Universidade Estadual de Gois UEG Unidade Universitria de Cincias Exatas e Tecnolgicas UnUCET

Cromatografia

Acadmicos: Joo Honorato de Araujo Neto Lucas Rodrigues Ferreira Mirele Ambrsio O Orientador: Prof. Dr. Diego Palmiro Ramirez Ascheri Disciplina: Qumica orgnica experimental I J

Anpolis, 03 de dezembro de 2009.

INTRODUO
A cromatografia um mtodo fsico-qumico de separao. Ela est fundamentada na migrao diferencial dos componentes de uma mistura, que ocorre devido a diferentes interaes, entre duas fases imiscveis, a fase mvel e a fase estacionria. A grande variedade de combinaes entre fases mveis e estacionrias a torna uma tcnica extremamente verstil e de grande aplicao. (DEGANI, A. L., 1998) O termo cromatografia foi primeiramente empregado em 1906 e sua utilizao atribuda a um botnico russo ao descrever suas experincias na separao dos componentes de extratos de folhas. Nesse estudo, a passagem de ter de petrleo (fase mvel) atravs de uma coluna de vidro preenchida com carbonato de clcio (fase estacionria), qual se adicionou o extrato, levou separao dos componentes em faixas coloridas. Este provavelmente o motivo pelo qual a tcnica conhecida como cromatografia (chrom = cor e graphie = escrita), podendo levar errnea idia de que o processo seja dependente da cor. (COLLINS, C.H.; BRAGA, G.L. e BONATO, 1993) Apesar deste estudo e de outros anteriores, que tambm poderiam ser considerados precursores do uso dessa tcnica, a cromatografia foi praticamente ignorada at a dcada de 30, quando foi redescoberta. A partir da, diversos trabalhos na rea possibilitaram seu aperfeioamento e, em conjunto com os avanos tecnolgicos, levaram-na a um elevado grau de sofisticao, o qual resultou no seu grande potencial de aplicao em muitas reas. (LOUGH, W.J. e WAINER, I.W., 1995) A cromatografia envolve uma srie de processos de separao de misturas, acontece pela passagem de uma mistura atravs de duas fases: uma estacionria (fixa) e uma mvel. A interao dos componentes da mistura com estas duas fases influenciada por diferentes foras intermoleculares, incluindo inica, bipolar, apolar, e especficos efeitos de afinidade e solubilidade. (CHAVES, M.H., 1997) A cromatografia pode ser utilizada para a identificao de compostos, por comparao com padres previamente existentes, para a purificao de compostos, separando-se as substncias indesejveis e para a separao dos componentes de uma mistura.As diferentes formas de cromatografia podem ser classificadas considerando-se diversos critrios: (ANDRADE, J.B.; PINHEIRO, H.L.C.; LOPES, W.A.; MARTINS, S.; AMORIM, A.M.M. e BRANDO, A.M., 1995)

1. Classificao pela forma fsica do sistema cromatogrfico 2. Classificao pela fase mvel empregada 3. Classificao pela fase estacionria utilizada 4. Classificao pelo modo de separao

1. Classificao pela forma fsica do sistema cromatogrfico Em relao forma fsica do sistema, a cromatografia pode ser subdividida em: cromatografia em coluna (cromatografia lquida, gasosa e supercrtica) e cromatografia planar (Centrfuga, em papel e camada delgada).

CROMATOGRAFIA

PLANAR

COLUNA

CENTRFUGA

CCD

CSC

GASOSA

CP

CG

CGAR

LQUIDA

CLSSICA

CLAE

A cromatografia em papel (CP) uma tcnica de partio lquidolquido. Baseia-se na diferena de solubilidade das substncias em questo entre duas fases imiscveis, sendo geralmente a gua um dos lquidos. Este mtodo muito til para a separao de compostos polares, sendo largamente usado em bioqumica. A cromatografia em camada delgada (CCD) uma tcnica de adsoro lquido slido. Nesse caso, a separao se d pela diferena de afinidade dos componentes de uma mistura pela fase estacionria. A cromatografia lquida clssica muito utilizada para isolamento de produtos naturais e purificao de produtos de reaes qumicas. As fases estacionrias mais utilizadas so slica e alumina, entretanto estes adsorventes podem servir simplesmente como suporte para uma fase estacionria lquida. Fases estacionrias slidas levam separao por adsoro e fases estacionrias lquidas por partio. A Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (CLAE) uma tcnica analtica usada para separar e quantificar componentes numa mistura lquida. A utilizao de suportes com partculas diminutas so os responsveis pela alta eficincia desse mtodo de cromatografia. A fase mvel (lquida) movimenta-se continuamente atravs da coluna contendo a FASE ESTACIONRIA (slido). O soluto interage com as fases estacionria e mvel por adsoro, partio, excluso molecular, troca inica. As separaes em CLAE podem se dar por adsoro (separao slido-lquido), partio (separao lquido-lquido) ou ambos. O detector mais utilizado para separaes por CLAE o detector de ultravioleta

