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Espectrofotometria
Espectro de absoro do Permanganato de Potssio
Data: 16/06/2010
Determinao de Ferro em amostra farmacutica
Data: 30/06/2010
Lucas Oliveira Mota Santos
Lucas de Jesus Ferreira
Rafaela Vaz Pereira da Silva
Salvador
2010.1
1 OBJETIVOS DO EXPERIMENTO
2 INTRODUO TERICA
A espectrofotometria uma tcnica analtica que utiliza a luz para medir a concentrao
de espcies qumicas. Este mtodo analtico baseia-se na interao (absoro e/ou emisso) da
matria com a energia radiante, ou seja, radiao eletromagntica quando os eltrons se
movimentam entre nveis energticos (a partir da absoro luminosa, a energia da espcie
aumentada e h promoo deste para um estado excitado que possui maior energia que o seu
estado fundamental). Uma vez que diferentes substncias tm diferentes padres de absoro,
a espectrofotometria permite-nos, por exemplo, identificar substncias com base no seu
espectro. Permite tambm quantific-las, uma vez que a quantidade de luz absorvida est
relacionada com a concentrao da substncia.
Nas aplicaes espectrofotomtricas, quando se usa energia monocromtica (de uma
s cor) em um simples comprimento de onda (), a frao de radiao absorvida pela soluo,
ignorando perdas por reflexo, ser funo da concentrao da soluo e da espessura da
soluo. Portanto, a quantidade de energia transmitida diminui exponencialmente com o
aumento da espessura atravessada Lei de Lambert e o aumento da concentrao ou da
intensidade de cor da soluo Lei de Beer. A relao entre energia emergente (I) e energia
incidente (I0) indica a transmitncia (T) da soluo que deve estar entre 0 e 1 (T=I0/I). Em
espectrofotometria, utiliza-se a absorbncia (A) como a intensidade de radiao absorvida
pela soluo que diretamente proporcional a concentrao c da espcie absorvente na
amostra. Para os parmetros supracitados, temos a formulao da lei de Lambert-Beer:
A= - log(Io/I) = bc
Na espectrofotometria, a fonte de radiao emite at a regio ultravioleta do espectro.
Desta radiao selecionam-se comprimentos de onda definidos que constituem bandas, com
largura menor que 1nm. O instrumento utilizado para este procedimento o
espectrofotmetro.
O espectrofotmetro um aparelho que faz passar um feixe de luz monocromtica
atravs de uma soluo, e mede a quantidade de luz que foi absorvida e a luz transmitida por
essa soluo. Usando um prisma (difrator), o aparelho separa a luz em feixes com diferentes
comprimentos de onda. Para se obter informao sobre a absoro de uma amostra, ela
inserida no caminho ptico do aparelho. Ento, luz UV e/ou visvel em certo comprimento de
onda (ou uma faixa de comprimentos de ondas) passada pela amostra o que nos permite
sabe a quantidade de luz absorvida ou transmitida pela amostra em determinado comprimento
de onda.
Para determinao da concentrao de um soluto em uma amostra por
espectrofotometria, temos a comparao da absorbncia da amostra com uma soluo padro,
na qual j conhecida a concentrao do soluto. Em geral, utilizada uma soluo-padro
com diferentes concentraes (padres de refermcia), que tem sua absorbncia determinada.
3 PARTE EXPERIMENTAL
3.1 Espectro de absoro do Permanganato de Potssio
3.1.1 Material utilizado
a) Bqueres;
b) Pipeta volumtrica (5,00 mL);
c) Balo volumtrico (100,00 mL);
d) Cubetas de plstico;
e) Espectrmetro ANALYSER modelo 850 M;
f) 5,00 mL de permanganato de potssio (500 ppm);
g) 10,00 mL de cido sulfrico (4 M);
3.1.2 Procedimento
a) Preparo da soluo:
Inicialmente, tomou se uma alquota de 5,00 mL da soluo estoque de
permanganato de potssio (500 ppm). Em seguida, adicionou se 10,00 mL de cido
sulfrico (4 M), para mantermos o meio cido e obteno do estado de oxidao desejvel do
permanganato de potssio, e completou se com gua a soluo dentro de um balo
volumtrico (100,00 mL). Posteriormente, foi calculada a concentrao da soluo em ppm
(ppm KMnO4).
