PROTOCOLO DE PREPARAÇÃO DE LAMÍNULAS PARA ADERÊNCIA DE MACRÓFAGOS ELABORADOR: REVISOR: APROVADOR: Obtido no curso de cultura de células IOC/FIOCRUZ 2011 DATA: 1. OBJETIVO: Preparar lamínulas para ensaios que necessitam de aderência de macrófagos.
2. CAMPO DE APLICAÇÃO: Esse procedimento é aplicado a todos os
experimentos no Laboratório de Biologia Celular que necessitam de aderência de macrófagos em lamínulas.
3. EQUIPAMENTOS, MATERIAIS E REAGENTES:
− Lamínulas
− Água destilada e MiliQ
− Béquer
− Hipoclorito de sódio 1%
− Extran
− Álcool 70%
− Papel filtro
− Placa de Petri
4. DESCRIÇÃO DA TÉCNICA:
− Colocar lamínulas no béquer com hipoclorito de sódio e colocar
em placa aquecedora ou microondas até ferver.
− Lavar várias vezes com águas destilada (até sair todo
hipoclorito).
− Lavar 3x com água miliQ
− Colocar as lamínulas com água miliQ até ferver no microondas
ou placa aquecedora. UNIVERSIDADE FEDERAL DE ALAGOAS INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E DA SAÚDE LABORATÓRIO DE BIOLOGIA CELULAR
− Após a fervura acrescentar extran puro e deixar por 5 a 10
minutos
− Lavar várias vezes com água destilada (até retirar o extran)
− Lavar 3x com água MiliQ
− Desprezar toda a água MiliQ, colocar um pouco de álcool 70% e
depois desprezar
− Colocar as lamínulas espalhadas sobre o papel filtro para secar
(usar duas ponteiras autoclavadas para espalhar as laminulas)
− Transferir as lamínulas para uma placa de Petri (com as
ponteiras autoclavadas) e não sobrepor.
5. OBSERVAÇÕES: Antes de colocar as lamínulas na placa de Petri é
necessário lavar a placa com hipoclorito, depois com álcool 70%, depois com água destilada várias vezes e secar com gaze.