(Absoro da luz na faixa UV visvel), sendo tambm empregados detectores de fluorescncia, de ndice de refrao, e eletroqumicos, entre outros. A Cromatografia gasosa uma tcnica de separao e anlise de misturas por interao dos seus componentes entre uma fase estacionria e uma fase mvel.O principal mecanismo de separao da cromatografia gasosa est baseado na partio dos componentes de uma amostra entre a fase mvel gasosa e a fase estacionria lquida. A utilizao de fases estacionrias slidas, as quais levariam separao por adsoro, apresenta poucas aplicaes. A cromatografia gasosa uma das tcnicas analticas mais utilizadas. Alm de possuir um alto poder de resoluo, muito atrativa devido possibilidade de deteco em escala de nano a picogramas. A diferena entre CG e CGAR est na coluna (tubos longos de metais como ao ou cobre, vidro ou teflon). Colunas de CGAR so maiores em comprimento, menores em dimetro, possuem a fase lquida como um filme aplicado diretamente s paredes do tubo da coluna e so mais eficientes.

2. Classificao pela fase mvel empregada So de 3 tipos: a cromatografia gasosa, a cromatografia lquida e a cromatografia supercrtica (CSC). A cromatografia lquida apresenta uma importante subdiviso: a cromatografia lquida clssica (CLC) e a cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE). No caso de fases mveis gasosas, separaes podem ser obtidas por cromatografia gasosa (CG) e por cromatografia gasosa de alta resoluo (CGAR).

3. Classificao pela fase estacionria utilizada Quanto fase estacionria, distingue- se entre fases estacionrias slidas, lquidas e quimicamente ligadas. No caso da fase estacionria ser constituda por um lquido, este pode estar simplesmente adsorvido sobre um suporte slido ou imobilizado sobre ele. Suportes modificados so considerados separadamente, como fases quimicamente ligadas, por normalmente diferirem dos outros dois em seus mecanismos de separao.

4. Classificao pelo modo de separao Separaes cromatogrficas se devem adsoro, partio, troca inica, excluso ou misturas desses mecanismos.

OBJETIVO
Executar a separao por cromatografia do carotenide e da clorofila em camada delgada.

MATERIAIS
Bquer de 250 mL Slica G Funil para lquidos Erlenmeyer de 125 mL Coluna cromatogrfica Suporte universal Gral e pistilo de porcelana Placas cromatogrficas de slica G Tubo capilar Agarradores de coluna ter de petrleo Diclorometano ter de petrleo Diclorometano Provetas de 10 e 50 mL Algodo Areia lavada desidratada Frasco para anlise cromatogrfica

PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL
A. Preparao da amostra Preparou-se a amostra, colocando em um gral uma pequena poro do material vegetal (folhas) com uma mistura de ter de petrleo e acetona (80:20), triturando para obter uma soluo verde que foi colocada em um bquer.

Figura 1: soluo verde. Fonte: prpria.

B. Separao por cromatografia em coluna de pigmentos de um vegetal Sujeitou-se a coluna de cromatografia, em posio vertical, a um suporte utilizando dois agarradores: um perto da torneira e outra na parte superior e introduziu-se um pequeno chumao de algodo em seu extremo inferior. Colocou-se um erlenmeyer abaixo da coluna e um funil na parte superior (como mostrado na figura 2).

Figura 3: Mistura de carotenos (fase amarela) e mistura de clorofilas (fase verde). Fonte: prpria. Figura 2: Coluna cromatogrfica. Fonte: prpria.

Num bquer preparou-se uma suspenso com 5g de Slica G (adsorvente) e 50 mL de ter de petrleo (eluente). Adicionou-se um pouco do eluente coluna e logo transferimos a suspenso previamente preparada em seu interior. Abriu-se a torneira e bateu-se suavemente nas paredes da coluna enquanto durou a sedimentao do adsorvente. Deixou-se que o eluente descesse at uma altura sobre o adsorvente de 1-2 mm. Fechou-se a torneira, o erlenmeyer foi retirado com o eluente e colocou-se outro vazio. Ento, adicionou-se cerca de da soluo verde que estava no bquer na coluna cromatogrfica. Houve a formao de duas fases (como mostrado na figura 3). Abriu-se a torneira at que toda a soluo de mistura de carotenos (banda amarela) sasse e fechou-se a torneira. Retirou-se o erlenmeyer com a soluo de mistura de carotenos e colocou-se outro erlenmeyer para coletar a soluo de mistura de clorofilas (banda verde).