h) Espectrofotmetro;
i) gua destilada;
j) 5,00 mL da soluo de ferro II (100 ppm);
k) 2 gotas de azul de bromofenol;
l) 40 gotas de citrato de sdio (25%);
m)1,00 mL de hidroxilamina (10%);
n) 2,00 mL de ortofenantrolina (0,3%);
o) Medicanto indicado (COMPLETAR)
3.2.2 Procedimento
a) Ajuste do pH:
Inicialmente, foi transferida 5,00 mL da soluo estoque de ferro II (100 ppm) para um
bquer de 50,00 mL e foi colocada 2 gotas de azul de bromofenol. Em seguida, foi
acrescentado citrato de sdio (25%), para que seja diminuda a acidez do meio e seja formada
uma soluo tampo, e observa se a soluo at que ela mude de colorao. Deve ser
anotado o volume (V) de citrato encontrado no teste para uso em procedimento posterior.
b) Preparo dos padres:
Aps o procedimento supracitado, tomou se seis bales volumtricos de 100,00 mL
e numerados conforme indicado em tabela. Em seguida, usou se uma bureta de 25,00 mL e
foi colocada em cada um dos bales o volume correspondente da soluo de ferro II.
Posteriormente, foi acresentada 1,00 mL de hidroxilamina (10%), para garantir a reduo do
ferro para ferro II, o volume (V) do citrato de sdio e 2,00 mL de ortofenantrolina (0,3%).
Preparada a amostra do medicamento, tomou se trs alquotas de 10,00 mL da soluo
amostra (a) para bales volumtricos de 100,00 mL (a i) e foram seguidos os passos antes
citados (adio de hidroxilamina, citrato de sdio e ortofenantrolina).
c) Medidas das absorvncias:
Ao final, realizou se a leitura das absorvncias (A) dos padres e amostras com um
par de cubetas selecionadas e no comprimento de onda de 510 nm (comprimento de onda de
mxima absorvncia do ferro). Logo aps, usou se uma das cubetas com o branco (B) para
ajuste das medidas espectrofotomtricas e uma outra cubeta foi cheia com as solues (S). Em
seguida, foram anotados os dados e anexados em tabela indicada.
3.2.3 Fluxogramas
4 RESULTADOS E DISCUSSES
4.1 Tabelas
Tab 1: Espectro de absoro do KMnO4
Comprimento de
400
onda
(nm)
410
420
430
440
450
460
Absorvncia (A)
0,021
0,010
0,014
0,011
0,016
0,028
0,046
Transmitncia (T%)
95,2796164
97,7237221
96,82778563
97,49896377
96,38290236
93,75620069
89,94975815
Comprimento de
470
onda
(nm)
480
490
500
510
520
530
540
550
560
570
580
590
600
610
620
630
640
650
660
670
680
690
700
Absorvncia (A)
0,075
0,108
0,159
0,208
0,257
0,302
0,317
0,306
0,298
0,197
0,184
0,092
0,046
0,036
0,034
0,031
0,028
0,024
0,022
0,020
0,018
0,012
0,010
0,008
Transmitncia (T%)
84,13951416
77,98301105
69,3425806
61,94410751
55,33501092
49,88844875
48,19477976
49,4310687
50,35006088
63,53309319
65,46361741
80,90958992
89,94975815
92,04495718
92,46981739
93,11078755
93,75620069
94,62371614
95,06047937
95,4992586
95,94006315
97,27472238
97,7237221
98,1747943
Volume de Ferro
Concentrao
(mL) (100 mg/L) de Ferro (mg/L)
1,00
1,00
2,00
2,00
3,00
3,00
4,00
4,00
5,00
5,00
branco
0,00
1,930570506
1,941334769
1,935952637
Transmitnc
ia (%)
60,39486294
40,27170343
27,28977783
22,02926463
14,75706533
100
42,46195639
42,26686143
42,3642966
Absorvncia
0,219
0,385
0,564
0,657
0,831
0
0,372
0,374
0,373
, ento:
, em porcentagem
Pelo grfico acima verificamos que o permanganato de potssio absorve a luz visvel
com mais intensidade no comprimento de onda de 530 nm. Este valor est prximo do
indicado na literatura (520 nm) tendo um erro relativo de apenas 1,92%, sendo assim o valor
encontrado est coerente com o indicado na literatura.
Quando uma radiao luminosa incide sobre o permanganato de potssio, o on
permanganato, parte da molcula responsvel pela absoro da luz (cromforo), absorve
determinados comprimentos de onda da luz branca e transmite o restante, que pode ser
detectado pela viso fazendo com que o composto parea colorido. Porm os olhos detectam
no os comprimentos de onda que so absorvidos e sim os transmitidos. A cor observada
conhecida como a cor complementar da cor absorvida com maior intensidade. No caso do
permanganato de potssio, como ele absorve mais na faixa de 520 550 nm (cor amareloverde), ele parece violeta, cor complementar do amarelo-verde.
