Aula 13 O RNA mensageiro: mRNA

mRNA em Procariotas e Eucariotas. Diferentes tipos: mono-, poli- e multicistrnicos. A traduo de mRNAs policistrnicos. Regulao ps-transcricional por degradao de mRNAs. Transporte do mRNA (nucleo citoplasma). Principais diferenas entre mRNAs de Procariotas e de Eucariotas.

Molculas de RNA
DNA RNA
(Transcrito primrio ou hnRNA: heterogeneous nuclear RNA)

mRNA (molcula informativa) rRNA (molcula estrutural)

tRNA (molcula informativa e estrutural) Nucleares : U1/U2/U3 etc. Pequenos RNAs

(Eucariotas) (snRNAs: small nuclear RNAs)

Citoplasmticos
(scRNAs: small cytoplasmic RNAs)

O mRNA de Eucariotas O mRNA de Eucariotas

(AUG) (UAA/UAG/UGA)

Incio CAP
Regio 5 nocodificante (Leader) Regio codificante

STOP
Regio 3 nocodificante (Trailer) Cauda Poli(A)

Diferentes tipos de mRNA - I

1. mRNAs policistrnicos: 3000-8000 nts (tpicos em Procariotas) Regio Cistro Intercistrnica Leader (1-40 bases)
Inicio / Regio codificante / STOP

Cistro

Trailer

Inicio / Reg. codificante / STOP

2. mRNAs monocistrnicos: 150-14 000 nts (tpicos em Eucariotas) Cistro

Leader

Trailer

Inicio / Regio codificante / STOP

Cistro: (fr. e ing. cistron). Unidade gentica que preenche uma funo nica, que consiste
em servir de modelo para a sntese de uma s cadeia polipeptdica.

Diferentes tipos de mRNA - II

3. mRNAs multicistrnicos: Ex- genes ubiquitina de Eucariotas Leader Incio
1 Reg. Codif. 2 Reg. Codif. 3 Reg. Codif. 4 Reg. Codif.

Trailer STOP

As regies codificantes (geralmente iguais) nos mRNAs multicistrnicos sucedem-se sem interrupo por codes STOP e com um nico incio de iniciao (pode ter 7 ou mais unidades). O resultado uma poliprotena que depois processada por um protease especfico (modificao ps traducional), originando cadeias individuais.

Traduo de mRNAs policistrnicos- I

1. Regio intercistrnica longa (30-40 nucletidos)

Se a regio intercistrnica for maior que a area coberta pela ribossoma, este dissocia-se e reinicia a traduo independentemente no proximo cistro

Traduo de mRNAs policistrnicos - II

2. Regio intercistrnica curta (mnimo: -1, 1 ou 2 nucletidos)
Se a regio intercistrnica for menor do que a area coberta pela ribossoma, este pode fazer leitura das sequencias de iniciao e terminao simultaneamente. Assim a traduo de cistres adjacentes pode ocorrer seguidamente, sem que a ribossoma se dissociar.

Termination 1 Initiation 2

Cobre ~35 bases de mRNA

Degradao do mRNA em procariotas

A degradao de mRNAs em Procariotas decorre em dois passos: 1. Endonucleases 5 3

Andam atrs das ribossomas e clivam mRNA em fragmentos 1. Exonucleases 3 5

Degradem os fragmentos
exonuclease

endonuclease

Degradao do mRNA em leveduras

*
(Saccharomyces cerevisiae)

A Degradao de mRNAs em levedura requer: 1. Remoo da cauda poli-A 3 (desadenilao) *PABP protege contra o
(3-5 exonuclease)

decapping 5: com a desadenilao o seu efeito esta abolido.

2. Remoo do cap 5 (decapping)

Clivagem por endonuclease.

3. Actividade nucleoltica que degrada o mRNA

5-3 exonuclease XRN1, ou 3-5 por exosoma um complexo de exo- e endonucleases

(5-3 exonuclease)

O RNA mensageiro de eucariotas

SPLICING EmEm eucariotas, h uma sistema de eucariotas complexos mRNP ribonucleoproteinas mensageiro que confere aos mRNAs um maior estabilidade do que nas procariotas, e que participa no progresso da molecula mRNA desde a transcrio at a traduo.