C. Anlise cromatogrfica em camada delgada de pigmentos de um vegetal Preparou-se trs cmaras cromatogrficas com 5 mL dos solventes (fase mvel) em ensaio. ter de petrleo para a soluo amarelada. ter de petrleo para a soluo esverdeada. Mistura de ter de petrleo/acetona na proporo 80:20 para o extrato vegetal.

Preparam-se trs lminas revestidas com slica-gel (fase estacionria). Em cada uma das lminas foram aplicadas as trs solues com o auxlio de um capilar. Mergulhou-se ligeiramente a lmina no eluente de modo que a zona onde se encontravam os trs pontos no ficasse submersa. Na cromatografia da soluo esverdeada houve separao do verde mais escuro do mais claro. O verde mais escuro foi arrastado para cima medida que o eluente subia, enquanto o verde mais claro permaneceu onde se tinha aplicado a soluo com o auxlio de um capilar. Na cromatografia da soluo amarelada no houve separao de tonalidades da cor amarela, observou-se apenas um pequeno aumento da mancha amarela onde se tinha aplicado a soluo com o auxlio de um capilar. Na cromatografia da soluo extrato vegetal houve separao da cor verde da cor amarela. A cor amarela foi arrastada para cima medida que o eluente subia, enquanto a cor verde permaneceu onde se tinha aplicado a soluo com o auxlio de um capilar (como observado na figura 4).

Figura 4: cromatografia em camada delgada da soluo verde (extrato vegetal). Fonte: prpria.

RESULTADOS E DISCUSSO
Foi necessrio bater suavemente nas paredes da coluna enquanto durava a sedimentao do adsorvente para que este se compactasse adequadamente objetivando a no formao de borbulhas e evitando que a se secasse a slica G. Assim foi evitado o aparecimento de rachaduras na coluna, o que prejudicaria a separao cromatogrfica. Na cromatografia da soluo esverdeada o verde mais escuro (clorofila ) se concentrou na parte superior da placa devido sua menor polaridade, assim sendo adsorvido menos fortemente, permanecendo menos tempo na fase estacionria. Enquanto o verde mais claro (clorofila ) permaneceu onde tnhamos aplicado a soluo com o auxlio de um capilar, devido sua maior polaridade, assim sendo adsorvido mais fortemente, permanecendo mais tempo na fase estacionria. Na cromatografia da soluo amarelada no houve separao de tonalidades da cor amarela, devido apenas presena do -caroteno. Assim, no houve diferena significativa de polaridade para a diferenciao de tonalidades da cor amarela na placa de vidro com slica G. Na cromatografia do extrato vegetal a cor amarela (caroteno) se concentrou na parte superior da placa, devido sua menor polaridade, por ser adsorvido menos fortemente, permaneceu menos tempo na fase estacionria. Enquanto a cor verde (clorofila) permaneceu onde tnhamos aplicado a soluo com o auxlio de um capilar, devido sua maior polaridade, assim, sendo adsorvida mais fortemente e permanecendo mais tempo na fase estacionria.

CONCLUSO
O procedimento foi bem sucedido, pois foi possvel a observao do experimento em suas diferentes etapas, possibilitando as anlises necessrias e aplanando os conhecimentos a cerca das tcnicas e teorias utilizadas, assim, atingindo o objetivo da aula prtica.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

DEGANI, A. L. Um Breve Ensaio Sobre Cromatografia. SP, Qumica Nova na Escola, numero 17. 1998. COLLINS, C.H.; BRAGA, G.L. e BONATO, P.S. Introduo a mtodos cromatogrficos. 5 ed. Campinas: Editora da Unicamp, 1993. LOUGH, W.J. e WAINER, I.W. High Performance liquid chromatography: fundamental principles and practice. Blackie Academic and Professional, 1995. CHAVES, M.H.; Anlise de extratos de plantas por CCD: uma metodologia aplicada disciplina Qumica Orgnica. Qumica Nova, v. 20, n. 5, p. 560-562, 1997. ANDRADE, J.B.; PINHEIRO, H.L.C.; LOPES, W.A.; MARTINS, S.; AMORIM, A.M.M. e BRANDO, A.M. Determinao de cafena em bebidas atravs de cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE). Qumica Nova, v. 18, n. 4, p. 379-381, 1995. NETO, F.R.A.; CGAR em anlise de resduos. Qumica Nova, v. 18, n. 1, p.65-67, 1995.