O terceiro grfico foi escolhido em detrimento dos demais porque apresenta o melhor
coeficiente de correlao (r = 0,9964).
Pode-se notar ento que a ausncia dos ltimos pontos no grfico torna a disposio
dos demais mais linear, ou seja, esse fato indica que o aumento da concentrao do analito
leva a uma perda de linearidade no comportamento da absorvncia em relao concentrao.
Esse desvio j era esperado, pois em solues mais concentradas, as molculas do soluto
passam a influenciar mais umas s outras devido sua maior proximidade e,
conseqentemente, suas propriedades sofrem pequenas modificaes, o que inclui a mudana
na absorvncia esperada.
4.3.2 Clculo da concentrao de ferro no balo volumtrico pela curva analtica
Partindo-se da equao de calibrao
e isolando a
concentrao, temos:
Logo,
, logo
. Tomando-se o primeiro
para 500 ml (250 vezes) e em seguida uma alquota de 10,00 ml da soluo diluda foi
novamente diluda para 100,0 ml (10 vezes), ou seja,
vezes.
4.3.5 Teste Q
95% de confiana o valor de Q para 3 medidas de 0,970. De posse dos valores de
mnimo (
) e de mximo (
Como os dois extremos esto dentro do nvel de confiana aceitvel, podemos inferir
que o valor localizado entre eles tambm est no intervalo de confiana, assim, C 3 no deve
ser descartado.
Como os dois extremos esto dentro do nvel de confiana aceitvel, podemos inferir
que o valor localizado entre eles tambm est no intervalo de confiana, assim, C 3 no deve
ser descartado.
4.3.9 Comentrios
A complexao de ons metlicos est geralmente associada ao aparecimento de uma
cor, constituindo, portanto, uma etapa importante na espectrofotometria uv-visvel, j que a
mesma se fundamenta no desenvolvimento proporcional de coloraes numa certa gama de
concentraes em que seja vlida a Lei de Beer (este fato permite a quantificao de ons
metlicos atravs do mtodo da curva de calibrao). O objetivo principal desta etapa a
formao do complexo vermelho alaranjado que se forma entre o ferro (II) e a
ortofenantrolina.
Iniciou-se o experimento com o ajuste de pH, pois necessrio prover uma faixa ideal
para a reao do Fe2+ com a ortofenantrolina. A soluo de Fe deve ser cida para evitar que o
mesmo precipite na forma de hidrxido (impossibilitando a determinao da quantidade total
de ferro da amostra), mas no to cida de forma que no forme o complexo. Por isso, o cido
sulfrico acrescentado para acidificar o meio evitando a precipitao do ferro em hidrxido
e o citrato de sdio, para diminuir um pouco a acidez (ajustando o pH na faixa adequada para
a reao) e formar uma soluo tampo para que no haja variaes bruscas no pH e que este
permanea na faixa ajustada. O complexo, uma vez formado, muito estvel. No entanto,
necessrio utilizar um excesso de agente redutor, no caso, a hidroxilamina. O objetivo de sua
adio foi deslocar o equilbrio Fe3+ Fe2+ para direita, acarretando assim no estado de
oxidao II para todo o ferro presente, e, conseqentemente, sua reao com a
ortofenantrolina. Esperou-se 15 minutos para garantir que a reao foi completada. O
indicador azul de bromofenol, devido sua faixa de viragem (2,5 a 4,5), usado para indicar
o pH timo da formao do complexo.
um fator cinequador para a formao do complexo que o ferro se encontre na forma
reduzida de Fe(II) para que haja ligao deste com o grupamento do cromforo. Com o uso do
cromforo, a absoro pode ser mais intensa e ir ocorrer em comprimentos de onda maiores.
Os padres so essenciais para a construo da curva analtica, que base para a
determinao das concentraes das amostras. Obtem-se tambm, atravs dos padres, o fator
de calibrao, que constitui outra alternativa para a determinao das concentraes. Para o
preparo dos padres, utilizou-se hidroxilamina, citrato de sdio e ortofenantrolina.
As vantagens de se usar a curva analtica para se determinar a concentrao de ferro
que o ajuste da melhor reta entre os pontos proporciona uma maior confiabilidade para o
resultado do que o uso do fator de calibrao. Isso porque, os erros inerentes medida de cada
ponto da curva sero balanceados, ou seja, a confiana estatstica aumenta, j que se usa um
maior nmero de dados. Fato este que no ocorre utilizando-se o fator de calibrao, pois
apenas um ponto determinar a relao linear da absorvncia com a concentrao e o erro
associado a esta medida ser propagado para as demais. Em contrapartida, o uso do fator de
calibrao requer a preparao de apenas um padro, reduzindo assim o tempo e o custo da
anlise, diferentemente do que ocorre na curva analtica, onde necessria a preparao de
diversos padres nas mesmas condies da amostra.