EXPORT

TRADUO

DEGRADAO

O RNA mensageiro de eucariotas

a) b)

As modificaes dos terminais do mRNA protegem a molecula contra a degradao Sequencias internais podem activar sistemas de degradao a) Mutaes que do origem a codes de terminao podem activar sistema de degradao por nonsense-mediated decay (NMD) b) Outras sequencias podem ter um efeito destabilizante

Degradao do mRNA em eucariotas - I

Muitos mRNAs instaveis tem uma sequencia com o motif AUUUA repetido no regio 3UTR antes da cauda poli-A Esta sequencia chama-se
ARE (AUUUA)n Rich Element

A degradao de mRNAs em Eucariotas pode ser desencadeada por um motivo ARE na regio 3UTR
1) remoo da cauda poli-A 2) degradao por endonucleases

Degradao do mRNA em eucariotas - II

Um motivo IRE na regio 3UTR do mRNA da ferritina controla a sua degradao: h estabilizao do mRNA na ausencia de Ferro [Fe2+]: transporte de ferro preciso, mRNA estvel [Fe2+]: transporte de ferro j no e preciso, mRNA degradado Este e um modelo geral para a estabilizao do mRNA: A estabilidade est conferida pela inibio de sequencias destabilizantes

IRE

Iron Responsive Element

Nonsense mediated decay (NMD) 1

(S. cerevisiae & C. elegans) Mutaes que formem um codo STOP prematuro (= UAA, UAG ou UGA: mutaes nonsense) podem activar uma sistema de degradao de mRNAs no-funcionais: NMD. NMD dependente de: A) Terminao prematuro B) Elementes ajuzantes da mutao nonsense (DSE distal sequence element) que promovem a associao de nucleases

Nonsense mediated decay (NMD) 2

Em mamiferos a sistema NMD so esta activada se a mutao nonsense acontece antes do ultimo exo. O conjunto de protenas que liguem junes dos exes depois do splicing no nucleo tambem podem fazer parte da sistema de degradao por NMD depois da terminao prematura. O complexo chama-se EJC exon junction complex SPLICING NMD e EXPORTE/TRANSPORTE do mRNA esto ligados

Transporte do mRNA - I
O splicing essencial para o transporte do mRNA entre o ncleo (onde sintetizado) e o citosol (onde dirige a sntese proteica): o complexo de proteinas de splicing reconhecido pelo complexo EJC, e RNA no pode EJC: exon junction complex sair do ncleo antes do splicing.

Proteina de transporte TAP/Mex interage directamente com proteinas do poro nuclear

Transporte do mRNA - II
Em levedura, existe um transportador heterodimrico para o mRNA Em eucariotas superiores, existem duas protenas com grande homologia com as subunidades do transportador de levedura A GTPase Ran no necessria para o transporte de partculas ribonucleoproteicas O transportador interactua com as repeties FG A subunidade maior tm domnios de ligao ao RNA dependente de protenas das mRNPs

Transporte do mRNA - III

O transporte ocorre por ligao transitria sucessivas do complexo exportador (TAP/Mex) de mRNA s repeties FG (fenilalanina-glicina) das proteinas do poro nuclear (nucleoporinas) direccional: mRNA s pode sair

Tambm participam protenas SR, outras RBPs (presentes 20 nt a montante das junes de splicing), complexo de ligao ao CAP (dianteira no processo de transporte), PABP No citosol forma-se uma mRNP (ribonucleoproteina mensageiro) diferente (com eIF, PABP, e subunidades diferentes...)

mRNA: procariotas versus eucariotas

Procariotas
Menor estabilidade Sintetizado e traduzido no mesmo compartimento celular (em simultneo) Codifica em geral vrias protenas (policistrnico) Ausncia de cap e, na sua maioria de intres e de cauda poli(A)

Eucariotas
Maior estabilidade Sntese e traduo em compartimentos celulares diferentes Codifica em geral uma nica protena (monocistrnico) Presena de cap e, na sua maioria de intres e de cauda poli(A)

Vel. de transcrio 2 500 nts/ min 14 codes /s

Tempo de sntese mRNA 2,5 min

E. coli

Vel. de traduo 15 aminocidos / s

Tempo de sntese protena + 0,5 min mRNA