . _ _ (,~ I : e .' • i .. ,0, .... eS'1 .:. ., ..... ~ v.' a ,.' 0 j .'. - • t ' .' cos a.:! ".. . ... ~

Ve,e,ck~ L.,L.,;, Whitf'ie-Idt M.,M. & P,errYi' 0,0-: Quality control test in 9 fer h LJm an in vltro terti I iz at:ion us in 9 a rnou S e €:m bryo cui tu re Sys tern" A,bstr acts ~ 41 : 11 S ~ 19-84,

6 A- ~ d- . C G & S 'b K" AFt· r' ~,.. - f- ~ .

, .~m,O:,In:~ '.".:'., '~-\93',.-.: 'er' '~lii,2acao tn v,tro e trans'er'enc~a

--~~~----------.-~- ~,-------~~~~~-~~~~~.-.- -------~~-~--- ~- -- -~--~-,_~- ----~--~=--

-

N io",q,.\ClO,S Gutore,S

• ..: _. I ..... ••

~ .. -~so,ncitamqs qu,e. os tra'ba,'lh'os en,v'iado,s !p,a~a Fernin,e ,e R',B,GO~, ilm:p;re'ssos em: 'C,Orn~~JJ;to,dorL ·~ ... tenham b'oa lm:'pres.sc,o (cor) em:9'n,'te,:nhcifm 0 'li:es;pa,t;,O 2,"" ,p,cro fo,c'iliiar o,~ente'nd:im!e:nto'e

. . '; ~ .~ - -- d' '; - ;oi¥ , "M'" - 'C'-' B'!:S~" .. '.

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