A sensibilidade de um mtodo espectrofotomtrico (ou fotomtrico) governada pela
absortividade molar da espcie absorvente.
Os fatores que podem mudar a absortividade molar da espcie absorvente so:
probabilidade de transio;
comprimento de onda da radiao incidente ();
natureza solvente;
5 CONCLUSO
A realizao do experimento completo, de forma geral, pode ser entendido como:
utilizando um espectrofotmetro, obter a o espectro de absoro do permanganato de potssio
e atravs de padres, determinar a concentrao de uma soluo de estoque de ferro.
Ao comparar a curva analtica e o fator de calibrao para determinao da
concentrao de determinada substncia em uma amostra, verificou-se que o primeiro
procedimento tem uma confiana estatstica maior, uma vez que se usa um maior nmero de
dados. Em contrapartida, o uso do fator de calibrao requer a preparao de apenas um
padro, reduzindo assim o tempo e o custo da anlise. A escolha do mtodo far-se- de acordo
com a necessidade que surgir.
Pode-se inferir que houve uma concordncia entre o valor mdio obtido e o valor
rotulado apenas para o clculo de concentrao tendo por base a curva analtica (determinada
pelos padres), j que o desvio relativo encontrado (7,69%) inferior a 10%, estatisticamente
considerado o nvel de tolerncia, o que j era esperado, afinal como se trata de um
medicamento, a concentrao do princpio ativo deve estar prxima do valor rotulado. Apesar
do desvio encontrado pelo clculo de concentrao tendo por base o fator de calibrao ser
alto, em torno de 17,31%, isso no surpreende, por conta da baixa confiana estatstica do
procedimento. Uma provvel explicao para tais desvios o no cumprimento das instrues
rotuladas de proteger o medicamento da luz e umidade e conservar entre 15 e 30 C.
Como forma de exemplificao da anlise quantitativa por mtodos pticos, pode-se
dizer que tanto a obteno do espectro do permanganato de potssio quanto a determinao da
concentrao de ferro em amostra farmacutica foram conduzidas de forma satisfatria,
levando concluso de que o experimento pode ser considerado como bem-sucedido.
6 REFERNCIAS
F. MAIA IND. E COM. Ficha de Informaes de Segurana de Produtos Qumicos:
Ortofenantrolina.
Disponvel
em:
<http://www.cpact.embrapa.br/fispq/pdf/
Ortofenantrolina.pdf>. Acesso em 30 jun. 2010, 06:39:27.
HARRIS, D.C., Anlise Qumica Quantitativa, 5 Ed., LTC Editora, Rio de Janeiro, 2001.
Pg 266, 269, 402-406.
MERCK. Ficha de Informaes de Segurana de Produtos Qumicos: Azul de
Bromofenol.
Disponvel
em:
<http://www.cpact.embrapa.br/fispq/pdf/Azulde
Bromofenol.pdf>. Acesso em 30 jun. 2010, 06:31:32.
MERCK. Ficha de Informaes de Segurana de Produtos Qumicos: Hidroxilamina.
Disponvel em: <http://www.cpact.embrapa.br/fispq/pdf/Hidroxilamina.pdf>. Acesso em 30
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SKOOG, D.A.; WEST, D.M.; HOLLER, F.J; STANLEY, R.C. Princpios de Qumica
Analtica. 1 Ed. So Paulo: Thomson, 2006. Pg 520-521, 750.
UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL. Espectrofotometria. Disponvel
em: < http://www.ufrgs.br/leo/site_espec/espectrodeantipiril.html>. Acesso em 15 jun. 2010,
15:52:24.
VETEC QUMICA FINA. Ficha de Informaes de Segurana de Produtos Qumicos:
Citrato de Sdio. Disponvel em: <http://www.cpact.embrapa.br/fispq/pdf/Citratode
Sodio.pdf>. Acesso em 30 jun. 2010, 06:35:41.
VOGEL, A. I. Anlise Inorgnica Quantitativa. 4 Ed. Rio de Janeiro: Editora Guanabra
Dois, 1981. Pg 552.
VOGEL, A. I. Anlise Qumica Quantitativa, 6 Ed. Rio de Janeiro: LTC Editora, 2002. Pg
189, 367.